灰绿藜RNA提取方法及在cDNA文库构建中的应用

目的:为分离灰绿藜耐盐相关新基因,构建叶片cDNA文库,探索从盐生植物中提取高质量RNA的方法。方法:以灰绿藜叶片为材料,应用RNAPlant Reagent法(Tiangen)、Plant RNA purification Reagent法(Invitrogen)、UNIQ柱式总RNA试剂盒提取法(Sangon)、SDS-LiCl法、TRIZOL试剂法(Invitrogen)等进行总RNA的提取,并构建其全长cDNA文库和抑制消减文库。结果:RNA Plant Reagent法、Plant RNA purification Reagent法和UNIQ柱式总RNA试剂盒提取法获得的RNA完整性均不好;SDS-LiCl法提取的RNA完整性好(28S条带亮度是18S的2倍、条带锐利清晰)、纯度高(A280/A260为1.89±0.03,A260/A230为2.23±0.02),适合用于直接反转录及构建全长cDNA文库,并获得成功;TRIZOL试剂法简单快捷,产率高(2724±82μg/g),完整性较好,可经mRNA纯化后用于抑制消减文库的构建并获得成功。结论:建立了用于构建高质量cDNA文库的灰绿藜RNA的制备方法。

4种榕树总RNA提取方法的比较

用Trizol法、SDS-LiCl法、改良CTAB法分别对对叶榕(Ficus hispida)、聚果榕(F.racemosa)、高榕(F.altissima)、苹果榕(F.oligadon)4种榕树叶片提取总RNA.通过紫外吸光值及甲醛变性凝胶电泳检测,结果显示:Trizol法只适合于对叶榕总RNA的提取,在其余3种榕树中不能提得;SDS-LiCl法可以从除苹果榕外的其余3种榕树中提取到总RNA,但是质量和产量都不高,有比较明显的降解;改良CTAB法对4种榕树的总RNA提取效果都比较好,通过northern杂交检验,杂交条带清晰,说明RNA质量达到了后续杂交实验的要求.另外,改良CTAB法在提取RNA的同时还可以得到较好质量的DNA.改良CTAB法简单、经济,适合于榕树总RNA的大量提取,并可实现RNA,DNA的同时提取.