蛋白质复合体非变性凝胶电泳技术及其应用新进展

非变性凝胶电泳技术是研究蛋白质复合体的强有力工具。重点介绍了蓝绿温和非变性凝胶电泳(BN-PAGE)技术的原理和特点,比较了由BN-PAGE衍生的蓝色温和琼脂糖凝胶电泳、清澈温和非变性凝胶电泳(CN-PAGE)和高分辨清澈温和非变性凝胶电泳(HrCN-PAGE)技术的差异和适用范围,并概括地介绍了这些技术在植物蛋白质复合体研究中应用的新进展。

SDS-PAGE凝胶电泳对驴皮胶及常见伪品胶中的蛋白分析研究

目的:研究驴皮胶及常见伪品胶马皮胶和牛皮胶的蛋白凝胶电泳行为。方法:自制3种皮胶,计算出胶率,BCA蛋白浓度测定试剂盒测定其蛋白含量,计算上样量,使上样量为20~30μg。垂直电泳仪进行SDS-PAGE凝胶电泳,采用考马斯亮蓝及银染法显色。结果:3种皮胶的凝胶电泳行为相似,蛋白成分主要集中在分子量大于25 kDa段上,银染法灵敏度更高,可显示较多条带。结论:3种皮胶分子量分布宽泛,具有共同的条带,进一步可用多肽蛋白质谱鉴定技术对各混合物组分进行更深入分析。

棉叶总蛋白提取及SDS-PAGE电泳的改良

对棉花叶片总蛋白的几种提取方法及影响蛋白定量和SDS-PAGE电泳的因素进行了比较,确立了一套适用于棉花蛋白提取、定量、凝胶制备、电泳、脱色以及干胶制备的方法。发现利用25mmol·L1,pH8.0Tris-HCl缓冲液提取的棉花叶片总蛋白,提取效率高,蛋白齐全。采用改良后的棉花SDS-PAGE电泳方法—改良丙酮沉降法,电泳结果显示,条带清晰、数量多、分辨率高。

巴西橡胶树橡胶粒子蛋白质的16-BAC/SDS-PAGE双向电泳及质谱分析

【目的】分析巴西橡胶树(Hevea Brasiliensis Müll.Arg.)橡胶粒子的蛋白质构成,探索未知的橡胶粒子蛋白质。【方法】采用16-BAC/SDS PAGE双向电泳分离橡胶粒子蛋白质,采用MALDI/TOF-TOF质谱技术进行蛋白质鉴定;此外,利用磺基异硫氰酸苯酯(SPITC)化学辅助质谱测序法进行肽段的从头测序,获得未知蛋白质肽段的氨基酸序列。通过搜索橡胶树胶乳转录组测序获得的EST数据库,获取已知部分氨基酸序列蛋白质的全序列,或通过部分肽段获取为未知蛋白质编码的EST序列。【结果】获得了橡胶粒子蛋白质的16-BAC/SDS-PAGE双向电泳图谱,鉴定了17个橡胶粒子蛋白质;获得1个小橡胶粒子蛋白(small rubber particle protein,SRPP)亚家族成员SRPP(gi|37622210)的完整氨基酸序列以及1个橡胶延伸因子(rubber elongation factor,REF)亚家族新成员(hbREF2)的C端87个氨基酸残基序列,此蛋白质的氨基酸序列与已知的REF(gi|38122474)具有高度的相似性。【结论】采用16-BAC/SDS-PAGE双向电泳有效地分离了橡胶粒子蛋白质,展现了橡胶粒子蛋白质的相对含量,研究结果表明构成橡胶粒子的主要蛋白质组分是REF和SRPP亚家族蛋白质。橡胶粒子的蛋白质组分的全面鉴定,将有助于揭示橡胶粒子的生物学功能。

SDS-PAGE凝胶电泳在鉴别水解蛋白掺假液态乳中的应用

将不同水解度的水解蛋白按不同比例添加到液态乳中,总蛋白质量分数保持不变,其SDS-PAGE凝胶电泳图中相应电泳条带颜色较空白液态乳浅,宽度较空白液态乳窄,表明SDS-PAGE凝胶电泳法能对以水解蛋白代替乳蛋白进行有效鉴别。将水解蛋白按不同比例添加到合格液态乳中以提高其蛋白质量分数,其电泳图的相应电泳条带颜色深浅与宽度均与空白液态乳一致,表明SDS-PAGE凝胶电泳法能对添加水解蛋白以提高乳蛋白质量分数进行有效鉴别。

SDS-PAGE凝胶电泳法对不同种鹿茸蛋白质差异化研究

目的:利用电泳方法研究市场上药典规定品种的鹿茸饮片及其混淆品中蛋白质的差异,为鹿茸的免疫鉴定技术研究提供研究依据。方法:采用蛋白溶解液法提取各鹿茸蛋白,以牛血清蛋白为对照,利用Bradford法测定鹿茸水溶性蛋白的浓度,利用SDS-PAGE凝胶电泳法分析花鹿茸、马鹿、新西兰赤鹿及驯鹿的蛋白差异。结果:用7.5%分离胶系统分离花鹿茸、新西兰马鹿、马鹿及驯鹿的水溶性蛋白,四者蛋白条带有差异。结论:利用SDSPAGE凝胶电泳法考察不同品种鹿茸的蛋白差异,为不同品种鹿茸的定性研究提供依据和研究基础。

几种寄生虫抗原组分的SDS-PAGE电泳比较分析

通过提取制备猪带绦虫、猪囊尾蚴虫体、猪囊虫囊液、多房型棘球绦虫、肝片吸虫、细颈囊尾蚴、细颈囊尾蚴囊液和羊绦虫等 8种寄生虫抗原 .运用SDS PAGE电泳法比较各种抗原的蛋白质的组成 ,不连续SDS PAGE电泳结果显示猪带绦虫、猪囊尾蚴虫体、猪囊虫囊液、多房型棘球绦虫、肝片吸虫、细颈囊尾蚴、细颈囊尾蚴囊液和羊绦虫等几种抗原的蛋白质在凝胶中分别有 31,2 3,18,17,2 1,2 2 ,8和 2 4条带 ,分子量在 13kD～ 134kD之间 .8种抗原的电泳带之间既有相似性又有特异性 ,其抗原的共同蛋白质亚基带的分子量为 :6 3kD ,38kD和 2 4kD .

SDS-PAGE凝胶电泳法与田间种植法鉴定辣椒种子纯度的相关性研究

以"奥新早帅"辣椒种子为试材,采用SDS-PADE凝胶电泳与田间种植鉴定2种方法鉴定24份样品纯度。结果表明:SDS-PAGE凝胶电泳与田间种植鉴定的回归方程为:y=7.2818+0.946x,相关系数r=0.851,二者结果显著相关。说明SDS-PAGE凝胶电泳法鉴定"奥新早帅"辣椒种子纯度是可行的,而且是可靠的。

子芩与枯芩可溶性蛋白质SDS-PAGE电泳分析

目的比较子芩和枯芩的蛋白质表达差异,为探索黄芩生理过程中的关键蛋白质和导致枯朽发生的标志性蛋白质提供依据。方法采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,对子芩和枯芩可溶性蛋白质进行比较分析。结果子芩和枯芩可溶性蛋白质电泳图谱共分离出24条蛋白质带,不同的电泳谱带在数目、迁移率及谱带的强度方面有较大的差异。子芩和枯芩蛋白质共同表达量相当的条带14条,占58.33%,另有一蛋白质条带在枯芩染色较深,而在子芩染色较浅,有差异的条带10条,差异条带占41.67%。结论子芩和枯芩的蛋白质表达有明显的差别。

储藏微环境下玉米谷蛋白的SDS-PAGE电泳分析

通过SDS-PAGE电泳技术,分析不同品种的玉米在不同温湿度微环境下储藏60d和120d谷蛋白的变化,并运用Bandscan3.0软件对电泳图谱进行分析处理,探究玉米谷蛋白的变化规律。结果表明:随着储藏时间的延长,玉米谷蛋白中大分子量亚基的含量下降,小分子量亚基的含量上升;不同储藏微环境下的温湿度会影响玉米谷蛋白亚基变化,低温低湿条件下亚基分子量变化幅度小,而随着温湿度的上升,大分子量亚基含量逐渐下降,小分子量亚基含量逐渐增加。对比四种储藏微环境,在15℃和50%RH的条件下,谷蛋白亚基的变化最小,最有利于玉米品质的保持。

旋毛虫与伪旋毛虫肌幼虫抗原的SDS-PAGE和双向电泳分析

目的鉴定旋毛虫(Trichinella spiralis,T1)与伪旋毛虫(T.pseudospiralis,T4)肌幼虫的差异蛋白。方法应用SDS-PAGE和双向电泳(two-dimensional gel electrophoresis,2-DE)对T1、T4肌幼虫的可溶性抗原与培养24h的ES抗原的蛋白组分进行分析。结果SDS-PAGE显示,T1肌幼虫可溶性抗原有22条蛋白带(221.62kDa～14.88kDa),其中6条为T1特异性蛋白带(59.72、44.37、23.66、22.36、18.26、16.34kDa);T4可溶性抗原蛋白有18条带(185.28kDa～14.27kDa),其中4条为T4特异性蛋白带(132.60、119.30、35.26、31.02kDa)。T1的ES抗原有10条蛋白带(113.21kDa～14.37kDa),T4的ES抗原有9条蛋白带(104.71kDa～14.51kDa),T1、T4肌幼虫ES抗原的蛋白带均不相同。2-DE显示,T1可溶性抗原有193±12个蛋白点,分子量主要为11kDa～22kDa、25kDa～64kDa及100kDa～144kDa,所对应的等电点(pI)分别为4.7～8.2、4.5～6.5及5～7;T4可溶性抗原有175±9个蛋白点,分子量主要为12kDa～21kDa及25kDa～90kDa,所对应的pI分别为4～9.5与4.5～9.6。T1的ES抗原具有82±6个蛋白点,分子量主要为13kDa～16kDa、18kDa～22kDa及40kDa～55kDa,所对应的pI分别为4～7、3.8～6.2及5～9;T4的ES抗原具有69±5个蛋白点,分子量主要为10kDa～15kDa、17kDa～25kDa及29kDa～55kDa,所对应的pI分别为4.7～6.5、4.6～6及5～7。结论旋毛虫肌幼虫可溶性抗原及ES抗原的蛋白组分与伪旋毛虫的明显不同。

不同浓度和梯度的SDS-PAGE胶对双向电泳中蛋白分离的影响

目的:探讨双向电泳中不同浓度和梯度的SDS-PAGE胶对肠道菌蛋白分离效果的影响。方法:制备弗氏2a志贺菌2457T野生株37℃晚期全菌蛋白质样品,进行不同浓度及梯度的SDS-PAGE,研究分离肠道菌蛋白最适宜的SDS-PAGE胶浓度。结果:获得了3个不同浓度(10%、12.5%和15%)的均一胶电泳图谱和3个不同梯度(4%～15%、10%～20%和12%～14%)的电泳图谱,并比较了这些图谱的分离效果;同时,为了分析肠道菌天然表达蛋白的相对分子质量范围,鉴定了8个极端相对分子质量蛋白。结论:对于肠道菌蛋白质的分离来说,12.5%的均一胶或12%～14%的梯度胶较为适宜。

黄连可溶蛋白SDS-PAGE电泳鉴别

目的对雅连、峨眉野连、云连及6个不同产地的味连进行电泳鉴别。方法采用SDS-PAGE电泳方法。结果味连与雅连具有显著差异,味连与峨眉野连之间几乎无差异,不同产地的味连差异小,云连仅一条极弱的条带。结论SDS-PAGE电泳可以作为黄连质量控制的鉴别依据。

七种水蛭组织细胞可溶性蛋白SDS-PAGE电泳分析

采用垂直平板十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)对我国7种常见水蛭的组织细胞可溶性蛋白成分进行电泳图谱特性分析。结果表明,7种水蛭组织细胞中可溶性蛋白的SDS-PAGE图谱中多数条带相同,但也存在差异。其中日本医蛭(Hirudo nipponia Whitman)蛋白条带最多,达28个,并且吸血蛭类的蛋白条数要明显大于非吸血蛭类,而3种不同地理分布的菲牛蛭(Hirudi-naria manillensis Lesson)间表达蛋白图谱无明显差异。该研究为在分子水平分析我国水蛭不同种类、同种不同地理分布及不同食性间的差异积累了新的生物学数据,对其分类和药材鉴别提供了参考依据。

一种改进的双色SDS-PAGE凝胶和可视化上样电泳方法

SDSPAGE电泳是蛋白质分析和研究中的重要高效手段.由于分离胶、浓缩胶与电泳缓冲液以及空气都是无色透明的物质,在胶的制作和点样过程中仅仅通过浓缩胶相与缓冲液水相或空气相对光的折射来准确判断点样孔的位置并进行点样操作,因而比较困难.该文介绍1种在浓缩胶中添加颜色染料,使浓缩胶显现颜色,以此可视化区分浓缩胶中点样孔(井)位置的方法,可以准确而高效完成点样操作,使传统的SDSPAGE点样过程通过折光性来判断变为可视化准确判断,提高点样效率和电泳质量.

SDS-PAGE及转移电泳鉴别纤溶酶原激活剂及其分子量测定

纤溶酶原激活剂(PA)经SDS-PAGE分离后,在凝胶中用Triton X-100取代SDS,使PA复活。在温和条件下转移到纤维蛋白板上,则纤维蛋白板上出现与PA对应的溶解带。该法不仅可以用来测定PA的分子量,鉴别PA的类别,而且灵敏度不低于溶解圈法,UK可以测到0.005IU,t-PA可以测到0.03IU。

不同细胞质雄性不育小麦中依赖钙/钙调素的蛋白激酶的SDS-PAGE电泳图谱分析

以几种新型细胞质雄性不育型小麦为材料 ,对分蘖期小麦叶片中的依赖钙 /钙调素的蛋白激酶 (Ca2 + /Ca M- PK)的 SDS- PAGE电泳图谱进行了分析 ,实验结果表明 ,不育系与保持系的蛋白激酶酶带之间存在差别 ,并且不育系之间也有差别 ,说明不育细胞质对核基因的表达也有影响 ,这可能与雄性不育有关 ,而且不育材料中存在潜在优势 。

变性梯度凝胶电泳的原理、应用及其进展

变性梯度凝胶电泳 (DGGE)主要是基于突变型和野生型核酸序列的不同而导致其变性浓度的差异 ,利用变性梯度胶进行分离。恒定变性凝胶电泳 (CDGE)、瞬时温度梯度电泳 (TTGE)和温度梯度凝胶电泳 (TGGE)是由 DGGE经改进而成。