SDS-PAGE法测定重组人红细胞生成素糖基化程度

目的建立重组人红细胞生成素 (rhEPO)糖基化程度的测定方法。方法利用聚糖酶部分酶解rhEPO ,通过SDS PAGE电泳分离酶解片段 ,鉴定rhEPO的的糖基化程度。结果rhEPON 聚糖酶部分酶解的电泳图谱 ,可以明确指示N 连接糖基化程度。

Tricine-SDS-PAGE法分析腮腺唾液蛋白

多种口腔疾病或系统性疾病的发生、发展过程中，唾液成分的质和量都可能发生改变［１］。唾液蛋白作为唾液的主要有机成分，与唾液的多种生理功能密切相关［２］。因此研究唾液蛋白对于了解机体的生理及病理状况具有重要意义。十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－...

SDS-PAGE法分析含乳饮料和乳清粉的蛋白组成和含量

利用SDS－PAGE电泳结合凝胶成像分析测定了乳清粉及含乳饮料中的酪蛋白、α－乳白蛋白(α－LA)和β－乳球蛋白(β-LG)的含量,探讨了两种乳蛋白提取方法对测定结果的影响。

SDS-PAGE法测定蒜酶相对分子质量及含量

目的采用还原型SDS-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)法测定蒜酶的相对分子质量及含量。方法建立测定蒜酶的凝胶电泳条件:分离胶12%,浓缩胶5%,初始电压80V,进入分离胶时电压调至100V,测定经提取纯化后的蒜酶和大蒜样品中蒜酶的分子质量及含量。结果通过SDS-PAGE法确定以磷酸盐缓冲液为溶剂,蒜酶供试品浓度27.2 mg/mL进行蒜酶含量和相对分子质量测定;蒜酶供试品中蒜酶平均相对分子质量50.84KDa,蒜酶供试品中蒜酶在总蛋白条带中平均相对含量为52.39%,大蒜中蒜酶在总蛋白条带中平均相对含量为6.28%。结论 SDS-PAGE法测定蒜酶含量及其相对分子质量,方法简便易行、结果准确可靠。

TRICINE-SDS-PAGE电泳法用于野生全蝎粉鉴定的研究

目的:探索不同产地野生全蝎粉通过TRICINE-SDS-PAGE电泳法鉴别的可行性。方法:用TRICINE-SDS-PAGE系统对全蝎蛋白提取液进行电泳,用Quantity One软件确定各谱带对应的蛋白质分子量。结果:四种产地的全蝎粉用TRICINE-SDS-PAGE法可获得数条分辨率较高且大体位置相当的蛋白质谱带,其对应分子量大体为:42.000,33.515,27.509,25.524,21.615,17.640,15.839,13.994,11.318,10.000,8.357 kDa。结论:TRICINE-SDS-PAGE电泳法可用于不同产地全蝎粉的真伪鉴别。

SDS-PAGE凝胶电泳法对不同种鹿茸蛋白质差异化研究

目的:利用电泳方法研究市场上药典规定品种的鹿茸饮片及其混淆品中蛋白质的差异,为鹿茸的免疫鉴定技术研究提供研究依据。方法:采用蛋白溶解液法提取各鹿茸蛋白,以牛血清蛋白为对照,利用Bradford法测定鹿茸水溶性蛋白的浓度,利用SDS-PAGE凝胶电泳法分析花鹿茸、马鹿、新西兰赤鹿及驯鹿的蛋白差异。结果:用7.5%分离胶系统分离花鹿茸、新西兰马鹿、马鹿及驯鹿的水溶性蛋白,四者蛋白条带有差异。结论:利用SDSPAGE凝胶电泳法考察不同品种鹿茸的蛋白差异,为不同品种鹿茸的定性研究提供依据和研究基础。

不同提取方法对RA外膜蛋白SDS-PAGE的影响

分别用Sds法、Sarkosyl法、PMSF法提取鸭疫里氏杆菌的外膜蛋白,经SDS-PAGE电泳,结果显示,3种方法都能提取到鸭疫里氏杆菌的外膜蛋白,但电泳条带却有一定差异;相比之下,Sds法最适于鸭疫里氏杆菌外膜蛋白的提取;几种方法提取的其他分子量外膜蛋白质是否属于鸭疫里氏杆菌的外膜蛋白抗原需要进一步研究。

用SDS-PAGE电泳法测定小分子多肽分子量的研究

以测定大分子蛋白质分子量的SDS PAGE电泳为基础 ,经改进后 ,选定 2 6%的分离胶交联度 ,在 10 %～ 2 5 %浓度范围调制各档分离胶进行试验 ,得到的标准曲线其线性相关系数r达 0 97。结果表明 ,改进后的小分子肽SDS PAGE电泳测定技术具有很高的实用价值。

三种方法测定蚯蚓脱氧核糖核酸酶(EWD_2)的分子量

目的用不同方法测定蚯蚓组织中一种新型脱氧核糖核酸酶分子量。方法采用凝胶过滤层析法、SDS-PAGE法和基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱法(MALDI-TOF)三种方法测定一种新型蚯蚓脱氧核糖核酸酶(EWD2)的分子量。结果凝胶过滤层析法、SDS-PAGE法和质谱法测定其分子量分别为62.16kD、62.08kD和69.075kD。结论EWD2为单亚基脱氧核糖核酸酶,其分子量在60-70kD。

垂直板SDS-PAGE分析尿蛋白组分及临床应用的初步研究

目的:利用垂直板SDS-PAGE法进行尿蛋白谱分析,以区分尿蛋白类型。方法:收集患者及正常人体尿液,直接做垂直板十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),用考马斯亮蓝染色,肉眼判定结果。结果:根据尿蛋白电泳图谱区分尿中含有不同分子量蛋白来判断属于肾小球性、肾小管性、混合性、溢出性及生理性蛋白尿。结论:本法分析尿蛋白组分操作简单方便、成本低、相对省时、结果直观易判定,适于推广使用。

人参蛋白四种提取方法的比较研究

通过对人参蛋白的四种提取方法(盐析法、丙酮沉淀法、聚乙二醇沉淀法、中空纤维膜过滤法)进行比较,采用SDS-PAGE电泳法、Bradford蛋白纯度检测法获得相关数据。结果表明,聚乙二醇沉淀法和中空纤维膜过滤法收率最高;中空纤维膜过滤法与盐析法纯度最好;中空纤维膜过滤法的电泳条带最完整清晰。

驴骨胶原肽制备方法的初步建立及分子量检测

旨在建立驴骨胶原肽的制备方法,并对其分子量进行检测。以牛血清白蛋白为对照品,建立多肽含量和OD650 nm值的标准曲线方程;模拟人工胃液、肠液环境,以驴骨胶原肽一级、二级酶解产物多肽含量为评价指标,在筛选胃蛋白酶和胰蛋白酶最佳酶解时间和加酶量的基础上,采用二级生物酶解技术制备驴骨胶原肽;应用SDS-PAGE法对制备的驴骨胶原肽的分子量进行检测。结果表明,建立的多肽含量和OD650 nm值标准曲线方程为:y=0.1639x-0.1496,R2=0.9989;应用胃蛋白酶进行一级酶解驴骨胶原肽的最适反应条件为:pH值在2.5~3.0,加酶量2.0%、酶解时间2.0 h;应用胰蛋白酶进行二级酶解驴骨胶原肽的最适反应条件为:pH值在7.5~8.0,加酶量2.0%、酶解时间2.5 h;经SDS-PAGE法检测,根据上述最适反应条件制备的驴骨胶原肽的分子量在10 kDa左右。研究结果为开发适合人体吸收分子量的驴骨胶原肽原料以及后续产品的研发提供了技术参考。

核糖体脱嘌呤分析法分析检测核糖体失活蛋白

针对核糖体脱嘌呤分析法经常被用来分析检测新的核糖体失活蛋白(RIP),检测了由酸性苯胺催化在RIP催化脱嘌呤位点断裂产生的核糖体rRNA片段。利用文献发表的一级动力学速度常数,计算分析了核糖体失活蛋白含量对核糖体失活蛋白催化脱嘌呤分析的敏感性,并进行了部分实验验证。实验中核糖体失活蛋白和核糖体溶液混合后进行了30 min的恒温培养,结果表明:核糖体失活蛋白脱嘌呤分析法的敏感性取决于核糖体失活蛋白催化核糖体脱嘌呤反应的速度常数。还分析了核糖体失活蛋白脱嘌呤分析中可能出现的假阳性和假阴性结果及其原因,结果表明:在核糖体失活蛋白的大规模生产中使用核糖体脱嘌呤分析法作为定量分析的手段是比较复杂和困难的,该方法应该和一些常用的经典方法例如SDS PAGE分析法联合使用,而且联合使用时两种方法的最小检测限应该相近,以避免其中之一引起的假阳性结果。

人肝癌组织中p53与HSP70相互作用的初步研究

目的 :探讨人肝癌中热休克蛋白 70 (HSP70 )与 p5 3的相互作用。方法 :用免疫组织化学染色法 ,从 12例肝癌组织中筛选HSP70与 p5 3均呈阳性表达的标本 ,并以免疫共沉淀法提取之。然后用SDS PAGE及Westernblot分析双阳性标本中两种蛋白的存在形式。结果 :用免疫组织化学法检测到 12例肝癌组织中有 3例为双阳性 ,用抗HSP70mAb免疫共沉淀的样品 ,可检测到 p5 3蛋白。用抗p5 3mAb免疫共沉淀的样品也可检测到HSP70蛋白。结论 :人肝癌中p5 3与HSP70以复合物的形式而存在 。

一种改进的小分子多肽SDS-PAGE方法

提出了一种改进的SDS -PAGE方法 .采用 0 .46mol/LTris - 0 .0 47mol/Lglycine (pH 9.5 7) + 1.0g/LSDS连续缓冲体系 ,分离胶T =15 % (C =3 % )和浓缩胶T =4% (C=3% ) 时在 3.5～ 6 8.0kD分子量范围内具有良好的线性关系 ,相关系数r =0 .94.该法操作简便分离效果好 ,使用常用的电泳试剂 。

聚乙二醇化重组人干扰素α2b的质量检测

目的 建立聚乙二醇化重组人干扰素α2b(PEG rhIFNα2b)的质量检测方法。方法 采用Wish细胞 VSV病毒系统 ,以CPE法测定干扰素的生物学活性 ,基质辅助激光解吸附飞行时间质谱法测定相对分子质量 ,反向高效液相法 (RP HPLC)测定纯度 ,溴化氰裂解 SDS PAGE法测定肽图 ,等电聚焦电泳法测定等电点 ,紫外分光光度法测定紫外吸收光谱。结果 聚乙二醇化重组人干扰素α2b的比活为 6 . 0× 10 6～ 10 . 0× 10 6IU/mg蛋白 ,相对分子质量约为 6 2 6 0 0 ,等电点在 5 . 2 0～ 6. 5 5之间 ,紫外最大吸收峰约在 2 78nm波长处。结论 所建立的检测方法可控制聚乙二醇化重组人干扰素α2b质量。

猪乳中一组高分子量蛋白质的多态性及其与泌乳性能的关系

采用SDS PAGE法对 16 2头二花脸母猪和 5 0头大约克母猪乳中一组高分子量蛋白质 (HMWP)进行了检测 ,计算了该位点基因型频率、等位基因频率和遗传多样性指数 ,并运用线性模型统计方法分析二花脸母猪该位点不同基因型与母猪泌乳性能的关系。结果表明 ,在猪种群中 ,乳中HMWP存在A (相对分子质量 14 6 80 0± 14 0 0 ) ,B ( 114 80 0± 4 0 0 ) ,C ( 10 86 0 0 )和D ( 10 14 0 0± 6 0 0 ) 4种带型 ,分别受 4个等位基因HA、HB、HC 和HD 控制。在二花脸猪乳中HMWP表现出BB、BD和DD 3种基因型 ,其频率分别为 0 6 6 6 7,0 2 716和 0 0 6 17;两个等位基因HB 和HD 频率分别为 0 80 2 5和0 1975 ;遗传多样性指数为 0 3170。大约克猪乳中HMWP表现出BB、AB和BC 3种基因型 ,其频率分别为 0 880 0 ,0 10 0 0和 0 0 2 0 0 ;等位基因HA、HB 和HC 的频率分别为 0 0 5 0 0 ,0 94 0 0和 0 0 10 0 ;遗传多样性指数为 0 1138。在二花脸猪种群中 ,不同HMWP基因型在乳糖浓度上存在显著差异 (P <0 0 5 ) ,但在乳蛋白浓度差异不显著 (P >0 0 5 )。

戊糖乳杆菌细菌素31-1的纯化

为了研究戊糖乳杆菌31-1菌株产生的细菌素的性质,采用SPSepharoseFastFlow阳离子交换树脂纯化细菌素,结果发现选用含0.1MNaCl的0.02M醋酸盐缓冲液即可洗脱下细菌素峰,比活力达到1259.84(AU/mg),是原发酵液的17倍,并且采用Tricine-SDS-PAGE法估测出细菌素的分子量大小在14.2kDa以下。

家蚕血淋巴蛋白的发育变化和BmLSP的纯化

对 1～ 5龄的家蚕幼虫血淋巴取样 ,通过十二烷基硫酸钠 -聚丙酰胺凝胶电泳(SDS -PAGE)观察并分析家蚕幼虫血淋巴主要蛋白的发育变化 ,对其中的一种主要蛋白即家蚕幼虫血清蛋白 ,通过硫酸铵沉淀、阳离子交换柱层析。

十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳定量测定苏云金杆菌δ－内毒素

十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳定量测定苏云金杆菌δ－内毒素１前言目前已研究出测定苏云金杆菌（Ｂ，ｔ．）δ－内毒素晶体蛋白含量的可靠方法。此方法首先用高ｐＨ溶液处理样品以抑制Ｂ．ｔ蛋白酶，再用聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）法，从生长基质蛋白...