改造稀有密码子提高SEA蛋白表达量

利用重叠PCR技术突变了sea基因上一个稀有密码子簇 ,将此段中稀有密码子全部更换成E .coli最常用密码子 ,得到seam 。将sea和seam 分别克隆于 7ZTS表达载体上 ,并转化JM10 9(DE3)菌株。结果表明 ,sea基因的表达十分微弱 ,而seam 基因的表达量十分高 ,约占菌体总蛋白的 15 %。表达产物在体内具有一定的抗肿瘤活性。

热处理对海参溶菌酶C端多肽的抑菌活性和结构的影响

实验优化了重组蛋白C端多肽（SjLys-C）的E. coli Rosetta（DE3）pLysS表达系统,将重组质粒pET-32a （＋）-SjLys-C转入有助于蛋白二硫键正确折叠的新表达宿主E. Coli Rosetta-GamiB（DE3）pLysS中. SDS-PAGE分析表明,重组蛋白SjLys-C在宿主中得到高效可溶表达.抑菌实验结果表明,重组蛋白SjLys-C具有较高的抑菌活性；经100℃处理40 min后,蛋白SjLys-C的抑菌活性提高.分子动力学（ MD）模拟表明, SjLys-C蛋白具有高度的热稳定性,蛋白热处理后未变性,仍维持完整的三级结构.但在热处理过程中, SjLys-C多肽的氨基酸残基随温度变化发生内部结构的重排.其中C端区、 N端区和活性区域（10~20）内氨基酸残基的柔性增加,蛋白整体构象展开,导致被包埋在内部的2个活性位点（Ser18, His48）暴露,并且它们之间的距离缩短；而活性区域（37~47）内氨基酸残基的构象调整,导致区域结构紧凑,使2个活性位点间的距离改变.

金黄色葡萄球菌肠毒素A蛋白的B细胞表位的预测

目的预测金黄色葡萄球菌肠毒素A蛋白(SEA)的B细胞表位。方法以金黄色葡萄球菌合肥乳源分离株M3基因组DNA为模板,PCR扩增SEA基因并进行序列测定与分析。应用DNAstar protean软件对SEA蛋白的二级结构、柔性、亲水性、表面可能性和抗原指数等多参数进行综合分析,预测其B细胞表位。结果 M3分离株的SEA基因全长774 bp,编码由257个氨基酸组成的相对分子量为29.67 kDa的SEA蛋白,M3分离株SEA基因与标准株的核苷酸序列与氨基酸序列同源性分别为98.7%和98.4%。SEA蛋白的优势B细胞表位位于肽链的第64～68、100～107、138～141、156～160、166～173、213～217和237～244区段。结论预测出SEA蛋白的7个优势B细胞表位,为进而克隆表达表位蛋白,制备针对SEA表位的单克隆抗体奠定了基础。