基于JNK1/AP-1信号通路探究山慈菇提取液对乳腺癌大鼠的干预效果

目的 基于c-Jun氨基末端激酶(JNK)1/激活蛋白(AP)-1信号通路分析山慈菇提取液对乳腺癌大鼠的干预效果。方法 45只大鼠选取10只作为对照组,其余35只建立乳腺癌模型,30只建模成功大鼠随机分为模型组、山慈菇提取液低剂量组、山慈菇提取液高剂量组。对照组和模型组给予生理盐水;山慈菇提取液低剂量组给予生理盐水+1 g/ml山慈菇提取液;山慈菇提取液高剂量组给予生理盐水+1.5 g/ml山慈菇提取液,各组均灌胃给药,观察大鼠的病理组织、炎症因子、微血管密度、血管内皮生长因子(VEGF)、细胞基质金属蛋白酶(MMP)-9、免疫功能指标、肿瘤体积、肿瘤质量、抑瘤率、JNK1/AP-1信号通路蛋白表达量。结果 与对照组相比,其余3组肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6、微血管密度、VEGF、MMP-9、CD3^(+)、CD4^(+)水平均显著升高,CD8^(+)、JNK1、AP-1表达量均显著降低(P<0.05);与模型组相比,山慈菇提取液低剂量组、山慈菇提取液高剂量组TNF-α、IL-6、微血管密度、VEGF、MMP-9、CD3^(+)、CD4^(+)水平、肿瘤体积、肿瘤质量均显著降低,CD8^(+)、JNK1、AP-1表达量均显著升高(P<0.05);与山慈菇提取液低剂量组比较,山慈菇提取液高剂量组TNF-α、IL-6、微血管密度、VEGF、MMP-9、CD3^(+)、CD4^(+)水平、肿瘤体积、肿瘤质量均显著降低,CD8^(+)水平、抑瘤率、JNK1、AP-1表达量均显著升高(P<0.05)。结论 山慈菇提取液可减轻乳腺癌大鼠炎症反应,抑制血管生成,遏制乳腺癌的发展,其作用机制可能与JNK1/AP-1信号通路被激活有关。

基于MEKK1/SEK1/JNK1/AP-1通路探讨三七总皂苷对4T1乳腺癌荷瘤小鼠肿瘤模型的影响

目的:通过研究三七总皂苷对4T1乳腺癌荷瘤小鼠促分裂原激活的蛋白激酶的激酶1(MEKK1)/应激激活的蛋白激酶/细胞外信号调节的蛋白激酶(SAPK/Erk激酶,SEK1)/c-Jun氨基末端激酶1(JNK1)/激活蛋白-1(AP-1)通路的影响,探讨三七总皂苷抑制肿瘤的可能机制。方法:建立4T1乳腺癌荷瘤小鼠肿瘤模型,将48只造模成功的小鼠随机分为三七总皂苷低、中、高剂量组(10,20,40 mg·kg^-1)和模型组,每组12只,三七总皂苷各剂量组腹腔注射剂量为10 mL·kg^-1,模型组给予相同剂量的生理盐水,连续给药28 d。给药结束后分离肿瘤组织、称质量、切片、匀浆等,采用脱氧核苷酸末端转移酶(TdT)介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)染色检测肿瘤细胞凋亡;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肿瘤组织MEKK1,SEK1,JNK1,AP-1 mRNA表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测4T1乳腺癌荷瘤小鼠肿瘤组织MEKK1,SEK1,JNK1,AP-1蛋白表达。结果:与模型组比较,三七总皂苷中、高剂量组的肿瘤质量明显下降(P<0.05);肿瘤细胞凋亡数量随三七总皂苷剂量的升高明显升高(P<0.05);三七总皂苷中、高剂量组肿瘤组织中MEKK1,SEK1,JNK1,AP-1 mRNA和蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论:三七总皂苷对4T1乳腺癌荷瘤小鼠肿瘤模型具有抑制作用,其作用机制可能与激活MEKK1/SEK1/JNK1/AP-1信号通路有关。

天麻钩藤饮含药血清对MPP^+诱导PC12细胞凋亡JNK通路的影响

目的:观察天麻钩藤饮含药血清对1-甲基-4-苯基-吡啶离子(1-methyl-4-phenyl pyridinium,MPP^+)诱导的PC12细胞凋亡的影响,并且探讨其是否通过c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路发挥神经保护作用。方法:将32只SD大鼠随机分为空白组、天麻钩藤饮低、中、高剂量组,每组8只。天麻钩藤饮按照5.7,11.4,22.8 g·kg-1灌胃,空白组灌胃等体积生理盐水,采血制备空白和含药血清。PC12细胞常规培养并分为空白组、模型组、天麻钩藤饮含药血清低、中、高剂量组,空白组和模型组加空白血清,其他3组加10%的天麻钩藤饮含药血清,孵育30 min后,模型组和含药血清组再加500μmol·L^(-1)MPP^+共孵育48 h后收集细胞,采用Cell Titer 96Aoueous MTS Reagent powder(MTS法)检测细胞存活率。后续实验分为5组,即:空白组,MPP^+组,MPP^++含药血清高剂量组,MPP^++SP600125组,MPP^++含药血清高剂量+SP600125组,采用Annexin VFITC/PI双染色法检测细胞凋亡,分光光度法检测细胞半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)活性,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测JNK,p-JNK,c-Jun,p-c-Jun蛋白表达水平。结果:与空白组比较,模型组细胞活力明显降低(P<0.05);与模型组比较,10%的天麻钩藤饮低、中、高剂量含药血清组细胞活力显著增加(P<0.05)。后续试验中,与空白组比较,MPP^+组细胞凋亡率,Caspase-3活性,p-JNK和p-c-Jun蛋白表达明显升高(P<0.05)。与MPP^+组比较,MPP^++含药血清高剂量组,MPP^++SP600125组均能够使细胞凋亡率,Caspase-3活性,p-JNK和p-c-Jun蛋白表达明显降低(P<0.05),而MPP^++含药血清高剂量+SP600125组的作用明显高于MPP^++含药血清高剂量组(P<0.05),但不高于MPP^++SP600125组。JNK和c-Jun蛋白表达无明显变化。结论:天麻钩藤饮含药血清对MPP^+诱导的PC12细胞的凋亡具有保护作用,其机制可能与JNK信号通路密切相关。