应用SELDI-TOF-MS筛选多囊卵巢综合征卵泡液中差异蛋白的研究

目的探讨多囊卵巢综合征(PCOS)患者与正常排卵妇女卵泡液中差异蛋白质的表达,建立PCOS的卵泡液诊断模型。方法采用表面增强激光解吸-电离-飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术检测24例PCOS患者的卵泡液和20例排卵正常的对照患者卵泡液中的蛋白质,采用支持向量机方法建立PCOS的诊断模型,评估诊断模型的预测效能;采用卡方检验检验PCOS的卵泡液模型间特异性和敏感度的不同。结果 PCOS患者与排卵正常妇女的卵泡液中共检测到89个差异的蛋白质,选取前10个统计学意义的蛋白质峰(P<0.05)合并建立诊断模型,获得5个差异的蛋白质,其中2033和5828质荷比(m/z)两个蛋白质峰在PCOS组卵泡液中的表达低于对照组(P<0.05),其余3个蛋白质峰2873、6452、8137m/z在PCOS组卵泡液中呈现高表达(P<0.05);5个卵泡液差异蛋白质峰组合所构建的诊断模型的特异性为99%,敏感度为97%。结论 PCOS患者的卵泡液与正常排卵妇女卵泡液中存在差异表达的蛋白质,PCOS患者卵泡液中表达的蛋白质的变化可能与PCOS患者的卵泡内卵子发育异常和排卵异常有关。

SELDI-TOF-MS蛋白芯片技术在胃癌早期诊断中的应用

目的 建立胃癌早期患者的血清差异表达蛋白诊断模型,构建用于胃癌早期诊断的敏感和特异的新方法.方法 采用PBSⅡ/C 型蛋白质指纹图谱仪及金芯片检测45例早期胃癌患者及80例健康对照人群血清蛋白质图谱,用Biomarker Wizard 3.1 软件分析所得数据,筛选胃癌差异表达蛋白.通过人工神经网络数学模型（ANN）选择最佳差异表达组合建立并验证胃癌的诊断模型.内标物质加入血清样本,校准和消除操作条件波动对分析结果的影响,提高实验的准确度.最后,应用SPSS13.0软件绘制胃癌诊断模型的受试者工作特征曲线（ROC curve）,评价诊断模型的准确度.结果 在质荷比为2 000～20 000范围内共检测到有显著差异的蛋白质峰（t检验,P〈0.01）28个.经ANN反复训练筛选其中5个差异蛋白（质荷比分别为2 545.3±3.6,2 942.7±4.3,3 135.5±2.8,4 130.6±2.1,8 691.4±1.3）组成胃癌人工神经网络诊断模型,对胃癌的诊断灵敏度为95.0%,特异度97.5%,阳性预测值为95.0%,阴性预测值97.5%,诊断准确度为96.67%.绘制ROC曲线,曲线下面积为0.972,表明该诊断模型准确性较高.结论 该研究建立的诊断模型对胃癌的诊断准确度较高.SELDI-TOF-MS蛋白芯片技术在胃癌的早期诊断和血清肿瘤标志物的筛选方面具有一定价值,值得进一步深入研究.

UPLC-Q/TOF法同时定性定量分析滇芹药材中主要化学成分

目的建立UPLC-Q/TOF法同时定性、定量分析滇芹中主要化学成分。方法采用超高效液相色谱串联飞行时间质谱法进行分析,色谱柱为Agilent Poroshell 120 Hilic,流动相为乙腈-0.1%甲酸水溶液,梯度洗脱,体积流量0.3 m L/min;定性、定量采用Q-TOF正负离子全扫描+IDA(信息关联采集)模式。结果利用已建立的筛查数据库将满足质量误差小于5×10-6、同位素分布正确且含有二级碎片的离子作为分析目标化合物,结合软件Formula Finder、Mass Calculators等功能、在线数据库(Human Metabolome Database、Pub Chem、Chemical Book等)及二级碎片裂解规律,共鉴定出23个化合物,滇芹首次发现4个化合物。确定阿魏酸为定量分析指标性成分,其定量、定性离子分别为178和149;阿魏酸检测质量浓度线性范围为1.14~1 140 ng/m L(r=1.000),检测限、定量限分别为0.87、2.91 ng/m L,精密度、稳定性、重复性试验的RSD<2%,加样回收率为98.13%~101.25%(RSD=1.37%,n=5)。结论该方法灵敏度高、重现性好,分析快速、准确、可靠,可用于同时定性、定量检测滇芹药材中主要化学成分;云南滇芹中阿魏酸含量要高于西藏滇芹。

盐酸左西替利嗪片有关物质的色谱-质谱结构鉴定

目的:采用LC-MS技术对盐酸左西替利嗪片中有关物质进行结构鉴定。方法:采用Welch Xtimate C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以甲醇-四氢呋喃-磷酸盐溶液(磷酸二氢钠3.1 g,用水溶解稀释至1 000 mL,用磷酸调节pH至2.9)(44.5∶5.5∶50)为流动相等度洗脱,对盐酸左西替利嗪片中有关物质进行分离;应用Kinetex C18(100 mm×n2.1 mm,1.7μm)色谱柱,以水(含0.05%甲酸)-甲醇(含0.05%甲酸)流动相梯度洗脱,采用色谱-质谱(MS)技术测定离子准确质量并分析离子特征,结合对照品确证有关物质结构;结合处方分析,推测未知杂质结构,并揭示杂质产生的来源。结果:在所建立的条件下,盐酸左西替利嗪与其有关物质分离良好,检测出10个有关物质,并综合分析、鉴定了有关物质结构,推测其中最大的未知杂质为左西替利嗪与残留乙醇酯化生成的2-[2-[4-[(4-氯苯基)(苯基)甲基]哌嗪-1-基]乙氧基]乙酸乙酯,另2个较大未知杂质为是左西替利嗪的羧基与乳糖不同位置的羟基产生的酯化产物(R)-2-[2-[4-[(4-氯苯基)(苯基)甲基]哌嗪-1-基]乙氧基]乙酸乳糖酯。结论:本研究为盐酸左西替利嗪片的处方研究及制剂工艺提供指导。