去SUMO化酶SENP5的表达、纯化、活性测定及复合物重组

SENP5参与转录调控、蛋白质稳态、DNA修复和细胞分裂等重要生命过程,与癌症、发育缺陷和神经变性等疾病密切相关.SENP5包含N端的无规则卷曲和C端的催化结构域.研究对SENP5的催化结构域(SENP5CD)进行了表达和纯化.C末端水解活性实验表明SENP5CD对SUMO2前体(pSUMO2)的切割活性大于SUMO1前体(pSUMO1).分子筛实验证明,SENP5能够与SUMO1和SUMO2的前体、RanGap1-SUMO1和RanGap1-SUMO2形成稳定的复合物.实验构建了SUMO1-PA和SUMO2-PA活性探针,这2种活性探针都能与SENP5CD反应形成共价结合的复合物.通过比较AlphaFold预测的SENP5CD-pSUMO1和SENP5CD-pSUMO2复合物结构,发现pSUMO2与SENP5CD的结合比pSUMO1更紧密.研究表达、纯化了SENP5,鉴定了酶活性,获得了SENP5CD与底物的复合物,为进一步研究SENP5奠定了基础.

舌鳞癌SENP5的表达及其临床意义

目的:探讨小泛素样修饰物特异的蛋白酶5(SUMO specific protease5,SENP5)在舌鳞状细胞癌中的表达及意义。方法:采用免疫组化方法对33例原发舌鳞癌及癌旁上皮中SENP5的表达进行检测。应用SPSS11.0软件包对免疫组化半定量检测结果与有关临床特征和病理指标间的关系进行Wilcoxon检验和Spearman等级相关检验。另使用钙离子对人舌癌细胞系Tca8113进行诱导分化,实时定量PCR和细胞免疫化学检测SENP5的表达改变。结果:舌鳞癌中SENP5的表达高于癌旁上皮(P=0.000),表达水平与鳞癌的分化程度相关(P=0.022);钙离子诱导分化可使人舌癌细胞系Tca8113中SENP5的表达增加。结论:SENP5的表达水平与舌鳞癌的分化相关,提示其与肿瘤的发生、发展具有一定关系。