SEO型汉坦病毒全NP蛋白及NP蛋白型特异区编码基因的克隆、表达

目的 :开发简单、可靠的 HTN、SEO型汉坦病毒血清学分型检测方法。方法 :应用 RT- PCR法对全 NP蛋白基因及其型特异区基因进行扩增 ,经 TA克隆及 Cui- SS、Cui- 15 5杆状病毒载体的构件、转获重组杆状病毒 ,再感染 Sf9细胞进行表达。结果 :克隆与表达了 SEO病毒 NP蛋白的全蛋白编码区及型特异编码区 (15 5到 4 2 9氨基酸处的编码基因 ) ,全 NP蛋白表达产物与病毒株感染 Vero E6细胞的反应谱完全一致 ,型特异区表达产物与相应的型特异 Mc Ab结合。结论 :建立了 SEO型病毒全 NP蛋白及 NP蛋白型特异区编码基因的克隆和表达方法 ,为开发简便、可靠的

汉坦病毒全NP蛋白及其型特异区编码基因的克隆及表达

目的 开发简单、可靠的HTN、SEO型血清学分型检测方法。方法 应用RT -PCR法对全NP蛋白基因及其型特异区基因进行扩增 ,经TA克隆及Cui-SS、Cui- 15 5杆状病毒载体的构件、转座、获重组杆状病毒 ,再感染Sf9细胞进行表达。结果 克隆与表达了SEO病毒NP蛋白的全蛋白编码区及型特异编码区 (15 5到 4 2 9氨基酸处的编码基因 ) ,全NP蛋白表达产物与病毒株感染VeroE6细胞的反应谱完全一致 ,型特异区表达产物与相应的型特异McAb结合。结论 建立了SEO型病毒全NP蛋白及NP蛋白型特异区编码基因的克隆和表达方法 ,为开发简便、可靠的SEO型血清学分型检验方法奠定了基础。

青岛地区2000-2003年HFRS患者汉坦病毒部分M基因的检测及其分型研究

目的 调查山东省青岛地区 2 0 0 0 - 2 0 0 3年汉坦病毒的流行情况 ,研究病毒在该地区的分子流行病学特征。方法 采集肾综合征出血热 (HFRS)急性期患者血清标本 6 4份 ,提取血清中病毒RNA作为模板 ,根据GenBank中汉坦病毒基因序列 ,设计HTN型和SEO型的通用外套引物 ,同时分别设计HTN和SEO型的特异性引物作为内套引物 ,RT nest PCR扩增汉坦病毒基因组M片段G1区基因并测序。利用DNAStar软件进行核苷酸序列分析。结果 在 6 4份标本中 ,用HTN型特异性引物扩增出 6份 ,占 9% ;用SEO型特异性引物扩增出 2 5份 ,占 39% ;总阳性率为 4 8%。总体看来青岛地区流行的毒株以SEO为主。SEO型汉坦病毒间核苷酸序列的差异相对较小 ,其基因的离散率为0.3%～ 8.9%。HTN型汉坦病毒的变异率较高 ,其基因的离散率为 2.6 %～ 11.2 %。结论 青岛地区是以SEO型汉坦病毒的流行为主 ,HTN型并存的混合疫区 ;