拟南芥逆境响应蛋白SEP1的初步研究

为了研究拟南芥逆境响应蛋白SEP1的生物学功能,通过CRISPR/Cas9基因编辑技术获得了SEP1基因缺失的拟南芥突变体sep1-1.和从诺丁汉拟南芥种子库(NASC)购买的SEP1基因敲降突变体sep1-2一样,sep1-1在正常条件下与野生型没有明显差异.但是在1200μmol photos∙m^(-2)∙s^(-1)高光处理8 h后,两个突变体新生叶片的叶绿体光系统Ⅱ(PSⅡ)的最大量子产量(Fv/Fm)和野生型(WT)相比有着不同程度的下调,说明PSⅡ的活性降低.亚细胞和叶绿体精细定位结果表明,SEP1是叶绿体基质类囊体膜蛋白.通过蓝绿温和凝胶电泳(BN-PAGE)和二向(2D)SDS-PAGE/蛋白免疫印迹分析发现:SEP1与某些未知蛋白结合形成一个分子质量约为100 ku的复合物,它们可能共同参与了PSⅡ的组装或修复.

莲瓣兰大雪素SEP1基因克隆和表达的研究

随着植物中越来越多的MADS-box基因被克隆出来,人们对经典的ABC模型进行了改进和完善,提出花发育的ABCDE模型,其中SEP1、SEP2、SEP3、SEP4为E类基因,SEP1同源基因在花器官的形成过程中起至关重要的作用。本研究以莲瓣兰大雪素作为实验材料,用RACE方法快速地克隆全长cDNA,生物信息学分析全长cDNA为1047bp,具有完整的开放阅读框(ORF)753bp,编码250氨基酸的蛋白质,获得一个SEP1同源基因。通过基因表达在各个授粉前和授粉后3d的合蕊柱中。本研究为进一步对这个基因的功能研究奠定基础。

枣SEP1基因的克隆和表达分析

SEP类基因属于E类MADS-box基因,在植物花器官发育中发挥重要作用。该研究以‘冬枣’为试材,采用同源克隆和RT-PCR技术从枣中分离到1个SEPALLATA1基因,并进行生物信息学及转录表达分析。序列分析表明,该基因包含完整的开放阅读框为735bp,编码244个氨基酸,预测分子量为27.9247kDa。系统进化树显示,该蛋白与其他植物SEP1类蛋白具有较高的同源性,命名为ZjSEP1(登录号为:KU375248)。实时荧光定量分析表明,ZjSEP1在枣不同组织中表达有显著差异,在蕾、花、幼果等生殖器官中高丰度表达,尤其是花发育前期表达最高;该基因在雄性不育和可育品种中表现出不同的表达模式,初步认为ZjSEP1基因可能在枣花器官的形成过程中发挥一定调控作用。

铁皮石斛SEP基因克隆与表达的研究

随着植物中越来越多的MADS-box基因被克隆出来,对经典的ABC模型进一步进行完善,提出花发育的ABCE“四元体模型”,其中SEP1、SEP2、SEP3、SEP4为E类基因,SEP1同源基因在花器官识别方面起着重要的作用。本研究以铁皮石斛花器官作为实验材料,用RACE方法快速克隆全长cDNA,生物信息学分析全长cDNA为926 bp,具有完整的开放阅读框(ORF)681 bp,具有227个氨基酸,分离出SEP-A同源基因,另外SEP-B同源基因全长cDNA为954 bp,具有完整的开放阅读框(ORF)774 bp,编码243个氨基酸。在各个花器官中进行RT-PCR,发现SEP-A基因在合蕊柱和唇瓣中表达,而SEP-B基因在唇瓣、花萼和幼叶中表达。

1 AU轨道SEP粒子通量的计算及与多卫星观测结果的比较

1 AU轨道上太阳高能粒子(Solar EnergeticParticles,SEP)通量是空间天气的重要指标.将SEP两步传播方程的格林函数解进行数值化,模拟了2012年9月28日的SEP事件,首次计算了同一事件中GOES卫星与STEREO双星观测到的SEP通量变化过程.对GOES和STEREO-B观测点,计算所得SEP峰值I_(max)和峰值到达时间t_(max)与观测值符合较好;对STEREO-A,由于观测点与太阳活动源区间隔较大及太阳背面未知事件的影响,计算结果与观测存在一定差异.

SEPS1基因对内毒素所致脓毒症小鼠的肝脏保护作用

目的研究SEPS1基因对内毒素所致脓毒症小鼠的肝脏保护作用。方法30只小鼠随机分为脓毒症组、非特异干扰组、特异干扰组,每组各10只。实验前12h非特异干扰组静脉转染scrambled siRNA,特异干扰组转染SEPS1 siRNA。实验当天3组动物腹腔内注射内毒素10mg/kg制作脓毒症模型。分别于12h、24h留取标本检测血ALT、AST,肝组织细胞因子TNF-α、IL-6含量,肝组织SEPS1蛋白表达及病理学改变。结果脓毒症小鼠肝脏有不同程度的损伤,表现为ALT、AST含量升高,24h时特异干扰组高于脓毒症组(P<0.05);细胞因子IL-6和TNF-α水平明显升高,24h时特异干扰组高于脓毒症组(P<0.05);WesternBlot检测肝组织SEPS1蛋白表达显示:特异干扰组12h时和24h时表达均较脓毒症组减弱。免疫组化法显示:SEPS1蛋白12h和24h时表达均较脓毒症组减弱。病理显示:12h和24h时均为特异干扰组肝细胞病变最严重。结论SEPS1基因表达的下调与脓毒症小鼠肝脏功能损害加重相关,推测SEPS1基因对内毒素攻击所致脓毒症小鼠肝脏具有保护作用。

SEPS1基因对糖尿病视网膜细胞增殖与侵袭的作用及机制研究

目的明确SEPS1基因对糖尿病大鼠视网膜细胞增殖与侵袭的影响,探讨其在糖尿病视网膜病变中的调控作用及可能分子机制。方法采用高糖高脂喂养联合链脲酶素注射法构建糖尿病大鼠模型,从模型大鼠中分离视网膜内皮细胞及周细胞;通过慢病毒转染技术实现SEPS1在上述内皮细胞和周细胞中过表达,分别采用MTT法及Transwell侵袭实验检测细胞的增殖率和侵袭力;采用Western-blotting检测细胞中SEPS1、p-Akt及VEGF蛋白的表达水平,分析SEPS1表达情况及对PI3K/Akt/VEGF通路关键蛋白表达的影响。结果糖尿病大鼠视网膜内皮细胞和周细胞中SEPS1基因和蛋白的水平较正常大鼠的低,差异显著,具有统计学意义(P<0.05)。SEPS1过表达能够明显抑制糖尿病大鼠视网膜内皮细胞和周细胞的增殖率和侵袭力(P<0.05)。SEPS1过表达后内皮细胞和周细胞AKT磷酸化水平及VEGF蛋白表达明显降低,差异显著,具有统计学意义(P<0.05)。结论SEPS1在糖尿病视网膜病变的情况下表达降低,其表达缺失可促进视网膜内皮细胞和周细胞的增殖和侵袭,调控糖尿病视网膜病变进程,其机制可能与PI3K/Akt/VEGF通路激活有关。

SEPS1基因在乳腺癌中表达的临床评价

目的检测SEPS1基因在乳腺癌及癌旁组织中的表达情况并研究其与乳腺癌临床病理之间的关系。方法收集乳腺癌标本50例,癌旁对照组30例。用HE染色方法区分乳腺癌组织与癌旁对照组,利用实时荧光定量PCR方法检测SEPS1 mRNA与乳腺癌组织及癌旁对照组的表达水平,及SEPS1与乳腺癌临床病理分期之间的关系。结果 SEPS1在乳腺癌旁组织的表达水平高于乳腺癌组织,乳腺癌中表达水平为48%,癌旁组织为100%,具有统计学差异(P<0.001),SEPS1基因表达水平与TNM分期有显著相关性(P=0.045),临床分期Ⅰ+Ⅱ期SEPS1的阳性表达率为55.8%,Ⅲ期SEPS1阳性表达率为0%,SEPS1与淋巴结有无转移有统计学意义(P<0.001),淋巴结无转移表达率为90%,淋巴结有转移表达率为20%,SEPS1与乳腺癌患者的年龄,肿瘤大小ER,PR无明显相关性(P>0.05)。结论 SEPS1基因的表达水平随着乳腺癌临床分期的升高及淋巴结转移程度的增加而降低。

SEPS1基因在内毒素所致脓毒症小鼠肝脏的变化规律

目的 观察SEPS1基因在内毒素所致脓毒症小鼠肝脏的变化规律.方法 采用内毒素攻击小鼠脓毒症模型.BALB/c小鼠84只,随机选取对照组10只,其余为脓毒症组.对照组麻醉后活杀动物.脓毒症组腹腔注射内毒素10 mg/kg后,分别于6、12、24、48、72、96 h留取肝脏和血标本,每个时间点随机选取10只小鼠.检测指标包括血清丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）和乳酸脱氢酶（LDH）;肝组织内肿瘤坏死因子（TNF-α）和白细胞介素6（IL-6）含量;肝组织SEPS1蛋白表达采用Western印迹检测.结果 与正常对照组比较,脓毒症组肝脏有损伤,表现为ALT、AST和LDH含量升高,24 h达到高峰,分别为（99±11）、（299±48）和（1523±131）U/L（与0 h比较,均P〈0.05）.随后逐渐下降,并于24～72 h恢复至损伤前水平.IL-6和TNF-α水平明显升高,0-48 h内损伤持续快速加重,IL-6和TNF-α均在48h达到高峰,分别为（30 325±17 901）ng/L和（36 509±20 794）ng/L[与0 h（23 802±11 150）、（29 799±8239）ng/L比较,均P〈0.05].Western 印迹检测显示脓毒症组小鼠肝脏SEPSl蛋白表达显著升高,并于伤后24 h达峰值.随后逐渐减弱,72 h近乎恢复到正常水平.免疫组化结果显示脓毒症组小鼠肝脏SEPS1蛋白表达增高,并于伤后第24小时达峰值.病理结果显示脓毒症小鼠的肝组织明显病变,6-12h细胞病变最严重.结论 内毒素所致脓毒症小鼠肝脏有不同程度的损伤,IL-6和TNF-水平明显升高.肝脏SEPS1蛋白表达显著升高,并于伤后24 h达峰值,72 h恢复到接近正常水平.