SEPT6对膀胱癌EJ细胞增殖、凋亡的影响及其机制的研究

目的探讨干扰SEPT6基因的表达对膀胱癌EJ细胞株增殖、凋亡的影响以及潜在的机制。方法用特异性SEPT6基因小干扰RNA序列转染膀胱癌EJ细胞作为SEPT6沉默组,以转染非特异性序列作为对照组。采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测转染效率,流式细胞仪检测转染后细胞的周期变化;同时采用Hoechst 33342细胞染色法检测转染后EJ细胞的凋亡;Western blotting检测相关信号通路蛋白的表达变化。结果 QPCR检测显示,SEPT6沉默组SEPT6 mRNA的表达水平为(23.4±2.3)%,显著低于对照组的(100.0±2.2)%,差异有统计学意义(P<0.05)。转染72 h后,对照组和SEPT6沉默组细胞的吸光值(A)分别为3.7±0.4、2.3±0.1,差异有统计学意义(P<0.05)。流式细胞仪检测显示,转染48 h后,对照组和SEPT6沉默组G_0/G_1期细胞比例分别为(43.3±4.2)%和(64.5±2.8)%,差异有统计学意义(P<0.05)。Hoechst 33342细胞凋亡荧光染色结果显示,对照组和SEPT6沉默组的细胞凋亡比例分别为(8.2±1.4)%、(24.2±3.2)%,差异有统计学意义(P<0.05)。Western blotting检测显示,与对照组比较,SEPT6沉默组PTEN蛋白表达增加、Akt蛋白磷酸化降低。结论干扰SEPT6基因的表达能显著抑制膀胱癌EJ细胞的增殖,导致其凋亡增加。其机制可能与PTEN/Akt信号通路的激活有关。

miR-223通过SEPT6抑制NCK-SOCS7信号通路促进前列腺癌细胞增殖及侵袭

目的探讨miR-223是否通过GTP结合蛋白基因SEPT6调控NCK-SOCS7信号通路并影响前列腺癌进展。方法通过miR-223模拟物(miR-MM)及其反义寡核苷酸(miR-AO)分别上调及抑制前列腺癌细胞系DU145中miR-223的表达,并与miR-223空载体组(miR-NC)进行比较。通过SEPT6抑制剂siR-1219及空白载体siR-NC分别与miR-NC共转染DU145细胞,同样再分别与miR-AO共转染DU145细胞。利用QPCR检测miR-223、SEPT6、NCK和SOCS7基因的表达,MTT法及Transwell小室法分别进行细胞增殖和侵袭实验。结果在miR-MM组,提高miR-223表达,能够显著抑制SEPT6、NCK及SOCS7表达水平,并且促进细胞增殖及侵袭力[细胞数为(103±37)个];反之在miR-AO组,则SEPT6、NCK及SOCS7基因表达显著增高,细胞增殖及侵袭力明显减弱[细胞数为(29±11)个]。进一步研究发现,在miR-NC+siR-1219组,miR-223及SEPT6表达分别较高和较低,NCK及SOCS7与SEPT6表达趋势一致,也较低,此时细胞增殖及侵袭能力较强[细胞数为(63±25)个];而在miR-AO+siR-NC组,miR-223及SEPT6表达分别较低和较高,NCK及SOCS7与SEPT6表达趋势也一致,也较高,而细胞增殖及侵袭能力较弱[细胞数为(21±6)个](P<0.05)。结论 miR-223能够抑制SEPT6基因表达,导致下游DNA损伤修复信号通路NCK-SOCS7被抑制,从而增加前列腺癌的恶性程度。本研究可能为前列腺癌的进展及潜在的治疗靶点提供基础研究依据。

人类SEPT6蛋白对胰腺导管癌细胞系PANC-1迁移和侵袭能力的影响

Septin家族是在大部分真核生物中都存在的一类蛋白质,研究表明它们除了和细胞中的胞浆移动相关之外还与胞膜运动、胞吞胞吐等过程联系密切.本文旨在通过对该家族中SEPT6的探究,了解它与癌症之间的某些联系.我们通过Western blot和病理组织免疫组化的实验证实了SEPT6在胰腺导管癌中高表达,因此选择胰腺导管癌来源的PANC-1细胞作为研究对象.通过细胞划痕实验,我们发现过量表达SEPT6有助于加速细胞迁移,相反,消减SEPT6会明显遏制划痕的愈合.同样,在Transwell实验中,我们也证实了SEPT6和PANC-1的侵袭能力紧密相关,这些实验证据都提示该蛋白和胰腺导管癌的恶性程度成正相关.