SEPT9基因甲基化水平在膀胱尿路上皮病变鉴别诊断中的应用

目的探讨SEPT9基因甲基化水平在尿路上皮病变良、恶性鉴别诊断中的作用,并尝试通过联合使用SEPT9甲基化检测降低膀胱镜活检组织的假阴性率。方法对160例经病理诊断的尿路上皮病变进行SEPT9甲基化检测,分析其辅助诊断良、恶性病变的敏感性和特异性;比较癌和癌旁组织间SEPT9基因甲基化水平;在12例首次膀胱镜活检为炎症或良性病变而后续活检、电切为癌的病理组织中分别检测SEPT9基因甲基化水平。结果SEPT9基因甲基化水平鉴别诊断尿路上皮良、恶性病变的敏感性、特异性分别为98%(88/90)和94%(66/70)。47%(7/15)的癌旁组织中SEPT9基因甲基化检测结果为阳性,显示癌旁组织表观遗传修饰异常;12例首次膀胱镜活检为炎症或良性病变的组织中SEPT9基因甲基化检测阳性率为67%(8/12),再次活检、电切病理证实为癌的组织SEPT9甲基化检测阳性率为100%(12/12)。结论SEPT9基因甲基化检测可以辅助尿路上皮病变良、恶性鉴别诊断,并可能有助于减少膀胱镜活检组织的假阴性率。

血浆循环肿瘤DNA SEPT9基因甲基化与血清CEA及CA19-9在结直肠癌辅助诊断中的价值

目的比较SEPT9基因甲基化(m SEPT9)与癌胚抗原(CEA)及糖类抗原19-9(CA19-9)在结直肠癌(CRC)辅助诊断中的价值。方法收集CRC 35例(CRC组)、结肠直肠腺瘤65例(腺瘤组)和健康对照人群104例(对照组)的外周血样本,通过Real-time PCR法检测血浆m SEPT9状态,通过化学发光法检测血清CEA和CA19-9。结果 CRC组、腺瘤组、对照组血浆m SEPT9阳性率分别为74.29%(26/35)、12.31%(8/65)、1.92%(2/104),组间比较差异有统计学意义(P均<0.001)。CRC组、腺瘤组、对照组血清CEA阳性率分别为34.29%(12/35)、3.18%(2/63)、1.92%(2/104),组间比较差异有统计学意义(P均<0.001)。CRC组、腺瘤组、对照组血清CA19-9阳性率分别为17.14%(6/35)、0(0/62)、0.96%(1/104),组间比较差异有统计学意义(P均<0.001)。在不同TNM分期的CRC患者中m SEPT9阳性率:Ⅰ期60.0%(3/5),Ⅱ期62.5%(5/8),Ⅲ期77.78%(7/9),Ⅳ期84.62%(11/13);CEA阳性率:Ⅰ期0(0/5),Ⅱ期25%(2/8),Ⅲ期22.2%(2/9),Ⅳ期61.54%(8/13);CA19-9阳性率:Ⅰ期0(0/5),Ⅱ期12.5%(1/8),Ⅲ期11.1%(1/9),Ⅳ期30.77%(4/13)。CRC中m SEPT9的灵敏度和特异度分别为74.29%和94.08%,高于CEA及CA19-9单独检测(分别为34.29%和17.14%)或二者联合检测(37.14%)的灵敏度,差异有统计学意义(P均<0.01)。m SEPT9在早期(Ⅰ~Ⅱ期)CRC中的阳性率达61.54%,高于CEA及CA19-9的阳性率(分别为15.38%和7.69%),差异有统计学意义(P<0.05)。在CRC中m SEPT9与CEA联合的灵敏度为80%,与CA19-9联合的灵敏度为77.14%,三者联合的灵敏度为80%,与m SEPT9单独应用相比均不能显著提高CRC辅助诊断的灵敏度(P均>0.05)。结论 m SEPT9与CEA和CA19-9相比,在CRC辅助诊断中具有更高的灵敏度,可作为独立的分子标志物,且可用于CRC早期诊断。

SEPT9基因甲基化、生长分化因子15、糖类抗原199与结直肠癌患者临床病理特征和预后的关系

目的探讨结直肠癌患者血浆SEPT9基因甲基化(mSEPT9)、生长分化因子15(GDF15)、糖类抗原199(CA199)表达与临床病理特征和预后的关系。方法回顾性分析218例肛肠科住院患者的血液样本,将106例结直肠癌患者纳入癌症组,将112例结直肠腺瘤患者纳入腺瘤组。另将同期体检中心的100例健康体检者纳入对照组。比较3组研究对象的mSEPT9、GDF15、CA199阳性率,探讨mSEPT9、GDF15、CA199与结直肠癌患者临床病理特征及预后的关系。结果癌症组mSEPT9阳性率和GDF15、CA199水平高于腺瘤组和对照组,且腺瘤组高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);mSEPT9、GDF15、CA199在TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期、浸润深度为浆膜层以下、分化程度为低分化、有淋巴结转移和远处转移密切的患者中表达更高,差异有统计学意义(P<0.05);Pearson相关性分析显示,mSEPT9、GDF15、CA199与TNM分期、浸润深度、分化程度、淋巴结转移、远处转移显著相关(P<0.05);临床分期高、分化程度低、淋巴结转移、远处转移以及mSEPT9、GDF15、CA199阳性表达是结直肠癌患者预后不良的独立危险因素(P<0.05)。结论结直肠癌患者mSEPT9、GDF15、CA199表达显著升高,且与不同临床病理特征密切相关,mSEPT9、GDF15、CA199阳性表达是患者预后不良的独立危险因素,临床应加强干预,从而改善患者预后,提高其生存率。

血浆SEPT9基因甲基化在结直肠癌根治术后复发监测中的应用

目的分析血浆SEPT9基因甲基化(mSEPT9)在结直肠癌根治术患者术后复发监测中的应用效果。方法选取2014年4月至2018年4月在该院行根治术的154例结直肠癌患者作为研究对象,采用试剂盒检测患者外周血标本中的mSEPT9和癌胚抗原(CEA),并分析mSEPT9与年龄、性别、体质量指数(BMI)、淋巴结转移、发生部位、血管是否侵犯、脉管是否侵犯、TNM分期、术后复发的关系。结果154例结直肠癌患者术前血浆mSEPT9检测阳性率为70.13%(108/154),其中TNMⅠ期阳性率为44.44%(8/18),Ⅱ期阳性率为63.41%(52/82),Ⅲ期阳性率为88.89%(48/54),随着患者TNM分期的提高,血浆mSEPT9检测阳性率也随之升高,且Ⅰ、Ⅱ期患者阳性率均低于Ⅲ期(P<0.05)。淋巴结转移患者血浆mSEPT9检测阳性率为95.89%,明显高于淋巴结未转移患者(46.91%),差异有统计学意义(P<0.05),但是患者术前血浆mSEPT9检测阳性率在不同年龄、性别、BMI、发生部位、血管是否侵犯、脉管是否侵犯间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。154例结直肠癌患者术后血浆mSEPT9检测阳性率与术前比较,差异有统计学意义(P<0.05)。术后复发患者的血浆mSEPT9检测阳性率要高于血清CEA检测阳性率(P<0.05)。结论血浆mSEPT9检测不仅可以作为检测结直肠癌患者手术疗效的标准,也可以作为结直肠癌患者术后复发检测的分子标志物。

癌组织及外周血中CD44、PLCEl、甲基化Sept9基因及DNA错配修复蛋白表达水平与结直肠癌病理分期及预后的相关性分析

目的探讨癌组织及外周血中白细胞分化抗原分化簇第44号(CD44)、磷酯酶Cεl(PLCEl)、甲基化Sept9基因及DNA错配修复蛋白表达水平与结直肠癌病理分期及预后的相关性。方法将2013年3月至2015年5月在西宁市第二人民医院确诊为结直肠癌的56例患者设为观察组,将同期于我院体检的55名健康成年人设为对照组。比较两组甲基化Sept9基因、CD44、PLCEl及DNA错配修复蛋白表达情况,分析以上指标在结直肠癌患者中的临床分布特点并进行相关性检验,比较不同甲基化Sept9基因、CD44、PLCEl及DNA错配修复蛋白表达情况并分析其与结直肠癌患者的预后相关性。结果观察组甲基化Sept9基因及CD44表达阳性率、PLCEl表达阴性率、DNA错配修复蛋白表达缺失率高于对照组(P<0.05)。甲基化Sept9基因、PLCEl及DNA错配修复蛋白在不同肿瘤浸润深度、肿瘤大小、病理分期及有无淋巴结转移结直肠癌患者中的表达差异有统计学意义(P<0.05)。CD44在不同肿瘤浸润深度、病理分期及有无淋巴结转移结直肠癌患者中的表达差异有统计学意义(P<0.05)。PLCEl与结直肠癌的浸润深度、病理分期呈负相关(r=-0.367,P=0.045;r=-0.522,P=0.008);甲基化Sept9基因与浸润深度、病理分期、淋巴结转移呈正相关(r=0.715,P=0.026;r=0.471,P=0.032;r=0.453,P=0.010),CD44与浸润深度、病理分期、淋巴结转移呈正相关(r=0.349,P=0.007;r=0.591,P=0.022;r=0.452,P=0.027),DNA错配修复蛋白与病理分期﹑淋巴结转移呈负相关(r=-0.487,P=0.041;r=-0.551,P=0.030)。不同CD44、甲基化Sept9基因、PLCEl及DNA错配修复蛋白表达情况的结直肠癌患者3年生存率差异有统计学意义(P<0.05)。PLCEl、DNA错配修复蛋白与结直肠癌患者3年生存率呈正相关(r=0.574,P=0.041;r=0.478,P=0.037),甲基化Sept9基因与结直肠癌患者3年生存率呈负相关(r=-0.515,P=0.034)。结论CD44、PLCEl、甲基化Sept9基因及DNA错配修复蛋白均与结直肠癌的病理分期相关,其检测有助于了解疾病的恶性程度,评估患者预后。

CA125、HE4和mSEPT9对子宫内膜癌临床诊断价值的研究

目的评估血清中人附睾蛋白4(HE4)、糖类抗原125(CA125)、尿液中SEPT9基因甲基化(mSEPT9)水平在诊断子宫内膜癌的临床价值。方法选取2021年11月—2022年5月于徐州医科大学附属医院确诊为子宫内膜癌的患者40例作为研究组。选取同期子宫内膜良性病变患者39例作为对照组。采用化学发光法检测2组患者血清CA125、HE4水平。采用实时荧光定量PCR法检测2组患者尿液mSEPT9 Ct值。结果研究组血清CA125、HE4水平显著高于对照组(P<0.05)。根据ROC曲线,将血清CA125、HE4和尿液mSEPT9 Ct值的截断值分别设为14.65 kU/L,52.44 pmol/L,38.95。研究组CA125、HE4、mSEPT9阳性率显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。CA125、HE4、mSEPT9的曲线下面积均>0.5,具有临床诊断意义,mSEPT9单项检测特异度明显高于HE4及CA125。CA125水平与病理分期、病理分级、淋巴脉管转移相关(P<0.05);HE4水平与年龄、肌层浸润深度相关(P<0.05);mSEPT9阳性率与手术病理分期、肌层浸润深度、淋巴及脉管转移相关(P<0.05)。结论尿液mSEPT9检测在子宫内膜癌筛查中具有较大潜力,为子宫内膜癌筛查提供新的思路。

SEPT9与PAX1甲基化在子宫颈HPV16或(和)HPV18阳性女性中的分流作用

目的探讨SEPT9与PAX1甲基化在子宫颈人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)16或(和)HPV18阳性女性中的分流作用。方法选取2020年10月至2021年3月就诊于首都医科大学附属北京妇产医院宫颈病变门诊HPV16或(和)HPV18阳性者455例,根据病理结果将其分为:正常/子宫颈炎组208例,子宫颈低级别鳞状上皮内病变(low grade squamous intraepithelial lesion,LSIL)/子宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)1级组155例,子宫颈高级别鳞状上皮内病变组(high grade squamous intraepithelial lesion,HSIL)81例(CIN2:35例,CIN3:46例)及宫颈癌组11例。采用双探针荧光定量PCR技术检测各组宫颈脱落细胞中SEPT9与PAX1甲基化情况。结果正常/子宫颈炎组、LSIL组、HSIL组、子宫颈癌组SEPT9甲基化检出率分别为14.42%(30/208)、19.35%(30/155)、69.14%(56/81)和100.00%(11/11);PAX1甲基化检出率分别为5.29%(11/208)、10.97%(17/155)、41.98%(34/81)和100.00%(11/11),4组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。对比CIN3+与CIN1及以下病变,C1N2+与CIN1及以下病变两种诊断分类,SEPT9甲基化分流液基细胞学检查(TCT)阴性HPV16或(和)HPV18阳性患者的诊断效能(AUC=0.854,0.794)优于PAX1甲基化(AUC=0.749,0.684),两种基因甲基化联合检测效能与单独SEPT9甲基化相当(AUC=0.853,0.787);且甲基化检测对C1N3+与CIN1及以下病变分类效果更佳。结论SEPT9与PAX1甲基化对子宫颈上皮内病变严重程度有一定预测作用。对TCT阴性HPV16或(和)HPV18阳性女性子宫颈HSIL及宫颈癌有分流作用,单独SEPT9甲基化检测更具优势。

血浆SEPT9基因甲基化检测在结直肠癌筛查中的应用分析

目的有效的早期筛查是降低我国结直肠癌发病率和死亡率的主要措施之一。本研究通过血浆SEPT9基因甲基化水平与结直肠癌的关联性分析,评价其在结直肠癌筛查中的临床价值。方法收集2018-02-01-2019-02-28云南省第一人民医院就诊的432例患者样本,其中结直肠癌患者104例、结直肠癌术后化疗患者51例、直肠息肉患者42例和健康体检者235名,采用荧光定量PCR法检测血浆中SEPT9基因甲基化状态,同时采用化学发光法检测血清肿瘤标志物癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)和糖类抗原19-9(carbohydrate antigen 199,CA19-9),分析检测结果与临床病症的关联性。结果结直肠癌患者组血浆SEPT9阳性率为69.23%,结直肠癌术后化疗组血浆SEPT9阳性率为21.57%,直肠息肉组阳性率为16.67%,与健康体检组阳性率2.98%比较,差异有统计学意义,χ~2=182.712,P<0.001。结直肠癌组SEPT9基因甲基化阳性率为69.23%,高于结直肠癌术后化疗组阳性率21.57%,差异有统计学意义,χ~2=31.252,P<0.001。Ⅰ~Ⅳ期结直肠患者SEPT9基因甲基化阳性率分别为52.94%、63.41%、74.07%和89.07%,Ⅰ期阳性率和Ⅳ期比较(χ~2=5.969,P<0.05),Ⅱ期阳性率和Ⅳ期比较(χ~2=4.342,P<0.05),差异有统计学意义。结直肠癌组男性患者SEPT9基因甲基化阳性率(68.33%)与女性患者阳性率(70.45%)之间差异无统计学意义,χ~2=0.054,P>0.05。SEPT9基因甲基化检测灵敏度为69.23%,特异度为95.40%,CA199联合SEPT9基因甲基化检测阳性预测值最高(86.51%)且检测的总有效率最佳,SEPT9联合CEA/CA199检测阴性预测值最高(93.07%)。受试者工作曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)分析显示,SEPT9甲基化联合CEA/CA199检测最高(0.869)。结论血浆SEPT9基因甲基化检测可作为结直肠癌筛查和预后判断的有效指标。SEPT9基因甲基化联合CEA/CA19-9检测可提高筛查的阳性率。

nMSP-DHPLC检测粪便SEPT9基因甲基化及其在结直肠癌诊断中的应用

目的探讨粪便SEPT9(septin 9)基因甲基化检测在结直肠癌早期诊断中的应用价值。方法常规提取87例结直肠癌手术切除癌组织、癌旁正常结肠组织及其术前粪便DNA,应用巢式甲基化特异性PCR(nested methyl-ation specific PCR,nMSP)结合变性高效液相色谱(denatured high performance liquid chromatography,DHPLC)技术检测结直肠癌组织、癌旁组织及粪便SEPT9基因甲基化水平;比较结直肠癌组织和粪便中SEPT9甲基化检测在结直肠癌诊断中的敏感性和特异性。结果在87例结直肠癌中,癌组织SEPT9检出率为80.5%(70/87),癌旁组织检出率为8.0%(7/87),二者比较差异有统计学意义(P<0.01),特异性为91.9%;结直肠癌粪便SEPT9基因甲基化检测结果与组织检测结果基本一致。SEPT9基因甲基化与大于65岁老年患者和右半结肠癌显著相关。结论结直肠癌组织SEPT9基因甲基化异常发生率高,尤其是老年和右半结肠癌患者;粪便SEPT9基因甲基化异常可作为结直肠癌早期诊断的肿瘤标志物。

外周血甲基化Septin9基因联合粪便免疫化学试验对专科门诊患者结直肠癌和腺瘤的筛查

目的探讨外周血甲基化Septin9（SEPT9）基因单独与联合粪便免疫化学试验（FIT）筛查结直肠癌和腺瘤的意义。方法连续纳入2014年10月至2015年4月在消化科门诊接受结直肠癌筛查的患者，以结肠镜检查和病理诊断作为金标准，计算甲基化SEPT9基因和FIT检测结直肠癌和腺瘤的敏感度和特异度，评估两者联合检测的诊断价值。绘制SEPT9诊断结直肠癌的ROC曲线。结果共纳入门诊患者300例，其中检出结直肠癌45例（15.0%）；结直肠腺瘤68例（22.7%），其中进展期腺瘤37例（12.3%）。甲基化SEPT9基因和FIT诊断结直肠癌的敏感度分别为80.0%和88.9%，特异度分别为95.3%和54.1%。甲基化SEPT9基因诊断结直肠癌的AUC值为0.923。甲基化SEPT9基因和FIT诊断进展期腺瘤的敏感度分别为10.8%和62.2%，特异度分别为83.3%和49.0%。两者联合检测诊断结直肠癌的敏感度为97.8%，特异度为52.9%；诊断进展期腺瘤的敏感度为67.6%，特异度为47.4%。结论外周血甲基化SEPT9基因有助于筛查结直肠癌，联合FIT可进一步提高结直肠腺瘤的检出率。

血浆循环肿瘤DNA SEPT9基因甲基化对结直肠癌诊断及预后预测价值分析

目的研究分析血浆循环肿瘤DNA SEPT9基因甲基化(methylated SEPT9,mSEPT9)对结直肠癌(colorectal cancer,CRC)诊断及预后预测价值。方法选择作者医院2015-05/2018-05月收治的98例CRC患者作为研究对象(CRC组),再选择同时间段非CRC患者80例作为对照(非CRC组)。CRC组98例,其中早癌组56例、进展期癌组42例;非CRC组80例,其中腺瘤组35例,健康对照组45例。非CRC组均于体检或检查当日抽取外周静脉血10 ml,符合研究标准的CRC组患者则于术前抽取10 ml外周静脉血,检测血浆mSEPT9含量,对比各组阳性表达情况,并对其诊断价值进行分析;再使用单因素或多因素对血浆mSEPT9阳性率与CRC患者临床特征间关系进行分析;最后分析血浆mSEPT9不同表达对CRC患者3年生存率影响。结果早癌组、进展期癌组、腺瘤组、健康对照组血浆mSEPT9表达阳性率差异有统计学意义(P<0.05);进一步进行两两比较:早癌组、进展期癌组血浆mSEPT9表达阳性率明显高于健康对照组(P<0.05),腺瘤组、健康对照组血浆mSEPT9表达阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。血浆mSEPT9单指标对CRC患者诊断敏感性为75.51%(74/98)、特异性为86.67%(52/60)、准确率为79.75%(126/158),阳性预测值90.24%(74/82)、阴性预测值68.42%(52/76),其Kappa值为0.59(0.40<Kappa<0.74),说明血浆mSEPT9单指标诊断CRC与金标准符合程度一般。单因素和多因素分析结果均显示:CRC患者进展期癌、存在淋巴结转移或远处转移者血浆mSEPT9阳性率较高(P<0.05)。98例CRC患者3年总生存率为75.51%(74/98),其中为血浆mSEPT9阳性患者生存率为70.27%(52/74),血浆mSEPT9阴性患者生存率为91.67%(22/24),经Log-rank检验差异有统计学意义(P<0.05)。结论CRC患者血浆SEPT9阳性率相对较高,该指标与金标准诊断符合程度一般,而CRC患者中进展期癌和出现淋巴结转移或远处转移者SEPT9阳性率相对较高,且SEPT9阳性率高者预后较差。

优化亚太地区结直肠肿瘤筛查评分系统在结直肠肿瘤筛查中的应用

目的探讨亚太地区结直肠肿瘤筛查(APCS)评分系统在结直肠肿瘤筛查中的优化策略。方法选择2016年2至12月和2018年3至12月在空军军医大学西京医院、西安医学院第一附属医院行结直肠肿瘤伺机性筛查的人群为研究对象。所有入组病例在行结肠镜检查前行APCS评分(低危0~1分,中危2~3分,高危4~7分)、BMI测量、粪便隐血试验(FOBT)和血浆甲基化Septin9基因(mSEPT9)检测,以结肠镜检查和活组织病理诊断为金标准,比较以上方法在结直肠肿瘤筛查中的效能,确定优化APCS评分系统筛查效能的策略。采用卡方检验进行统计学分析。结果共纳入筛查对象494例,其中结直肠息肉133例,包括结直肠腺瘤86例(非进展期腺瘤82例,进展期腺瘤4例)和非腺瘤性结直肠息肉47例。APCS评分高危筛查人群结直肠腺瘤检出率(33.3%,33/99)分别是中危(16.5%,39/237)、低危(8.9%,14/158)人群的2.02和3.76倍,差异均有统计学意义(均Bonferroni校正法,P均<0.016);BMI>23.9 kg/m2筛查人群中结直肠腺瘤的检出率高于BMI≤23.9 kg/m2人群[22.2%(59/266)比11.8%(27/228)],差异有统计学意义(χ2=9.126,P=0.003);而血浆mSEPT9表达阳性筛查人群中结直肠腺瘤的检出率与血浆mSEPT9表达阴性人群比较[22.4%(15/67)比17.3%(47/271)]差异无统计学意义(χ2=0.913,P=0.378)。在同时行BMI测量、FOBT和血浆mSEPT9检测的158例中低危(APCS评分≤3分)人群中,BMI>23.9 kg/m2者结直肠腺瘤再次检出率高于BMI≤23.9 kg/m2者[17.8%(16/90)比5.9%(4/68)],差异有统计学意义(χ2=4.957,P=0.030);BMI>23.9 kg/m2且FOBT阳性者结直肠腺瘤再次检出率高于BMI≤23.9 kg/m2且FOBT阴性者[28.1%(9/32)比8.0%(4/50)],差异有统计学意义(χ2=5.942,P=0.027);FOBT和血浆mSEPT9表达均阳性者结直肠腺瘤再次检出率高于两者均阴性者[5/14比12.9%(12/93)],差异有统计学意义(χ2=4.738,P=0.045)。结论 APCS评分系统应用于结直肠肿瘤序贯筛查时,优化选择BMI替代或联合FOBT可改善患者依从性,提高筛查效能,在结直肠肿瘤早期诊治中有重要的临床意义和推广价值。