小鼠睾丸支持细胞的分离培养与鉴定

目的：分离培养小鼠睾丸支持细胞并进行鉴定。方法：取18～20d雄性小鼠的睾丸，酶消化法原代培养。用RT—PCR的方法克隆带有锌指结构域的支持细胞基因SERZ，与pcDNA3．0连接后构建重组质粒pcDNA3．0-SERZ。用KpnI和Xba1分别酶切质粒pcDNA3．0-SERZ，获得线性化模板进而合成探针。原位杂交检测SERZ mRNA在培养细胞中的表达；用RT—PCR的方法检测雄激素结合蛋白（ABP）在支持细胞中的表达。结果：支持细胞多为多边形，核呈三角形或不规则形，染色浅，核仁明显，细胞完全铺开，成膜状，相邻细胞之间交织连接，细胞纯度为（85．1±2．5）％。SERZ mRNA在培养细胞的胞质中高水平表达。RT—PCR结果表明我们分离的支持细胞能够表达ABP mRNA。结论：我们成功分离和鉴定了小鼠睾丸支持细胞，纯度为（85．1±2．5）％。