优质鸡SESN1基因单核苷酸多态性及其与生长性状的关联分析

为探究SESN1基因单核苷酸多态性与优质鸡生长性状的相关性,研究采用直接测序法扩增SESN1基因CDS区前2 000 bp调控区域,结果发现9个单核苷酸多态性位点。通过对这些位点进行连锁分析,划分为C-1365T^G-1543C、G-1177A^C-1294A、T-1058G^T-1076A组成的3个单倍型块。通过分析突变位点与温氏N301家系生长性状的相关性,发现位点C-1365T、T-1076A、G-1058T均与温氏N301家系胸肌重达显著相关(P<0.05)。结果表明,SESN1基因与家鸡肌肉生长密切相关,上述多态位点可作为研究肉鸡胸肌重指标的潜在分子标记。

Sestrin1参与调控小鼠肝脏细胞糖异生

目的研究应激诱导蛋白1(SESN1)在小鼠肝脏糖异生途径中的作用及调节机制。方法RT-qPCR检测SESN1在C57BL/6J小鼠禁食条件下肝脏组织以及用佛司可林(Fsk)与地塞米松(Dex)处理的原代肝细胞中的mRNA表达水平。通过质粒转染HepG2细胞,RT-qPCR检测SESN1过表达对糖异生相关基因PGC-1α,PEPCK,G6Pase的mRNA表达水平的影响。利用双荧光素酶报告系统研究SESN1在HepG2细胞中对PGC-1α的启动子活性的影响。在HepG2细胞中,通过过表达SESN1同时抑制SIRT1表达检测SESN1对PGC-1α去乙酰化状态的影响;通过敲低SIRT1表达检测其是否介导了SESN1诱导糖异生相关基因mRNA水平的变化。结果SESN1在饥饿的C57BL/6J小鼠肝脏组织和佛司可林(Fsk)和地塞米松(Dex)处理的原代肝细胞中的mRNA表达水平显著升高(P<0.001)。在HepG2细胞中过表达SESN1促进了PGC-1α,PEPCK,G6Pase的mRNA表达水平(P<0.001)并促进PGC-1α的启动子活性(P<0.001)。SESN1的过表达降低了原代肝细胞中PGC-1α的乙酰化水平,利用Sirt家族抑制剂NAM和shRNA腺病毒分别干扰SIRT1表达,均拮抗了SESN1对PGC-1α的去乙酰化作,同时SIRT1诱导的PGC-1α,PEPCK和G6Pase的表达也明显受损(P<0.0001)。结论SESN1参与调控小鼠肝脏细胞糖异生,可能依赖于SIRT1。

限饲与外源刺激对肉鸡血糖浓度及抗氧化基因应激诱导蛋白1表达的影响

本试验旨在研究限饲与外源刺激对肉鸡血糖浓度及抗氧化基因应激诱导蛋白1(SESN1)表达的影响,并分析二者的相关性。试验1:分别选取不同生长发育阶段(10、19胚龄和21、49日龄,n=4)爱拔益加(AA)肉鸡各个组织样,检测SESN1的时空表达特性;试验2:选取7日龄肉鸡60只,分为对照组(n=20)、15%能量限饲组(n=20)和15%蛋白质限饲组(n=20),饲喂至21日龄,分别随机选取10只,采集胸肌组织,探究不同限饲处理对SESN1表达的影响;试验3:选取16日龄肉鸡20只,分为喂食组(正常饲喂,n=10)和禁食组(禁食24 h,n=10),测定血糖浓度后采集胸肌组织,检测SESN1的表达变化;试验4:分别对鸡只进行外源腹腔注射葡萄糖(18日龄,2 g/kg体重,n=20)、丙酮酸钠(21日龄,2 g/kg体重,n=20)和胰岛素(24日龄,5 IU/kg体重,n=30),测定血糖浓度后采集胸肌组织,检测SESN1的表达变化。最后进行SESN1相对表达量与血糖浓度相关性分析。结果表明:1)在10胚龄,SESN1在肝脏中相对表达量最高,显著高于其他组织(P<0.05);在19胚龄和21日龄时,SESN1在胸肌中相对表达量最高,显著高于其他组织(P<0.05);在49日龄时,SESN1在胰腺中相对表达量最高,显著高于其他组织(P<0.05)。2)15%能量限饲组的胸肌中SESN1相对表达量高于对照组(P>0.05),15%蛋白质限饲组的胸肌中SESN1相对表达量极显著低于对照组(P<0.01)。禁食组的血糖浓度极显著低于喂食组(P<0.01),胸肌中SESN1相对表达量极显著高于喂食组(P<0.01)。3)胰岛素处理极显著降低了120 min时血糖浓度(P<0.01),同时极显著上调了120 min时胸肌中SESN1相对表达量(P<0.01);丙酮酸钠处理极显著降低了60 min时血糖浓度(P<0.01),同时极显著上调了60 min时胸肌中SESN1相对表达量(P<0.01)。4)胸肌中SESN1相对表达量与血糖浓度呈极显著负相关(R 2=0.3708,P<0.0001)。由此可见,SESN1具有明显的时空表达特性,限饲和外源刺激可不同程度影响胸肌中SESN1的表达,且胸肌中SESN1相对表达量与血糖浓度呈极显著负相关。