蜂斗菜素调控circSETDB1/miR-345-5p对肝癌细胞生物学行为的影响

目的本研究旨在评估蜂斗菜素对肝细胞癌细胞系2(hepatocellular carcinoma cell line 2,HepG2)的抗肿瘤活性,并探讨蜂斗菜素通过调控环状SET结构域蛋白1(circular RNA SET domain bifurcated histone lysine methyltransferase 1,circSETDB1)和微小RNA-345-5p(microRNA-345-5p,miR-345-5p)的mRNA表达对细胞增殖、凋亡和迁移的影响。方法将HepG2细胞分为多个处理组。对照组不做任何处理;蜂斗菜素处理包括蜂斗菜素L组(25 mol/L)、蜂斗菜素M组(50 mol/L)、蜂斗菜素H组(100 mol/L)、蜂斗菜素组(100 mol/L);siRNA干扰包含环状SET结构域蛋白1小干扰RNA(small interfering RNA targeting circular SET domain bifurcated histone lysine methyltransferase 1,si-circSETDB1)组、小干扰RNA阴性对照(small interfering RNA negative control,si-NC)组;过表达环状SET结构域蛋白1过表达质粒(overexpression vector for circular SET domain bifurcated histone lysine methyltransferase 1,pcDNA-circSETDB1)组和蜂斗菜素+pcDNA-circSETDB1组。采用qRT-PCR检测肝癌组织及癌旁组织的circSETDB1和miR-345-5p的mRNA表达水平;CCK-8检测细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞凋亡情况;Western blot检测半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3(cleaved cysteinyl aspartate-specific proteinase-3,Cleaved-Caspase-3)蛋白表达水平;克隆形成实验检测细胞集落形成;划痕实验和Transwell实验分别检测细胞愈合率和迁移;双荧光素酶报告基因实验验证circSETDB1与miR-345-5p的靶向关系。结果与癌旁组织相比,肝癌组织中circSETDB1 mRNA表达升高(P<0.05),miR-345-5p mRNA表达降低(P<0.05)。与对照组相比,蜂斗菜素各剂量组HepG2细胞的细胞活性、集落形成数降低(P<0.05),细胞凋亡率和Cleaved-Caspase-3蛋白表达升高(P<0.05),且呈剂量依赖性(P<0.05)。与si-NC组相比,si-circSETDB1组HepG2细胞的circSETDB1表达、细胞活性、集落形成数、迁移细胞数和划痕愈合率降低(P<0.05),miR-345-5p表达、细胞凋亡率和Cleaved-Caspase-3蛋白表达升高(P<0.05)。与蜂斗菜素组相比,蜂斗菜素+pcDNA-circSETDB1组HepG2细胞中circSETDB1表达、细胞活性、集落形成数、迁移细胞数和划痕愈合率升高(P<0.05),miR-345-5p表达、细胞凋亡率和Cleaved-Caspase-3蛋白表达降低(P<0.05)。结论蜂斗菜素可抑制肝癌细胞HepG2增殖和迁移,并诱导细胞凋亡,其机制可能与抑制circSETDB1表达而上调miR-345-5p表达有关。

甲状腺乳头状癌组织中SETDB2、Gal-3、PLEKHS1的表达情况及其对患者预后的预测价值

目的分析SET结构域分叉组蛋白赖氨酸甲基转移酶2(SETDB2)、半乳糖凝集素3(Gal-3)、pleckstrin同源结构域S1(PLEKHS1)在甲状腺乳头状癌组织中的表达情况,以及三者对患者预后的预测价值。方法(1)选择118例甲状腺乳头状癌患者作为研究组,45例甲状腺良性结节患者作为对照组。采用免疫组化法检测甲状腺乳头状癌组织和甲状腺良性结节组织中SETDB2、Gal-3、PLEKHS1蛋白表达情况。比较研究组与对照组之间,以及不同特征甲状腺乳头状癌患者之间病灶组织中SETDB2、Gal-3、PLEKHS1蛋白的阳性表达率。(2)随访1年,记录甲状腺乳头状癌患者的生存情况。分析SETDB2、Gal-3、PLEKHS1蛋白阳性表达和阴性表达患者的生存率;比较预后良好和预后不良患者SETDB2、Gal-3、PLEKHS1蛋白的阳性表达率。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析SETDB2、Gal-3、PLEKHS1对甲状腺乳头状癌患者预后的预测价值。结果(1)与对照组相比,研究组病灶组织中SETDB2蛋白阳性表达率较低,Gal-3、PLEKHS1蛋白阳性表达率较高(P<0.05)。在甲状腺乳头状癌患者中,Ⅲ~Ⅳ期、浸润深度≥1/2、组织中低分化、淋巴结转移、肿瘤直径>1 cm的患者病灶组织中SETDB2蛋白阳性表达率更低,Gal-3、PLEKHS1蛋白阳性表达率更高(P<0.05)。(2)在甲状腺乳头状癌患者中,SETDB2蛋白阳性表达患者生存率高于SETDB2蛋白阴性表达患者,Gal-3、PLEKHS1蛋白阳性表达患者生存率低于Gal-3、PLEKHS1蛋白阴性表达患者(P<0.05);预后良好患者的SETDB2蛋白阳性表达率高于预后不良患者,Gal-3、PLEKHS1蛋白阳性表达率低于预后不良患者(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,SETDB2、Gal-3、PLEKHS1蛋白总评分预测甲状腺乳头状癌患者预后不良的曲线下面积分别为0.826、0.841、0.859。结论在甲状腺乳头状癌中,SETDB2呈低表达,而Gal-3、PLEKHS1呈高表达,三者均与患者的病情严重程度相关,且对预后具有一定的预测价值。

核受体结合SET域蛋白1催化活性区域B细胞优势表位的预测与分析

目的预测核受体结合SET域蛋白1催化活性区域(NSD1-CD)B细胞优势表位,并分析其功能。方法以NSD1-CD的氨基酸序列为基础,利用生物信息学软件,采用Hopp&Woods亲水性方案、Zimmerman极性参数、Jameson-Wolf抗原指数方案和Emini表面可及性方案等,进一步运用抗原指数预测,并结合三级结构分析NSD1-CD B细胞优势表位及其功能。结果NSD1全长为2696个氨基酸,NSD1-CD(1852~2082)由231个氨基酸组成,相对分子质量为26.53 k Da。经综合分析,NSD1-CD B细胞优势表位可能存在于NSD1全长序列N端的1865~1869及1959~1964区段,优势表位KKPPP(1865~1869)距离s-腺苷甲硫氨酸较近,可能与转甲基功能关系紧密。结论多参数预测NSD1-CD B细胞优势表位可为应用多肽小片段制备单克隆抗体、表位疫苗及研究其蛋白功能提供重要的依据。

沉默SETDB1对肾癌细胞生长的影响及分子机制研究

目的探讨组蛋白赖氨酸N端甲基转移酶SET结构域分支型1(SETDB1)对人肾癌细胞增殖、凋亡的影响。方法体外培养肾癌ACHN细胞及正常肾小管上皮HK-2细胞,qRT-PCR及Western blot分别检测两种细胞系中SETDB1 mRNA及蛋白的表达。采用转染SETDB1特异性干扰性小核糖核酸(siRNA)敲低ACHN细胞中SETDB1表达,并采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)、Western blot检测SETDB1的敲低效果,CCK-8法、溴脱氧尿嘧啶核苷(Brd U)结合试验检测细胞活力与增殖,流式细胞仪、caspase3/7活性分析检测细胞凋亡的变化。采用qRTPCR、Western blot检测沉默SETDB1后p53 mRNA及蛋白的表达水平。结果 SETDB1在肾癌ACHN细胞中表达水平明显高于正常肾小管上皮HK-2细胞(t=14.435,P<0.01);转染SETDB1特异性siRNA沉默SETDB1表达后,ACHN细胞中SETDB1 mRNA(t=13.091,P<0.01)及其蛋白表达水平明显降低;ACHN细胞活力显著降低(P<0.05);细胞内DNA复制活性明显降低(P<0.01);细胞凋亡率增加(t=6.765,P<0.01);Csapase3/7酶活性提高(t=5.763,P<0.01);同时p53 mRNA(t=9.241,P<0.01)及蛋白的表达水平显著提高。结论 SETDB1在肾癌细胞中表达升高,下调SETDB1能够通过促进p53表达而发挥抗肿瘤生长作用。

PELP1、SETDB1在卵巢癌组织中的表达及意义

目的探讨脯氨酸-谷氨酸-亮氨酸富集蛋白1(PELP1)及SET结构域分支型组蛋白赖氨酸甲基转移酶1(SETDB1)在卵巢癌组织中的表达及意义。方法收集2016年7月至2022年5月该院妇产科行手术治疗且临床病理资料完整的35例卵巢癌患者组织标本,另选取同期收治因子宫肌瘤行子宫及双侧附件切除术的17例患者的正常卵巢组织作为对照。采用实时荧光定量逆转录PCR检测PELP1、SETDB1 mRNA在卵巢癌细胞系(A2780、OVCAR3、SKOV3)及人正常卵巢上皮细胞系(IOSE80)中的相对表达水平,免疫组织化学检测PELP1、SETDB1蛋白的表达水平,分析PELP1、SETDB1蛋白表达情况与患者临床病理特征的关系。结果卵巢癌细胞系A2780、OVCAR3、SKOV3中PELP1、SETDB1 mRNA相对表达水平均明显高于正常卵巢上皮细胞系IOSE80(P<0.05)。与正常卵巢组织比较,卵巢癌组织PELP1蛋白表达水平明显增高(P<0.05),但SETDB1蛋白表达无明显差异(P>0.05)。不同国际妇产科联盟(FIGO)分期、淋巴结转移情况的PELP1蛋白阳性表达比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论PELP1在卵巢癌组织中表达水平异常升高,PELP1可能对SETDB1有一定的调控作用。