甲基转移酶SETDB1和SOX7甲基化在口腔癌中的相关性研究

目的检测口腔癌中SETDB1表达与SOX7甲基化水平,分析二者相关性及临床意义。方法收集口腔癌和癌旁组织,焦磷酸测序法检测SOX7基因甲基化水平,RT-qPCR检测SOX7和SETDB1 mRNA的表达,免疫组化及Western blot检测蛋白表达。统计分析SOX7甲基化水平与SETDB1相关性及其与临床病例特征的相关性。构建SETDB1下调siRNA转染口腔癌KB细胞,设siRNA-SETDB1为实验组(si-SET)、siRNA空载体为阴性对照组(si-N)和未转染KB细胞为空白对照组(NC)。检测3组SETDB1 mRNA和蛋白水平及SOX7甲基化。结果口腔癌组织SOX7基因甲基化率高于癌旁组织,SOX7 mRNA相对表达量低于癌旁组织,差异均有统计学意义(P<0.05)。癌组织中SETDB1 mRNA相对表达量高于癌旁组织(P<0.05);免疫组化结果显示癌组织SOX7蛋白表达阳性率SETDB1蛋白表达阳性率高于癌旁组织,差异均有统计学意义(P<0.05)。Western Blot结果显示SETDB1在癌组织中表达高于癌旁组织,SOX7在癌组织中表达低于癌旁组织,差异均有统计学意义(P<0.05);口腔癌组织中SOX7甲基化和SETDB1具有相关性(r=0.324,P<0.05);SOX7甲基化和SETDB1与肿瘤TNM分期、组织分化和淋巴结转移密切相关(P<0.05)。体外实验显示,RNA干扰SETDB1后si-RNA组中SETDB1 mRNA和蛋白表达量最低(P<0.05),SOX7基因甲基化率显著下降(P<0.05)。结论在口腔癌病变过程中SETDB1与SOX7基因甲基化具有相关性,SETDB1可能是催化SOX7发生甲基化修饰的重要甲基化转移酶,在口腔早期病变诊治中具潜在价值。

SET7对Ang Ⅱ介导的心肌成纤维细胞增殖和胶原合成的影响及其机制

目的:沉默含SET结构域赖氨酸甲基转移酶7(SET domain containing lysine methyltransferase 7,SET7)基因可改善缺血再灌注介导的心肌组织损伤,但是SET7对血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ)介导的心肌成纤维细胞增殖及胶原合成的影响尚不明确。本研究旨在探讨SET7对心肌成纤维细胞增殖以及胶原合成的影响及其可能机制。方法:分离心肌成纤维细胞,采用免疫荧光法鉴定心肌成纤维细胞。将心肌成纤维细胞随机分为4组:对照组,正常培养细胞;Ang Ⅱ组,给予100 nmol/L Ang Ⅱ处理细胞24 h;siCtrl组,细胞转染siCtrl后给予100 nmol/L的Ang Ⅱ处理24 h;siSET7组,细胞转染siSET7后给予100 nmol/L的Ang Ⅱ处理24 h。采用CCK-8法和5-乙炔基-2’-脱氧尿苷(5-ethynyl-2’-deoxyuridine,EdU)法检测细胞增殖情况;real-time PCR检测SET7、collagen Ⅰ、collagen Ⅲ和α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)mRNA的表达;蛋白质印迹法检测SET7、collagen Ⅰ、collagen Ⅲ、音猬因子(sonic hedgehog,Shh)、跨膜蛋白patched1(Ptch1)、胶质瘤相关癌基因1(glioma-associated oncogene homolog 1,Gli1)和α-SMA蛋白质的表达。结果:在荧光显微镜下可见vimentin染色呈阳性,心肌成纤维细胞状态良好。与对照组比较,Ang Ⅱ组SET7 mRNA和蛋白质表达水平均显著上调,细胞增殖率和EdU荧光强度显著增加,collagen Ⅰ、collagen Ⅲ和α-SMA mRNA和蛋白质表达水平显著上调(均P<0.05);与siCtrl组比较,siSET7组SET7 mRNA表达水平显著下调,细胞增殖率和EdU荧光强度显著下降,collagen Ⅰ、collagen Ⅲ和α-SMA mRNA和蛋白质表达水平显著下调(均P<0.05)。结论:沉默SET7基因可抑制Ang Ⅱ介导的心肌成纤维细胞增殖和胶原合成,Shh信号通路可能参与这一过程。

SETD1A与KDM4A在非小细胞肺癌中的表达及临床价值

目的研究非小细胞肺癌(NSCLC)组织中组蛋白赖氨酸甲基转移酶SET结构域包含1A(SETD1A)和赖氨酸去甲基酶4A(KDM4A)表达及与临床病理特征及预后的关系。方法选取2017年1月—2020年1月南通市肿瘤医院综合内科收治NSCLC患者116例为研究对象。采用免疫组织化学法检测NSCLC组织中SETD1A、KDM4A表达,二者相关性分析采用Spearman秩相关分析。Kaplan-Meier生存分析SETD1A、KDM4A表达对NSCLC患者生存预后的影响。Cox回归分析影响NSCLC患者预后因素。结果NSCLC癌组织中SETD1A棕黄色阳性染色主要位于细胞核,KDM4A阳性染色主要位于细胞浆和细胞膜。NSCLC癌组织SETD1A阳性率为61.21%(71/116),高于癌旁组织的6.90%(8/116),差异有统计学意义(χ^(2)=76.546,P<0.001)。NSCLC癌组织中KDM4A阳性率为65.52%(76/116),高于癌旁组织的8.62%(10/116),差异有统计学意义(χ^(2)=80.487,P<0.001)。NSCLC癌组织中SETD1A与KDM4A表达呈显著正相关(rs=0.722,P<0.001)。TNM分期Ⅲ期、低分化程度、伴淋巴结转移患者在NSCLC癌组织中SETD1A、KDM4A阳性率显著高于TNM分期Ⅰ~Ⅱ期、高中分化程度、无淋巴结转移者(SETD1A:χ^(2)/P=15.808/<0.001,7.108/0.008,17.136/<0.001;KDM4A:χ^(2)/P=9.050/0.003,5.480/0.019,10.208/0.001)。SETD1A阳性组和阴性组患者3年总体生存率分别为49.28%(34/69)、78.72%(37/47)。SETD1A阳性组患者3年累积生存率明显低于阴性组患者(χ^(2)=12.984,P<0.001);KDM4A阳性组和阴性组3年总体生存率分别为48.65%(36/74)、83.33%(35/42),KDM4A阳性组患者3年累积生存率明显低于阴性组患者(χ^(2)=17.175,P<0.001)。TNM分期Ⅲ期、合并淋巴结转移、SETD1A阳性、KDM4A阳性是影响NSCLC患者不良预后的独立危险因素[OR(95%CI)=1.610(1.221~2.122)、1.904(1.307~2.774)、1.835(1.228~2.742)、1.744(1.245~2.443)]。结论NSCLC癌组织中SETD1A、KDM4A表达升高,两者表达与TNM分期、分化程度及淋巴结转移有关,检测NSCLC组织中SETD1A、KDM4A表达有助于评估NSCLC患者临床预后。

组蛋白甲基化转移酶SETD4对鼻咽癌细胞增殖和迁移的影响

目的:明确组蛋白甲基化转移酶含SET结构域蛋白4 (SET-domain-containing protein 4, SETD4)在临床鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma, NPC)组织中的表达,分析SETD4对NPC细胞增殖和迁移的影响。方法:采用免疫组织化学法检测86例临床NPC标本与对照组30例鼻咽黏膜慢性炎症(nasopharyngeal chronic inflammation,NPI)组织中SETD4蛋白的表达;基于CRISPR/Cas9技术敲除CNE2细胞中SETD4基因,DNA测序结合半定量RTPCR进行鉴定;以SETD4敲除前后的CNE2细胞为研究对象,于倒置显微镜下观察细胞形态,采用CCK-8实验分析细胞增殖活性、Transwell实验观察细胞迁移能力变化、Western blot检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)、细胞周期相关蛋白、上皮-间充质转化标志物和组蛋白赖氨酸甲基化的变化,并通过生物信息学富集SETD4相关联的功能和信号通路。结果:SETD4蛋白主要定位于NPC细胞核中,NPC组织中SETD4阳性表达率显著低于NPI对照组(P<0.01)。基于CRISPR/Cas9技术成功敲除了CNE2细胞的SETD4基因,获得基因敲除的纯合子细胞。与野生型(wild-type, WT)细胞株相比,SETD4敲除(knockout, KO)细胞株呈现更明显的梭形和多角形,增殖活性和迁移能力均显著增加(P<0.01),E-cadherin和p21蛋白表达显著下调(P<0.05),而cyclin D1、cyclin E1、Ncadherin和vimentin蛋白表达则显著上调(P<0.05)。此外,与WT组相比,SETD4KO组细胞中H3K4me2、H3K4me3、H3K9me1、H3K27me3、H3K79me2和H4K20me2水平显著降低(P<0.05)。基因集富集结果显示,SETD4与细胞周期的功能和信号通路相关。结论:临床NPC组织中SETD4蛋白的表达减弱或缺失;SETD4表达减弱通过上调细胞周期相关蛋白促进NPC细胞增殖,通过诱导上皮-间充质转化而促进细胞迁移;SETD4影响NPC细胞中H3K4、H3K9、H3K27、H3K79和H4K20多个位点的甲基化。

甲状腺乳头状癌组织中SETDB2、Gal-3、PLEKHS1的表达情况及其对患者预后的预测价值

目的分析SET结构域分叉组蛋白赖氨酸甲基转移酶2(SETDB2)、半乳糖凝集素3(Gal-3)、pleckstrin同源结构域S1(PLEKHS1)在甲状腺乳头状癌组织中的表达情况,以及三者对患者预后的预测价值。方法(1)选择118例甲状腺乳头状癌患者作为研究组,45例甲状腺良性结节患者作为对照组。采用免疫组化法检测甲状腺乳头状癌组织和甲状腺良性结节组织中SETDB2、Gal-3、PLEKHS1蛋白表达情况。比较研究组与对照组之间,以及不同特征甲状腺乳头状癌患者之间病灶组织中SETDB2、Gal-3、PLEKHS1蛋白的阳性表达率。(2)随访1年,记录甲状腺乳头状癌患者的生存情况。分析SETDB2、Gal-3、PLEKHS1蛋白阳性表达和阴性表达患者的生存率;比较预后良好和预后不良患者SETDB2、Gal-3、PLEKHS1蛋白的阳性表达率。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析SETDB2、Gal-3、PLEKHS1对甲状腺乳头状癌患者预后的预测价值。结果(1)与对照组相比,研究组病灶组织中SETDB2蛋白阳性表达率较低,Gal-3、PLEKHS1蛋白阳性表达率较高(P<0.05)。在甲状腺乳头状癌患者中,Ⅲ~Ⅳ期、浸润深度≥1/2、组织中低分化、淋巴结转移、肿瘤直径>1 cm的患者病灶组织中SETDB2蛋白阳性表达率更低,Gal-3、PLEKHS1蛋白阳性表达率更高(P<0.05)。(2)在甲状腺乳头状癌患者中,SETDB2蛋白阳性表达患者生存率高于SETDB2蛋白阴性表达患者,Gal-3、PLEKHS1蛋白阳性表达患者生存率低于Gal-3、PLEKHS1蛋白阴性表达患者(P<0.05);预后良好患者的SETDB2蛋白阳性表达率高于预后不良患者,Gal-3、PLEKHS1蛋白阳性表达率低于预后不良患者(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,SETDB2、Gal-3、PLEKHS1蛋白总评分预测甲状腺乳头状癌患者预后不良的曲线下面积分别为0.826、0.841、0.859。结论在甲状腺乳头状癌中,SETDB2呈低表达,而Gal-3、PLEKHS1呈高表达,三者均与患者的病情严重程度相关,且对预后具有一定的预测价值。

兔抗小鼠含SET结构域(赖氨酸甲基转移酶)8(Setd8)多克隆抗体制备和应用

目的在大肠杆菌表达小鼠含SET结构域(赖氨酸甲基转移酶)8(Setd8)蛋白并制备兔抗Setd8多克隆抗体。方法将p GADT7-Setd8质粒和p ET-30a载体分别双酶切后连接、转化和鉴定,构建p ET-30a-Setd8原核表达质粒。将p ET-30a-Setd8质粒转化到E.coli BL21中,用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达,通过镍亲和层析柱进行蛋白纯化。应用纯化的Setd8蛋白免疫新西兰大白兔,获得Setd8多克隆抗体。利用ELISA、Western blot法及免疫组织化学染色法对所得多克隆抗体进行效价测定及特异性鉴定。结果应用限制性内切酶双酶切后电泳及序列测定法,成功构建的p ET-30a-Setd8重组质粒在大肠杆菌中IPTG诱导下能够高效表达重组Setd8蛋白。免疫获得的多克隆抗体经ELISA检测其抗体效价为1∶1 000 000,Western blot法结果显示制备的多克隆抗体能特异性识别细胞和组织中的Setd8蛋白,免疫组织化学染色法显示多克隆抗体识别的Setd8主要表达于成年小鼠睾丸组织中的精原细胞。结论成功获得较高纯度Setd8蛋白,制备的Setd8多克隆抗体具有较高反应性和特异性。

JMJD3参与IFN-α和TLR7诱导的B细胞活化及凋亡

目的:探索组蛋白去甲基化酶JMJD3对B细胞活化和凋亡的影响。方法:磁珠分选纯化正常人及SLE患者外周血B细胞,用IFN-α、R848或IFN-α+R848处理纯化的B细胞,流式细胞仪检测CD86+或CD69+的细胞百分率以及CD86+Annexin V+或CD69+Annexin V+的细胞百分率;实时定量PCR和Western blot方法检测JMJD3的表达。结果:获得的B细胞纯度高达95%;IFN-α能够增强TLR7对B细胞的活化和凋亡;IFN-α也增加TLR7信号诱导的B细胞表达JMJD3,且JMJD3高表达依赖于MAPK通路,而不是NF-κB信号通路;SLE患者外周血B细胞高表达JMJD3,且JMJD3抑制剂能够抑制IFN-α+R848诱导的CD19+B细胞活化及凋亡。结论:JMJD3参与IFN-α和TLR7诱导的B细胞活化及凋亡,提示JMJD3抑制剂可能具有缓解SLE症状的作用。

O6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶、细胞周期相关蛋白1、F框/WD-40域蛋白7在脑胶质瘤组织中的表达情况及临床意义

目的探讨O6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶(MGMT)、细胞周期相关蛋白1(CAPRIN1)、F框/WD-40域蛋白7(FBXW7)在脑胶质瘤组织中的表达情况及临床意义。方法选择78例脑胶质瘤患者和20例因外伤或脑出血行颅内减压治疗的患者,分别作为观察组和对照组,分别收集两组患者的脑胶质瘤组织和正常脑组织。采用免疫组织化学染色法检测两组患者中MGMT、CAPRIN1、FBXW7蛋白的表达情况,比较不同临床特征脑胶质瘤患者脑胶质瘤组织中MGMT、CAPRIN1、FBXW7蛋白的表达情况。结果观察组患者的MGMT和CAPRIN1蛋白阳性表达率分别为52.56%和74.36%,分别明显高于对照组的5.00%和30.00%,差异均有统计学意义(P﹤0.01);观察组患者的FBXW7蛋白阳性表达率为28.21%,明显低于对照组的85.00%,差异有统计学意义(P﹤0.01)。死亡脑胶质瘤患者脑胶质瘤组织中MGMT蛋白的阳性表达率为86.67%,明显高于生存患者的44.44%,差异有统计学意义(P﹤0.01)。病理分级为Ⅲ~Ⅳ级脑胶质瘤患者脑胶质瘤组织中CAPRIN1蛋白的阳性表达率为89.19%,明显高于病理分级为Ⅰ~Ⅱ级患者的60.98%,差异有统计学意义(P﹤0.01)。病理分级为Ⅲ~Ⅳ级脑胶质瘤患者脑胶质瘤组织中FBXW7蛋白的阳性表达率为10.81%,明显低于病理分级为Ⅰ~Ⅱ级患者的43.90%,差异有统计学意义(P﹤0.01)。结论脑胶质瘤组织中MGMT和CAPRIN1蛋白表达上调,而FBXW7蛋白表达下调,其中MGMT蛋白可能与患者预后有关,而CAPRIN1和FBXW7蛋白与病理分级有关。

核受体结合SET域蛋白1催化活性区域B细胞优势表位的预测与分析

目的预测核受体结合SET域蛋白1催化活性区域(NSD1-CD)B细胞优势表位,并分析其功能。方法以NSD1-CD的氨基酸序列为基础,利用生物信息学软件,采用Hopp&Woods亲水性方案、Zimmerman极性参数、Jameson-Wolf抗原指数方案和Emini表面可及性方案等,进一步运用抗原指数预测,并结合三级结构分析NSD1-CD B细胞优势表位及其功能。结果NSD1全长为2696个氨基酸,NSD1-CD(1852~2082)由231个氨基酸组成,相对分子质量为26.53 k Da。经综合分析,NSD1-CD B细胞优势表位可能存在于NSD1全长序列N端的1865~1869及1959~1964区段,优势表位KKPPP(1865~1869)距离s-腺苷甲硫氨酸较近,可能与转甲基功能关系紧密。结论多参数预测NSD1-CD B细胞优势表位可为应用多肽小片段制备单克隆抗体、表位疫苗及研究其蛋白功能提供重要的依据。

蛋白质赖氨酸甲基转移酶在甲状腺癌中的研究进展

蛋白质赖氨酸甲基转移酶(protein lysine methyltransferase,PKMT)能催化组蛋白尾部和非组蛋白靶标上的赖氨酸残基甲基化。这类重要的翻译后修饰,可影响染色质的结构和紧密程度,进而影响基因表达。越来越多证据表明,PKMT的遗传改变会影响PKMT在组织中的正常表达从而发挥致癌或抑癌功能。在多种实体瘤中发现PKMT的表达与肿瘤病人的预后有关。本综述总结Zeste增强子同源物2(enhancer of zeste homologue 2,EZH2)、组蛋白-赖氨酸N-甲基转移酶2(histone-lysine N-methyltransferase 2,KMT2)家族和含有SET结构域及MYND结构域蛋白(SET and MYND domain-containing protein,SMYD)家族三类主要PKMT的功能及其在甲状腺癌中的作用。

SMYD2对心脏成纤维细胞的增殖和胶原合成的影响

目的探讨组蛋白甲基转移酶SMYD2对心脏成纤维细胞(CFs)的增殖和胶原合成的影响。方法体外分离培养CFs,通过转染SMYD2干扰RNA(siRNA),在CFs中降低SMYD2的表达,利用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)处理各组细胞,检测以下指标:(1)噻唑蓝(MTT)法检测CFs增殖;(2)Western Blot和qPCR检测SMYD2、促进转化生长因子β1、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原等指标的表达。

沉默SETDB1对肾癌细胞生长的影响及分子机制研究

目的探讨组蛋白赖氨酸N端甲基转移酶SET结构域分支型1(SETDB1)对人肾癌细胞增殖、凋亡的影响。方法体外培养肾癌ACHN细胞及正常肾小管上皮HK-2细胞,qRT-PCR及Western blot分别检测两种细胞系中SETDB1 mRNA及蛋白的表达。采用转染SETDB1特异性干扰性小核糖核酸(siRNA)敲低ACHN细胞中SETDB1表达,并采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)、Western blot检测SETDB1的敲低效果,CCK-8法、溴脱氧尿嘧啶核苷(Brd U)结合试验检测细胞活力与增殖,流式细胞仪、caspase3/7活性分析检测细胞凋亡的变化。采用qRTPCR、Western blot检测沉默SETDB1后p53 mRNA及蛋白的表达水平。结果 SETDB1在肾癌ACHN细胞中表达水平明显高于正常肾小管上皮HK-2细胞(t=14.435,P<0.01);转染SETDB1特异性siRNA沉默SETDB1表达后,ACHN细胞中SETDB1 mRNA(t=13.091,P<0.01)及其蛋白表达水平明显降低;ACHN细胞活力显著降低(P<0.05);细胞内DNA复制活性明显降低(P<0.01);细胞凋亡率增加(t=6.765,P<0.01);Csapase3/7酶活性提高(t=5.763,P<0.01);同时p53 mRNA(t=9.241,P<0.01)及蛋白的表达水平显著提高。结论 SETDB1在肾癌细胞中表达升高,下调SETDB1能够通过促进p53表达而发挥抗肿瘤生长作用。

组蛋白甲基化转移酶SMYD3在肺癌中的研究进展

组蛋白甲基化转移酶SET和MYND结构域蛋白3(SET and MYND domain-containing protein 3,SMYD3)是催化组蛋白和非组蛋白底物甲基化的酶,在许多生物学环境中发挥关键作用,如肌肉发育和部分癌症的进展。本综述对SMYD3进行相关的基本介绍,并探讨SMYD3在肺癌中的研究,旨在为SMYD3在肺癌中的进一步研究提供依据。

上皮性卵巢癌患者SMYD3蛋白表达与化疗耐药、预后的相关性分析

目的分析上皮性卵巢癌(EOC)患者组蛋白甲基化转移酶3 SMYD3表达水平及其与化疗耐药、预后的关系。方法收集2015年11月至2017年11月经中国医科大学附属盛京医院确诊并进行手术的98份EOC组织标本与相应的98份癌旁组织标本(距肿瘤边缘4 cm处)。采用免疫组织化学染色法检测SMYD3表达水平,采用Spearman等级相关分析SMYD3与化疗耐药的相关性,Cox回归分析探讨EOC患者预后的影响因素。结果EOC组织中SMYD3高表达率明显高于癌旁组织(68.37%vs 28.57%,P<0.01);SMYD3高表达与FIGO分期、分化程度、淋巴结转移、铂反应有关(P<0.05);SMYD3表达高低与化疗耐药呈正相关(r=0.662,P<0.01)。随访时间3~36个月,中位生存期26个月,其中SMYD3高表达、低表达者中位生存期分别为20、34个月,两者比较差异有统计学意义(P<0.01)。单因素分析示,FIGOⅢ+Ⅳ期、肿瘤低分化、淋巴结转移、SMYD3高表达、化疗耐药EOC患者的生存时间均显著缩短(P<0.05,P<0.01);多因素Cox回归分析示,肿瘤低分化、淋巴结转移、FIGOⅢ+Ⅳ期、SMYD3高表达、化疗耐药均是影响EOC预后的独立危险因素(P<0.05)。结论SMYD3表达在EOC组织中明显高于癌旁组织,且SMYD3表达与化疗耐药呈正相关,高表达患者更容易出现复发,预后较差,SMYD3有望作为EOC诊治的生物标志物。

组蛋白甲基化转移酶SMYD3与肿瘤

组蛋白甲基化转移酶SMYD3(SET and MYND domain containing 3)在肿瘤表观遗传学中具有重要作用。SMYD3基因在多种肿瘤细胞内高表达,通过调节肿瘤细胞的增殖、凋亡、浸润和迁移等生物学功能,促进肿瘤的发生和发展。以前研究发现,SMYD3主要通过使组蛋白H3K4发生甲基化来调控目的基因的表达。最近几年的研究则表明,SMYD3还可以通过作用于其他组蛋白和细胞质蛋白来调节目的基因的表达,从而促进肿瘤的发生。本文介绍了SMYD3的结构、上游调控通路以及协同作用分子,并对其调控肿瘤的分子机制、表达情况和抑制剂研究进展等进行综述。