甲状腺乳头状癌组织中SETDB2、Gal-3、PLEKHS1的表达情况及其对患者预后的预测价值

目的分析SET结构域分叉组蛋白赖氨酸甲基转移酶2(SETDB2)、半乳糖凝集素3(Gal-3)、pleckstrin同源结构域S1(PLEKHS1)在甲状腺乳头状癌组织中的表达情况,以及三者对患者预后的预测价值。方法(1)选择118例甲状腺乳头状癌患者作为研究组,45例甲状腺良性结节患者作为对照组。采用免疫组化法检测甲状腺乳头状癌组织和甲状腺良性结节组织中SETDB2、Gal-3、PLEKHS1蛋白表达情况。比较研究组与对照组之间,以及不同特征甲状腺乳头状癌患者之间病灶组织中SETDB2、Gal-3、PLEKHS1蛋白的阳性表达率。(2)随访1年,记录甲状腺乳头状癌患者的生存情况。分析SETDB2、Gal-3、PLEKHS1蛋白阳性表达和阴性表达患者的生存率;比较预后良好和预后不良患者SETDB2、Gal-3、PLEKHS1蛋白的阳性表达率。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析SETDB2、Gal-3、PLEKHS1对甲状腺乳头状癌患者预后的预测价值。结果(1)与对照组相比,研究组病灶组织中SETDB2蛋白阳性表达率较低,Gal-3、PLEKHS1蛋白阳性表达率较高(P<0.05)。在甲状腺乳头状癌患者中,Ⅲ~Ⅳ期、浸润深度≥1/2、组织中低分化、淋巴结转移、肿瘤直径>1 cm的患者病灶组织中SETDB2蛋白阳性表达率更低,Gal-3、PLEKHS1蛋白阳性表达率更高(P<0.05)。(2)在甲状腺乳头状癌患者中,SETDB2蛋白阳性表达患者生存率高于SETDB2蛋白阴性表达患者,Gal-3、PLEKHS1蛋白阳性表达患者生存率低于Gal-3、PLEKHS1蛋白阴性表达患者(P<0.05);预后良好患者的SETDB2蛋白阳性表达率高于预后不良患者,Gal-3、PLEKHS1蛋白阳性表达率低于预后不良患者(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,SETDB2、Gal-3、PLEKHS1蛋白总评分预测甲状腺乳头状癌患者预后不良的曲线下面积分别为0.826、0.841、0.859。结论在甲状腺乳头状癌中,SETDB2呈低表达,而Gal-3、PLEKHS1呈高表达,三者均与患者的病情严重程度相关,且对预后具有一定的预测价值。

SMYD2在宫颈癌中的表达变化及意义

目的:探讨组蛋白赖氨酸甲基转移酶SET和MYND结构域蛋白2(SET and MYND domain-containing protein 2,SMYD2)在宫颈癌细胞糖代谢中的作用,进一步研究其是否与宫颈癌增殖有关。方法:通过基因表达谱交互分析(gene expression profiling interactive analysis,GEPIA)数据库分析SMYD家族成员在宫颈癌中的表达和预后价值,通过log-rank检验进行生存差异比较。通过SMYD2的shRNA敲低或过表达技术来研究SMYD2在宫颈癌中的糖代谢作用。结果:宫颈癌组织中SMYD2的表达与患者年龄、性别、肿瘤组织分化程度无关,SMYD2的过表达预示总体生存期较差与临床分期相关(F=4.520,P=0.004)。生物信息分析揭示了SMYD2在调控宫颈癌中Warburg效应中发挥调节作用。通过功能缺失实验,证明SMYD2的敲低抑制了宫颈癌细胞的有氧糖酵解,表现为葡萄糖摄取减少,乳酸生成降低和细胞外酸化减弱,而SMYD2过表达则促进子宫颈癌细胞的糖酵解代谢。此外,SMYD2是宫颈癌细胞生长所必需的,并且这种致癌作用主要依赖糖酵解。结论:SMYD2在宫颈癌细胞中过表达并在肿瘤代谢中发挥重要作用,能够通过调节有氧酵解促进宫颈癌细胞增殖。

SETD2mRNA在鼻咽癌组织中的表达及其与LMP1的关系

目的检测鼻咽癌组织和鼻咽癌细胞株中人源含SET结构域蛋白2(SETD2)mRNA的表达,并分析其与EB病毒编码的潜伏膜蛋白1(LMP1)的关系。方法取42例初诊鼻咽癌患者(观察组)和15例慢性鼻咽黏膜炎症患者(对照组)的手术活检组织标本,另取人高分化鼻咽癌细胞株CNE1和稳定转染LMP1基因的CNE1细胞株CNE1-LMP1,采用实时荧光相对定量PCR方法检测观察组、对照组鼻咽组织以及CNE1-LMP1与CNE1中的SETD2 mRNA。结果观察组SETD2 mRNA相对表达量为1.596±0.916,低于对照组的2.194±1.144,且随淋巴结转移分级升高而降低(P均<0.05);CNE1-LMP1中SETD2 mRNA相对表达量为0.676±0.042,低于CNE1的0.870±0.114(P<0.05)。结论 SETD2在鼻咽癌组织中的表达下调,可能与鼻咽癌的发生发展有关,SETD2基因表达下调可能与EB病毒编码的LMP1有关。

miR-17-5p通过靶向SETD2调控骨髓增生异常综合征SKM-1细胞的增殖与凋亡

目的:探讨miR-17-5p和含SET结构域蛋白2(SETD2)对骨髓增生异常综合征(MDS)SKM-1细胞增殖与凋亡的影响及其作用机制。方法:收集2019年3月至2021年5月衡水市人民医院就诊的35例MDS患者的骨髓标本(MDS组)、35例健康体检者的骨髓标本(对照组),以及MDS细胞系SKM-1。用qPCR法检测MDS骨髓和SKM-1细胞中miR-17-5p、SETD2 mRNA的表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证miR-17-5p与SETD2的靶向关系。利用脂质体转染技术,分别将si-miR-NC、si-miR-17-5p、miR-NC、miR-17-5p mimic、pcDNA、pcDNA-SETD2、si-miR-17-5p+si-NC、si-miR-17-5p+si-SETD2等转染至SKM-1细胞,CCK-8法、流式细胞术检测细胞的增殖和凋亡水平,WB法检测细胞中SETD2、C-caspase-3、C-caspase-9的表达。结果:与对照组相比,MDS组骨髓中miR-17-5p表达水平显著升高、SETD2的mRNA和蛋白表达水平均显著降低(均P<0.01)。与si-miR-NC组相比,si-miR-17-5p组SKM-1细胞增殖能力显著降低、凋亡率显著升高,细胞中C-caspase-3和C-caspase-9表达显著升高(均P<0.01)。miR-17-5p明显抑制野生型SETD2细胞的荧光素酶活性(P<0.01),并负向调控SETD2的表达。过表达SETD2可显著抑制SKM-1细胞的增殖并促进细胞凋亡,同时干扰SETD2表达则可部分逆转干扰miR-17-5p对SKM-1细胞的增殖抑制和凋亡促进作用。结论:MDS骨髓中miR-17-5p呈高表达,干扰miR-17-5p可抑制SKM-1细胞增殖并促进细胞凋亡,其机制与miR-17-5p靶向负调控SETD2的表达有关。

SETD2在肾癌中的研究进展

肾癌是泌尿系统常见的恶性肿瘤之一。随着全球肾癌发病率的逐年升高,深入研究其发病机制、治疗和预后情况及其影响因素十分必要。除希佩尔-林道基因外,含SET结构域蛋白2(SETD2)基因也是肾癌较为常见的突变基因,SETD2基因突变在多种恶性肿瘤发生发展过程中有重要作用,SETD2基因编码一种组蛋白甲基转移酶,而组蛋白甲基转移酶是表观遗传学调控的一种重要形式。因此,SETD2基因突变与肾癌细胞代谢、免疫学及免疫微环境、DNA损伤修复及患者预后、鉴别诊断等关系的研究也逐渐受到重视。

核受体结合SET结构域蛋白2和狐猴酪氨酸激酶-3在前列腺癌组织的表达及其临床意义

目的探讨核受体结合SET结构域蛋白2(NSD2)和狐猴酪氨酸激酶-3(LMTK3)在前列腺癌组织的表达及其临床意义。方法收集2014年5月至2020年12月大庆油田总医院病理学检查确诊的26例良性前列腺增生组织标本和80例前列腺癌组织标本,使用免疫组织化学法检测组织中NSD2蛋白和LMTK3蛋白的表达水平,选用χ^(2)检验进行统计学分析。结果前列腺癌组织中NSD2蛋白阳性表达率为72.50%(58/80),明显高于前列腺增生组织[19.23%(5/26)],两者差异有统计学意义(χ^(2)=23.095,P<0.01);前列腺癌组织中LMTK3阳性表达率为32.50%(26/80),明显低于前列腺增生组织[61.54%(16/26)],两者差异有统计学意义(χ^(2)=6.917,P<0.01)。NSD2表达水平与前列腺癌组织学分级、精囊腺侵犯、临床分期明显相关(χ^(2)=6.304、4.287、5.205,P<0.05)。LMTK3表达水平与前列腺癌精囊腺侵犯、临床分期明显相关(χ^(2)=4.828、4.941,P<0.05)。结论NSD2高表达和LMTK3低表达在前列腺癌的发生发展过程中起重要作用,检测NSD2和LMTK3有助于判断前列腺癌侵袭转移能力。

蛋白质赖氨酸甲基转移酶在甲状腺癌中的研究进展

蛋白质赖氨酸甲基转移酶(protein lysine methyltransferase,PKMT)能催化组蛋白尾部和非组蛋白靶标上的赖氨酸残基甲基化。这类重要的翻译后修饰,可影响染色质的结构和紧密程度,进而影响基因表达。越来越多证据表明,PKMT的遗传改变会影响PKMT在组织中的正常表达从而发挥致癌或抑癌功能。在多种实体瘤中发现PKMT的表达与肿瘤病人的预后有关。本综述总结Zeste增强子同源物2(enhancer of zeste homologue 2,EZH2)、组蛋白-赖氨酸N-甲基转移酶2(histone-lysine N-methyltransferase 2,KMT2)家族和含有SET结构域及MYND结构域蛋白(SET and MYND domain-containing protein,SMYD)家族三类主要PKMT的功能及其在甲状腺癌中的作用。

SMYD3过表达对人肝内胆管癌细胞miR-124表达及细胞增殖的影响

目的:探讨肝内胆管癌细胞HCCC-9810中SET和MYND结构域含有蛋白3(SET and MYND domain-containing protein 3,SMYD3)过表达对miR-124表达及细胞增殖能力的影响。方法:瞬时转染SMYD3真核表达质粒后,Western blotting检测细胞中SMYD3蛋白水平的变化;qRT-PCR检测细胞中SMYD3 mRNA和miR-124表达;甲基化特异性PCR检测miR-124-1、miR-124-2和miR-124-3基因启动子甲基化水平;CCK-8和平板克隆形成实验检测细胞增殖能力。结果:以空白组为对照,肝内胆管癌细胞HCCC-9810在转染pEGFP-SMYD3质粒后,SMYD3蛋白及mRNA表达均显著上升(P<0.05),miR-124-1、miR-124-2和miR-124-3基因启动子甲基化显著增加(P<0.05),miR-124表达明显下降(P<0.05),细胞增殖能力显著提高(P<0.05)。结论:过表达SMYD3可引起miR-124基因启动子甲基化增加,导致胆管癌细胞中miR-124的表达下降,同时过表达SMYD3可增强细胞增殖能力。

SMYD2和FA2H表达与甲状腺乳头状癌关系的临床研究

目的:探究甲状腺乳头状癌(PTC)组织中SET和MYND结构域蛋白2(SMYD2)、脂肪酸2-羟基化酶(FA2H)的表达及其与临床病理特征、预后的关系。方法:收集2013年6月至2015年2月我院手术治疗的PTC患者的组织样本(癌组织和癌旁正常组织),实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测组织样本中SMYD2、FA2H mRNA表达情况;以SMYD2、FA2H mRNA表达水平的中位数为界,分为高表达组和低表达组,分析SMYD2、FA2H表达与PTC临床病理特征及预后的关系;多因素Cox回归模型分析PTC患者预后影响因素。结果:与癌旁正常组织相比,PTC癌组织中SMYD2、FA2H mRNA相对表达量增加(均P<0.05)。PTC癌组织中,SMYD2表达与肿瘤侵犯包膜、浸润深度及临床分期相关(均P<0.05);FA2H表达与肿瘤直径、淋巴结转移及临床分期相关(均P<0.05)。SMYD2高表达组与低表达组患者的5年总生存率(OS)、5年无病生存率(RFS)比较,差异有统计学意义(均P<0.05);FA2H高表达组与低表达组患者的5年OS、5年RFS比较,差异有统计学意义(均P<0.05)。多因素Cox回归模型分析结果表明,SMYD2表达水平、FA2H表达水平、淋巴结转移及临床分期是影响PTC患者预后的危险因素。结论:PTC癌组织中SMYD2、FA2H均呈高表达状态,且均与较差临床病理特征、不良预后相关;SMYD2、FA2H可能是预测PTC患者预后的潜在指标。

SMYD2通过抑制APC2激活WNT/β-catenin通路影响结直肠癌细胞的迁移和侵袭

目的:探讨SET和MYND域包含蛋白质2(SET and MYND domaincontaining protein 2,SMYD2)调控结直肠癌(colorectal cancer,CRC)细胞迁移和侵袭的机制。方法:从徐州医科大学附属医院收集2019年08月至2020年03月的24对结直肠癌及癌旁组织,进行实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)分析SMYD2的表达量。构建SMYD2和腺瘤性息肉病蛋白2(adenomatous polyposis coli 2,APC2)的小干扰RNA,使用Transwell和蛋白免疫印迹实验检测转染后结直肠癌细胞的迁移和侵袭能力。结果:癌组织中SMYD2的mRNA和蛋白表达量显著高于癌旁组织(P<0.001,P<0.05),且结直肠癌细胞系SW480和HCT116中SMYD2的表达量显著高于正常结直肠细胞系FHC(P<0.001)。在SW480和HCT116细胞中敲低SMYD2后细胞的迁移和侵袭能力减弱(P<0.01),同时E-cadherin的表达量升高(P<0.001),而N-cadherin和Vimentin的表达量降低(P<0.01)。生物信息学分析显示,SMYD2与APC2的表达呈负相关(P<0.001),且APC2可以抑制WNT/β-catenin通路。在SW480和HCT116细胞中敲低SMYD2后APC2的表达量增高(P<0.001),而WNT/β-catenin通路中的β-catenin、c-MYC和CyclinD1表达降低(P<0.01)。敲低APC2可以恢复SMYD2敲低引起的SW480和HCT116细胞的迁移和侵袭降低(P<0.001),E-cadherin升高(P<0.001)和N-cadherin、Vimentin、β-catenin、c-MYC、CyclinD1降低(P<0.01)。结论:在结直肠癌细胞中,SMYD2通过抑制APC2激活WNT/β-catenin通路促进结直肠癌细胞的上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT),从而影响细胞的迁移和侵袭能力。

急性淋巴细胞白血病患者miR377-和SMYD3表达水平与临床预后意义

目的探讨急性淋巴细胞白血病患者微小RNA-377(miR-377)和SET及MYND结构域包含蛋白3(SMYD3)表达水平及临床预后意义。方法选择2016年3月至2020年6月该院收治的135例急性淋巴细胞白血病患者作为观察组,同时选择同期120例体检健康者作为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测研究对象外周血miR-377、SMYD3表达水平。随后比较不同组别、不同临床特征及不同疗效的患者miR-377、SMYD3表达水平差异,并采用Kaplan-Meier法和多因素Cox回归模型分析miR-377、SMYD3与急性淋巴细胞白血病患者预后的关系。结果观察组miR-377表达水平低于对照组,SMYD3表达水平高于对照组(P<0.05)。miR-377高表达组患者的危险度分型,白细胞计数(WBC)(入院时、入院1月后),乳酸脱氢酶(LDH)(入院时、入院1月后),骨髓原幼细胞比例均明显低于miR-377低表达组(P<0.05)。SMYD3高表达组患者的危险度分型,WBC(入院时、入院1月后),LDH(入院时、入院1月后),骨髓原幼细胞比例均明显高于SMYD3低表达组(P<0.05)。完全缓解(CR)组miR-377、SMYD3表达水平与对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05),miR-377表达水平从低到高依次为未缓解(NR)组、部分缓解(PR)组、CR组、对照组(P<0.05),SMYD3表达水平从高到低依次为NR组、PR组、CR组、对照组(P<0.05)。miR-377高表达组总生存率(65.33%)明显高于miR-377低表达组(41.67%)(P<0.05),SMYD3高表达组总生存率(41.94%)明显低于SMYD3低表达组(65.75%)(P<0.05)。多因素Cox回归模型分析显示,危险度分型、WBC、LDH、骨髓原幼细胞比例、miR-377、SMYD3均为影响急性淋巴细胞白血病患者预后的危险因素(P<0.05)。结论急性淋巴细胞白血病患者miR-377呈低表达水平,SMYD3呈高表达水平,且二者表达水平与患者临床特征、疗效及预后均密切相关,因此可作为评估患者临床预后的有效指标。

组蛋白甲基转移酶SETD7抑制剂PFI-2对小鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的影响

目的 观察组蛋白甲基转移酶SETD7抑制剂PFI-2对小鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)成骨分化的影响。方法 颈椎脱臼法处死4只C57BL/6小鼠,采用贴壁筛选法提取BMSCs,分别应用0、2、5、10、20μmol/L浓度PFI-2溶液处理96 h,采用CCK-8法检测细胞活力,选择对BMSCs活力无影响的2、5、10μmol/L浓度PFI-2溶液进行后续实验。取对数生长期BMSCs,分为空白对照组(α-MEM培养基)、成骨诱导组(成骨诱导培养基)、2μmol/L PFI-2组(成骨诱导培养基+2μmol/L PFI-2)、5μmol/L PFI-2组(成骨诱导培养基+5μmol/L PFI-2)、10μmol/L PFI-2组(成骨诱导培养基+10μmol/L PFI-2)。药物处理第3、7、14天取空白对照组和成骨诱导组细胞,采用实时荧光定量PCR法检测SETD7相对表达量。药物处理第7天取各组细胞,行BCIP/NBT染色,采用比色法检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)活性,采用实时荧光定量PCR法检测Runx2、Osterix mRNA相对表达量,采用Western blot法检测Runx2、Osterix蛋白相对表达量。药物处理第14天取各组细胞,行茜素红染色观察钙结节染色情况。结果 20μmol/L PFI-2组细胞活力低于0、2、5、10μmol/L PFI-2组(P<0.05),0、2、5、10μmol/L PFI-2组两两比较差异均无统计学意义(P>0.05)。成骨诱导组成骨分化诱导第7、14天SETD7相对表达量(1.42±0.15、2.22±0.22)均高于空白对照组(1.00±0.13、1.00±0.18)(t=3.648,P=0.022;t=7.513,P=0.002),成骨分化诱导第3天(1.06±0.11)与空白对照组(1.00±0.14)比较差异无统计学意义(t=0.547,P=0.614)。药物处理第7天,成骨诱导组和2、5、10μmol/L PFI-2组ALP活性(3.70±0.39、3.04±0.25、2.45±0.21、1.60±0.34)均高于空白对照组(1.00±0.04)(P<0.05);成骨诱导组ALP活性高于5、10μmol/L PFI-2组(P<0.05),与2μmol/L PFI-2组比较差异均无统计学意义(P>0.05);2、5μmol/L PFI-2组ALP活性均高于10μmol/L PFI-2组(P<0.05)。BCIP/NBT染色显示,空白对照组无明显ALP阳性细胞,成骨诱导组和2、5、10μmol/L PFI-2组均有ALP阳性细胞,成骨诱导组ALP阳性细胞多于5、10μmol/L PFI-2组,与2μmol/L PFI-2组无明显差异。药物处理第7天,成骨诱导组和2、5、10μmol/L PFI-2组Runx2、Osterix mRNA及蛋白相对表达量均高于空白对照组(P<0.05);成骨诱导组和2、5、10μmol/L PFI-2组Runx2、Osterix mRNA及Runx2蛋白相对表达量依次降低(P<0.05);成骨诱导组和2μmol/L PFI-2组Osterix蛋白相对表达量高于5、10μmol/L PFI-2组(P<0.05),成骨诱导组与2μmol/L PFI-2组,5μmol/L PFI-2组与10μmol/L PFI-2组Osterix蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。药物处理第14天,茜素红染色显示,空白对照组未见明显钙结节形成;成骨诱导组和2、5、10μmol/L PFI-2组均可见钙结节形成;与成骨诱导组相比,2、5、10μmol/L PFI-2组钙结节数量明显减少,10μmol/L PFI-2组钙结节减少最明显。结论 成骨分化诱导后BMSCs细胞SETD7表达上调,PFI-2呈剂量依赖性抑制SETD7活性,进而抑制BMSCs成骨分化,其机制可能是PFI-2靶向调控Runx2和Osterix表达,抑制ALP活性,钙盐沉积减少。

上皮性卵巢癌患者SMYD3蛋白表达与化疗耐药、预后的相关性分析

目的分析上皮性卵巢癌(EOC)患者组蛋白甲基化转移酶3 SMYD3表达水平及其与化疗耐药、预后的关系。方法收集2015年11月至2017年11月经中国医科大学附属盛京医院确诊并进行手术的98份EOC组织标本与相应的98份癌旁组织标本(距肿瘤边缘4 cm处)。采用免疫组织化学染色法检测SMYD3表达水平,采用Spearman等级相关分析SMYD3与化疗耐药的相关性,Cox回归分析探讨EOC患者预后的影响因素。结果EOC组织中SMYD3高表达率明显高于癌旁组织(68.37%vs 28.57%,P<0.01);SMYD3高表达与FIGO分期、分化程度、淋巴结转移、铂反应有关(P<0.05);SMYD3表达高低与化疗耐药呈正相关(r=0.662,P<0.01)。随访时间3~36个月,中位生存期26个月,其中SMYD3高表达、低表达者中位生存期分别为20、34个月,两者比较差异有统计学意义(P<0.01)。单因素分析示,FIGOⅢ+Ⅳ期、肿瘤低分化、淋巴结转移、SMYD3高表达、化疗耐药EOC患者的生存时间均显著缩短(P<0.05,P<0.01);多因素Cox回归分析示,肿瘤低分化、淋巴结转移、FIGOⅢ+Ⅳ期、SMYD3高表达、化疗耐药均是影响EOC预后的独立危险因素(P<0.05)。结论SMYD3表达在EOC组织中明显高于癌旁组织,且SMYD3表达与化疗耐药呈正相关,高表达患者更容易出现复发,预后较差,SMYD3有望作为EOC诊治的生物标志物。

NSD2在肿瘤中的研究进展

核受体结合SET结构域蛋白2 (NSD2)是一种含有SET结构域的组蛋白甲基转移酶,具有多种生物学功能,在肿瘤中发挥致癌作用。近期许多研究表明NSD2在血液系统肿瘤和多种实体肿瘤组织中过表达,不仅参与肿瘤发生,还与肿瘤进展及化疗耐药相关。本文对NSD2的结构功能、NSD2与肿瘤的关系以及NSD2抑制剂的研究进展进行归纳总结,探讨NSD2在肿瘤发生发展中的作用和潜在的靶向治疗价值。