敲低SET7慢病毒载体的构建及对乳腺癌细胞生长的影响

目的为了探讨组蛋白甲基转移酶SET7在乳腺癌发生发展中的功能,构建SET7基因的RNA干扰(RNAi)慢病毒表达载体,研究其对乳腺癌细胞ZR75-1生长的影响。方法根据人SET7的c DNA序列,设计SET7基因短发夹RNA(shRNA)引物,并克隆到p SIH-H1-Puro载体上,包装成慢病毒,感染人乳腺癌细胞ZR75-1,通过实时定量(real-time)PCR以及Western印迹检测干扰效果,并通过生长曲线研究敲低SET7对ZR75-1细胞生长的影响。结果 DNA测序结果表明,SET7 shRNA慢病毒表达载体构建成功。实时定量PCR和Western印迹结果显示,SET7 shRNA能有效抑制SET7基因的表达。生长曲线实验表明,敲低SET7可抑制人乳腺癌细胞ZR75-1的生长。结论成功构建了SET7 shRNA慢病毒表达载体,感染人乳腺癌细胞ZR75-1后,有效抑制了内源SET7基因的表达,敲低SET7能抑制ZR75-1细胞的生长,为进一步研究SET7在乳腺癌中的功能奠定了基础。

组蛋白甲基转移酶SET7的原核表达及纯化鉴定

目的原核表达并纯化组蛋白甲基转移酶SET7。方法以乳腺文库为模板,PCR扩增SET7基因,克隆到pGEX-KG载体,构建pGEX-KG-SET7;经酶切鉴定后转化进行小量诱导,通过SDS-PAGE检测融合蛋白GSTSET7的纯化效果。结果 DNA测序结果表明,pGEX-KG-SET7原核表达载体构建成功。SDS-PAGE检测显示获得相对分子质量为72×103的融合蛋白。结论纯化得到原核表达的GST-SET7融合蛋白,为进一步研究SET7在乳腺癌中的功能奠定了基础。