miR-381-3p对口腔癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的调控作用及其机制

目的 观察微小RNA(miR)-381-3p对口腔癌细胞增殖、侵袭、迁移能力的调控作用,并基于甲基转移酶SETDB1基因调控探讨相关机制。方法 采用RT-PCR法检测口腔癌细胞系CAL-27和正常口腔黏膜上皮细胞系ATCC中的miR-381-3p。培养CAL-27细胞,分为模拟物组、阴性对照组和未转染组,模拟物组和阴性对照组分别转染miR-381-3p模拟物和miR-381-3p阴性对照,未转染组不进行转染;采用CCK-8法检测细胞增殖能力,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力,划痕愈合实验检测细胞迁移能力。采用TargetScan(http://www. targetscan. org/vert_80/)预测miR-381-3p与SETDB1结合位点,应用双荧光素酶报告基因分析进行验证;采用RT-PCR法检测CAL-27细胞和ATCC细胞中的SETDB1 mRNA,Western blotting法检测SETDB1蛋白;将CAL-27细胞分为模拟物组、阴性对照组和未转染组,模拟物组、阴性对照组分别转染miR-381-3p模拟物和阴性对照,未转染组不进行转染,采用RT-PCR法检测SETDB1 mRNA。结果 CAL-27细胞中miR-381-3p表达低于ATCC细胞(P<0.05)。模拟物组在培养12、24、36、48 h时细胞增殖能力低于阴性对照组和未转染组(P均<0.05)。模拟物组细胞迁移距离、穿膜细胞数均低于阴性对照组和未转染组(P均<0.05)。SETDB1存在连续的、可以与miR-381-3p互补的核苷酸序列;共转染SETDB1-WT和miR-381-3p质粒的CAL-27细胞相对荧光素酶活性低于其他组细胞(P均<0.05);CAL-27细胞中SETDB1mRNA和蛋白表达高于ATCC细胞(P均<0.05);模拟物组SETDB1 mRNA表达低于阴性对照组和未转染组(P均<0.05)。结论 miR-381-3p能够抑制口腔癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力,其作用机制可能与调节SETDB1表达有关。

SETDB1在乳腺癌中的表达及对癌细胞株增殖和迁移能力的影响

目的研究组蛋白甲基化酶SETDB1在乳腺癌中的表达情况及对其癌细胞株增殖和迁移能力的影响。方法采用RT-PCR、Western blot和IHC方法检测38例乳腺癌与癌旁组织及癌细胞株中SETDB1的表达水平;采用稳定转染方法筛选出沉默SETDB1基因的克隆细胞株,采用CCK-8、软琼脂克隆形成及流式细胞术检测沉默SETDB1后对肿瘤细胞增殖能力的影响;采用Transwell方法检测沉默后对肿瘤细胞迁移能力的影响。结果 38例乳腺癌与癌旁组织中23例癌组织、13例癌旁组织阳性表达(P<0.05),SETDB1的mRNA水平相对表达量分别为(1.20±0.08)、(0.96±0.05)(t=2.44,P<0.05);沉默T47D中SETDB1基因后,GFP、sh2、sh4株形成克隆个数分别是(70.00±2.00)、(42.67±1.53)和(13.33±1.53)个(F=834.00,P<0.001);细胞周期中sh2株出现了G0/G1期阻滞,而sh4株出现了G2/M期阻滞(P<0.01);48 h穿膜个数分别是(54.25±1.71)、(16.50±1.29)、(9.00±0.82)个(F=1344.00,P<0.001)。结论 SETDB1在乳腺癌中高表达,沉默该基因可影响癌细胞株的增殖和迁移能力,有望作为乳腺癌诊断及治疗的新靶点。