不同功能化合物对迁移体形成的影响研究

目的探讨SF1670、秋水仙碱、二甲双胍、阿司匹林等4种不同功能化合物对迁移体形成的影响。方法Vigofect化学转染法构建L929过表达Tspan4-mCherry细胞系,分为空白对照组(不含任何药物的完全培养基)、SF1670组(4μmol/L)、秋水仙碱组(0.6μmol/L)、二甲双胍组(32μmol/L)和阿司匹林组(1μmol/L),分别作用11 h;活细胞成像实验拍摄细胞产生的迁移体;Fiji-Image J统计迁移体产生数量,收缩纤维形成面积,直径及长度。结果共聚焦成像结果显示,L929过表达Tspan4-mCherry细胞系建立成功,产生了收缩纤维和迁移体。4种药物对迁移体影响结果显示,与空白对照组比较,SF1670组迁移体产生数量减少(P<0.01),收缩纤维的形成面积和长度被明显抑制(P<0.0001);秋水仙碱组迁移体产生数量明显减少(P<0.0001),收缩纤维的形成面积轻微减少(P<0.05);二甲双胍组细胞收缩纤维形成面积(P<0.05)和直径(P<0.0001)均减少;阿司匹林组细胞迁移体产生数量增加(P<0.01),收缩纤维的直径轻微缩短(P<0.05)。结论SF1670、秋水仙碱、二甲双胍、阿司匹林对迁移体和收缩纤维的形成具有不同程度的影响,迁移体可能在肿瘤、2型糖尿病、炎症、心肌梗死等疾病中发挥重要作用。

白藜芦醇对高糖环境下肾小管上皮细胞PTEN表达及纤维化效应的影响

观察白藜芦醇(resveratrol,Res)对高糖培养条件下的大鼠肾小管上皮细胞第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源基因(phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten,PTEN)表达的影响,探讨Res减轻高糖条件下肾小管上皮细胞纤维化病变效应的作用及可能机制。将高糖培养的大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)给予Res或PTEN抑制剂SF1670预处理后,分别设正常糖组(NG)、正常糖+SF1670组(NS)、高糖组(HG)、高糖+SF1670组(HS)、高糖+不同浓度(5、10、25μmol·L^(-1))Res处理组。采取免疫荧光细胞化学法观察E-cadherin、α-SMA在肾小管上皮细胞中的表达和分布;Western blot法检测PTEN、E-cadherin、α-SMA、p-Akt^((Thr308))、collagen Ⅳ蛋白的表达变化;real-time PCR法检测PTEN mRNA的表达水平。结果显示,与NG组相比,HG组PTEN mRNA和蛋白表达减少,E-cadherin蛋白表达减少,而α-SMA、p-Akt^((Thr308))、collagenⅣ蛋白表达增多。与HG组相比,随Res剂量增加,PTEN mRNA和蛋白表达水平逐渐上调,E-cadherin蛋白表达水平逐渐上调,α-SMA、collagen Ⅳ、p-Akt^((Thr308))蛋白表达水平逐渐下调,呈量效依赖性。与NG组相比,NS组无明显差异。与HG组相比,HS组E-cadherin蛋白表达进一步减少,α-SMA、p-Akt^((Thr308))、collagen Ⅳ蛋白表达进一步增多,而PTEN mRNA和蛋白表达无明显差异。使用PTEN抑制剂后不影响PTEN,但其他蛋白表达变化均与Res处理后的效应相反,且加重了纤维化病变效应,提示SF1670产生作用是通过抑制PTEN,激活Akt,增加collagen Ⅳ等细胞外基质(extracellular matrix,ECM)的合成,从而促进纤维化。结果表明,Res可拮抗高糖介导的肾小管上皮细胞纤维化病变效应,其机制可能是通过上调PTEN抑制PI3K/Akt信号通路而实现的。