【目的】验证鸡circSFMBT2的环形结构,探究其表达规律及功能。【方法】以麒麟鸡和DF-1细胞为研究对象,根据反向剪切位点序列特征设计引物,通过PCR和测序验证circSFMBT2的环形结构。通过RNase R和反转录试验分析circSFMBT2的基本特性,利...【目的】验证鸡circSFMBT2的环形结构,探究其表达规律及功能。【方法】以麒麟鸡和DF-1细胞为研究对象,根据反向剪切位点序列特征设计引物,通过PCR和测序验证circSFMBT2的环形结构。通过RNase R和反转录试验分析circSFMBT2的基本特性,利用qRT-PCR探究不同组织、不同时期circSFMBT2的表达水平。通过构建过表达载体,结合qRT-PCR、Edu和CCK-8等试验,探究circSFMBT2对鸡DF-1细胞增殖的影响。【结果】鸡circSFMBT2全长827 nt,由SFMBT2基因外显子12~18环化形成。RNase R耐受性试验表明,circSFMBT2不易被RNase R降解,随机引物对circSFMBT2的反转录效率是Oligo-d(T)18引物的8倍。组织表达谱表明,circSFMBT2在麒麟鸡14胚龄以及1周龄的肝脏和脾脏中高表达、在胸肌和腿肌中低表达。circSFMBT2在胸肌和腿肌的时序表达谱表明,circSFMBT2在胚胎时期表达量较高,出生后表达量迅速下降。在DF-1细胞中circSFMBT2过表达48 h后,增殖标记基因PCNA和CCND1的表达量分别较对照组上调85%和92%。E d u和C C K-8细胞增殖试验表明,鸡c i r c S F M B T 2可以促进细胞增殖进程。【结论】circSFMBT2是鸡SFMBT2基因的一个环状转录本,可以促进DF-1细胞的增殖,研究结果为深入探究鸡circSFMBT2的生物学功能和作用机制奠定了基础。展开更多
旨在揭示Gab1(Grb2-associated binding protein 1)和Sfmbt2(Scm-like with four mbt domains 2)基因在牛不同组织以及胎盘中的印记状态,本研究应用基于单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorphisms,SNP)的RT-PCR(Reverse transcrip...旨在揭示Gab1(Grb2-associated binding protein 1)和Sfmbt2(Scm-like with four mbt domains 2)基因在牛不同组织以及胎盘中的印记状态,本研究应用基于单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorphisms,SNP)的RT-PCR(Reverse transcription-PCR)产物直接测序方法对Gab1和Sfmbt2基因在牛7个组织(心、肝、脾、肺、肾、肌肉和脂肪)以及胎盘中的印记状态进行分析。结果显示,在被分析的7个组织和胎盘中均检测到Gab1和Sfmbt2基因的表达。通过比较杂合子牛基因组PCR扩增产物与RT-PCR扩增产物在SNP位点的测序峰图,发现Gab1和Sfmbt2在被检测的7个组织和胎盘中均为双等位基因表达,说明Gab1和Sfmbt2在牛的组织和胎盘中是非印记的。展开更多
文摘【目的】验证鸡circSFMBT2的环形结构,探究其表达规律及功能。【方法】以麒麟鸡和DF-1细胞为研究对象,根据反向剪切位点序列特征设计引物,通过PCR和测序验证circSFMBT2的环形结构。通过RNase R和反转录试验分析circSFMBT2的基本特性,利用qRT-PCR探究不同组织、不同时期circSFMBT2的表达水平。通过构建过表达载体,结合qRT-PCR、Edu和CCK-8等试验,探究circSFMBT2对鸡DF-1细胞增殖的影响。【结果】鸡circSFMBT2全长827 nt,由SFMBT2基因外显子12~18环化形成。RNase R耐受性试验表明,circSFMBT2不易被RNase R降解,随机引物对circSFMBT2的反转录效率是Oligo-d(T)18引物的8倍。组织表达谱表明,circSFMBT2在麒麟鸡14胚龄以及1周龄的肝脏和脾脏中高表达、在胸肌和腿肌中低表达。circSFMBT2在胸肌和腿肌的时序表达谱表明,circSFMBT2在胚胎时期表达量较高,出生后表达量迅速下降。在DF-1细胞中circSFMBT2过表达48 h后,增殖标记基因PCNA和CCND1的表达量分别较对照组上调85%和92%。E d u和C C K-8细胞增殖试验表明,鸡c i r c S F M B T 2可以促进细胞增殖进程。【结论】circSFMBT2是鸡SFMBT2基因的一个环状转录本,可以促进DF-1细胞的增殖,研究结果为深入探究鸡circSFMBT2的生物学功能和作用机制奠定了基础。
文摘旨在揭示Gab1(Grb2-associated binding protein 1)和Sfmbt2(Scm-like with four mbt domains 2)基因在牛不同组织以及胎盘中的印记状态,本研究应用基于单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorphisms,SNP)的RT-PCR(Reverse transcription-PCR)产物直接测序方法对Gab1和Sfmbt2基因在牛7个组织(心、肝、脾、肺、肾、肌肉和脂肪)以及胎盘中的印记状态进行分析。结果显示,在被分析的7个组织和胎盘中均检测到Gab1和Sfmbt2基因的表达。通过比较杂合子牛基因组PCR扩增产物与RT-PCR扩增产物在SNP位点的测序峰图,发现Gab1和Sfmbt2在被检测的7个组织和胎盘中均为双等位基因表达,说明Gab1和Sfmbt2在牛的组织和胎盘中是非印记的。
