苦参碱抑制胃癌细胞株SGC7901增殖的实验研究

目的探讨苦参碱作用人胃癌细胞株SGC7901后,对细胞增殖的影响。方法应用不同浓度苦参碱(1.5mg/ml、0.75mg/ml、0.375mg/ml、0.1875mg/ml)作用体外培养人胃癌细胞株SGC7901后,分别用倒置显微镜观察细胞形态学改变;MTT法检测苦参碱对SGC7901细胞的增殖抑制作用。结果不同浓度苦参碱作用人胃癌细胞株SGC7901后,与对照组比较细胞生长明显受到抑制(P<0.05),抑制率从18.7%到86.4%。随着苦参碱浓度的增加及时间的延长,SGC7901存活细胞显著减少,呈明显的时间-剂量依赖性。结论苦参碱能显著抑制人胃癌细胞株SGC7901细胞增殖。

PDGF-D对人胃癌细胞株SGC7901的作用

目的:探讨血小板衍生生长因子-D(PDGF-D)及其受体PDGFRβmRNA在人胃癌细胞株SGC7901中的表达及其意义。方法:用RT-PCR方法检测人胃癌细胞株SGC7901中PDGF-D及PDGFRβmRNA的表达,将人重组PDGF-D蛋白分别以0、20、50、100、500、2 500、25 000、250 000 pg/mL浓度加入人胃癌细胞株SCG7901中,采用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT法)检测胃癌细胞株SCG7901的增殖情况并画出生长曲线;采用流式细胞仪检测细胞周期变化。结果:PDGF-D及PDGFRβmRNA在胃癌细胞株中表达。MTT检测发现外源性PDGF-D蛋白可以促进SGC7901细胞增殖(P<0.05)。细胞周期分析显示外源性PDGF-D蛋白干预细胞后实验组G0/G1期细胞比例下降,S期细胞比例上升(P<0.05)。结论:PDGF-D在胃癌的发生、发展中可能起着重要的作用。PDGF-D可能成为治疗胃癌的新的靶点。

紫杉醇对胃癌细胞株SGC7901的杀伤作用及机制分析

目的探讨紫杉醇作用人胃癌细胞株SGC7901后,对细胞的杀伤作用和杀伤机制。方法通过MTT观察不同浓度紫杉醇对SGC7901细胞凋亡的影响,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫组化的方法检测bax和c-myc基因的表达情况。结果紫杉醇诱导胃癌细胞株的凋亡增加,其中凋亡基因bax的表达增高,bax的蛋白表达也增高;而促进细胞无限增殖的c-myc基因表达降低,同时c-myc蛋白表达降低。结论紫杉醇对胃癌细胞株生长有明显的抑制作用,紫杉醇通过bax和c-myc基因的表达变化诱导胃癌细胞株的凋亡。

基质细胞衍生因子-1基因转染对人胃癌细胞株SGC7901增殖、耐药的影响及其机制

目的观察基质细胞衍生因子-1(SDF-1)基因转染对人胃癌细胞株SGC7901增殖、耐药的影响,并探讨其可能作用机制。方法 取对数生长期 SGC7901 细胞分为实验组、阴性对照组、空白对照组,实验组、阴性对照组分别转染pcDNA3.1-SDF-1质粒、pcDNA3.1质粒(空白质粒),空白对照组不做任何处理。质粒转染48 h时分别采用RT-PCR法、Western bloting法检测细胞SDF-1 mRNA及蛋白,质粒转染24、48、72、96 h时MTT法测算三组细胞增殖能力(以光密度OD值表示),质粒转染48 h时观察三组细胞对奥沙利铂的耐药性(以奥沙利铂对细胞的半数抑制浓度IC 50 表示),质粒转染48 h时流式细胞仪测算三组细胞凋亡率,质粒转染48 h时Western blotting法检测三组细胞上皮型钙黏蛋白( E-cadherin)、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)及波形蛋白(Vimentin)、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3-Ⅱ)自噬相关因子(Beclin 1)。结果 与空白对照组、阴性对照组比较,培养48 h时实验组细胞SDF-1 mRNA及蛋白相对表达量均升高( P 均<0.05)。与空白对照组、阴性对照组比较,培养24、48、72、96 h实验组细胞OD值均升高( P 均<0.05)。质粒转染48 h时奥沙利铂对实验组、空白对照组、阴性对照组细胞的IC 50 值分别为 28.039 ±3.011、10.403±1.253、10.612±1.044(μg/mL),与空白对照组、阴性对照组比较,奥沙利铂对实验组细胞的IC 50 值升高( P 均<0.05)。质粒转染48 h时实验组、空白对照组、阴性对照组细胞凋亡率分别为39.10%± 2.26%、53.90%±3.19%、51.30%±3.37%,与空白对照组、阴性对照组比较,实验组细胞凋亡率降低( P 均< 0.05 )。质粒转染48 h时倒置显微镜下可见实验组细胞存在上皮-间质转化(EMT)现象,加入奥沙利铂后实验组细胞自噬活动增加;与空白对照组、阴性对照组比较,实验组细胞E-cadhein蛋白相对表达量降低,N-cadhein、Vimentin、LC3-Ⅱ、Beclin 1蛋白相对表达量均升高( P 均<0.05)。结论 SDF-1基因过表达可促进SGC7901细胞增殖,显著提高SGC7901细胞对奥沙利铂的耐药性,可能与SDF-1促进EMT、诱导细胞自噬增加进而抑制细胞凋亡有关。

氯化两面针碱对胃癌细胞株SGC7901凋亡的影响及初步机制

目的探讨氯化两面针碱对胃癌细胞株SGC7901凋亡的影响,并研究其可能的初步机制.方法MTT法检测不同浓度氯化两面针碱(0、5、10、20和40?mol/L)对胃癌细胞株SGC7901存活率的影响;Hoechst染色观察SGC7901细胞的形态学;Annexin V-FITC/PI双染法检测SGC7901细胞的凋亡;JC-1单标法检测细胞内线粒体膜电位变化;免疫印迹法检测caspase-3剪切体、caspase-9剪切体和PARP剪切体与其各自未激活体的蛋白表达变化.结果S G C 7 9 0 1的存活率随着氯化两面针碱浓度的增加而逐渐下降,并与时间呈正相关;Hoechst染色与Annexin V-FITC/PI双染法结果分别显示氯化两面针碱干预后SGC7901细胞的凋亡特征更显著,细胞凋亡率明显增多;经过氯化两面针碱处理后,SGC7901细胞线粒体膜电位显著下降,caspase-3剪切体、caspase-9剪切体和PARP剪切体蛋白表达水平显著上升,其未激活体蛋白表达明显下降.结论氯化两面针碱呈浓度依赖性抑制SGC7901细胞的存活率,增加细胞凋亡率,可能是通过激活内源性线粒体通路有关.

siRNA沉默转录因子OCT1对胃癌细胞株生物学功能的影响

目的探究沉默转录因子OCT1对胃癌细胞株MGC803和SGC7901生物学功能的影响。方法应用腺病毒做载体包装OCT1-siRNA,并转染人胃癌细胞株MGC803和SGC7901。应用MTT法和细胞侵袭实验检测OCT1-siRNA转染是否成功、胃癌细胞增殖和侵袭力的变化。采用Western blot法检测对照组、OCT1-siRNA组及阴性OCT1-siRNA组中人胃癌细胞中OCT1蛋白的表达量。结果胃癌细胞株MGC803和SGC7901转染OCT1-siRNA 48和72h后,对照组和OCT1-siRNA阴性组细胞增殖能力和细胞侵袭力高/强于OCT1-siRNA组(P均<0.05)。MGC803和SGC7901细胞OCT1-siRNA组中OCT1蛋白表达水平均下降(F=118.72、91.23,P均<0.05)。结论应用siRNA技术干扰沉默转录因子OCT1的功能后,胃癌细胞株的增殖能力和侵袭力减弱,表明转录因子OCT1可能增强了胃癌细胞的生物学活性。

胃癌细胞体外药敏试验中的条件优化

目的：探讨胃癌细胞体外药敏试验中的适宜条件。方法：利用正交试验，取3个水平4个因素进行全面考察，筛选出最佳实验条件。结果：胃癌细胞体外药敏试验中应取（2～3）×10^4个／ml细胞密度，并在接种后立即加入10PPC的抗癌药物，药物作用时间为72h。结论：经正交试验筛选出的最佳试验条件可有效提高体外药敏试验的灵敏度，为临床个体化疗提供方法学依据。

槲皮素对胃癌细胞增殖抑制作用的初步观察

目的 :初步观察槲皮素对人胃腺癌SGC790 1细胞增殖的影响。方法 :噻唑蓝 (MTT)比色法检测胃癌细胞的增殖。结果 :不同浓度的槲皮素对胃癌细胞增殖有抑制作用 ,且呈明显的时效关系和量效关系。结论 :体外实验显示槲皮素具有一定细胞毒作用 ,对SGC790 1细胞增殖具有一定抑制作用。

洛铂对人胃癌细胞株SGC7901放射敏感性的影响

目的探讨洛铂对人胃癌细胞株SGC7901放射敏感性的影响。方法 MTT法获得洛铂对人胃癌细胞株SGC7901的半数抑制浓度(IC50),分A组(洛铂4.0μg/ml+0、2、4、6、8Gy照射)和B组(0、2、4、6、8Gy照射),计算洛铂对细胞的放射增敏比(SER)。人胃癌细胞株SGC7901分为洛铂4.0μg/ml+4Gy照射(C组)、4Gy照射(D组)和空白对照(E组),流式细胞术检测三组细胞凋亡率,Western blot测定三组细胞凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和活化型半胱天冬酶-3(Caspase-3)表达水平。结果洛铂的IC50为20.66μg/ml,洛铂的SER为1.08。C、D组细胞凋亡率高于E组(P<0.01),C组凋亡率高于D组(P<0.05)。C、D组Bcl-2表达低于E组,而Bax、活化型Caspase-3表达高于E组(P<0.01)。C组Bcl-2表达低于D组,而Bax、活化型Caspase-3表达高于D组(P<0.05)。结论洛铂对人胃癌细胞株SGC7901具有放射增敏作用。其作用机制可能是抑制SGC7901细胞Bcl-2表达,激活Bax表达,与线粒体通路Bcl-2/BaxCaspase信号传导有关。

Inhibitory effect of acetylshikonin on human gastric carcinoma cell line SGC-7901 in vitro and in vivo

AIM:To investigate the inhibitory effect of acetylshikonin on human gastric carcinoma cell line SGC-7901 and its mechanism. METHODS:MTT assay was used to assess the inhibitory effect of acetylshikonin on proliferation of SGC-7901 cells.Apopt osis-inducing effect was determined by flow cytometry and terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP-biotin nick end-labeling with Hoechst staining.Expression of mRNA and protein in Bcl-2 and Bax was analyzed by reverse transcription-polymerase chain reaction and Western blot.Antitumor effect of acetylshikonin on a mouse SGC-7901 model was also determined. RESULTS:Forty-eight hours after treatment with acetylshikonin,MTT assay showed that acetylshikonin inhibited the proliferation of SGC-7901 cells in a dose-dependent manner.The half maximal inhibitory concentration of acetylshikonin to SGC-7901 cells was 0.428±0.07 mg/L.Cell shrinkage,nuclear pyknosis and chromatin condensation,which are the characteristics of cell apoptosis,were observed in treated SGC-7901 cells and the percentage of apoptosis increased in a dose-dependent manner.Acetylshikonin downregulated the expression of Bcl-2 and up-regulated the expression of Bax in the treated SGC-7901 cells compared with the controls.The experiment in vivo showed that 0.5,1,and 2 mg/kg of acetylshikonin significantly inhibited the growth of tumor in the mouse SGC-7901 model,with an inhibitory rate of 25.00%-55.76%. CONCLUSION:Acetylshikonin inhibits the growth of SGC-7901 cells in vitro and in vivo by inducing cell apoptosis.

慢病毒siRNA靶向干扰YAP基因胃癌细胞株的建立

目的:构建并鉴定YAP基因短发夹干扰RNA(shRNA)慢病毒载体,建立稳定干扰YAP基因表达的胃癌细胞株SGC7901。方法:荧光定量PCR检测YAP基因在多种胃癌细胞株中的表达情况。构建重组靶向YAP基因的shRNA慢病毒表达质粒PGC-shRNA-YAP,用脂质体转染的方法将载体导入胃癌细胞。经杀稻瘟菌素筛选后,建立稳定表达siRNA的细胞株。荧光定量PCR检测干扰效率。结果:在胃癌细胞株SGC7901中,YAP基因显示高表达。测序验证PGC-shRNA-YAP重组质粒构建成功。将重组质粒稳定转染入胃癌细胞株SGC7901后能明显抑制YAPmRNA表达水平。结论:成功构建了PGC-shRNA-YAP慢病毒重组质粒,建立了靶向稳定干扰YAP基因表达的siRNA胃癌细胞株SGC7901。

氧化苦参碱对人胃癌SGC-7901细胞增殖的影响

目的探讨氧化苦参碱对人胃癌SGC-7901细胞增殖的影响。方法分别应用2.0、1.5、1.0、0.5mg/mL氧化苦参碱体外培养人胃癌细胞SGC-7901,分别于培养24、48、72h后以倒置显微镜观察细胞形态学改变,采用MTT法观察不同浓度和作用时间下氧化苦参碱对SGC-7901细胞的抑制情况,并与对照组(不进行氧化若参碱处理)进行比较。结果 2.0 mg/mL浓度组氧化苦参碱作用人胃癌细胞株SGC-7901后24h抑制率[(35.500±0.014)%]高于1.5mg/mL组[(23.000±0.004)%]、1.0mg/mL组[(20.300±0.013)%]、0.5mg/mL[(15.700±0.007)%]和对照组(0),48h抑制率[(64.100±0.004)%]高于1.5mg/mL组[(45.400±0.013)%]、1.0mg/mL组[(44.700±0.031)%]、0.5mg/mL[(23.000±0.033)%]和对照组(0)(P<0.05),72h抑制率[(82.400±0.133)%]高于1.5 mg/mL组[(66.000±0.035)%]、1.0mg/mL组[(58.900±0.120)%]、0.5mg/mL[(34.900±0.024)%]和对照组(0)(P<0.05)。结论氧化苦参碱可抑制人胃癌细胞株SGC7901细胞增殖,细胞抑制率与氧化苦参碱浓度呈时间-剂量依赖性。

开口箭皂苷诱导肿瘤细胞凋亡研究

目的:研究开口箭皂苷对肿瘤细胞凋亡的影响,并对其机制进行研究。方法:采用MTT法检测开口箭皂苷对体外培养的肿瘤细胞系HepG2、A549和SGC-7901增殖的影响,利用荧光染色技术及流式细胞术研究开口箭皂苷对HepG2细胞周期和细胞凋亡的影响,利用Western blotting技术检测Bax、Bcl-2、P53蛋白的表达情况。结果:开口箭皂苷对HepG2肝癌细胞具有显著的抑制作用,其24、48及72 h对HepG2细胞的半数抑制浓度(IC50)分别为13.99μg/ml、11.78μg/ml和10.01μg/ml,且呈一定的量效关系和时效关系;对A549肺癌细胞的72h的IC50为23.68μg/ml,而对SGC-7901胃癌细胞的增殖无明显抑制作用。流式细胞仪检测结果显示,HepG2细胞经浓度为10、15和20μg/ml的开口箭皂苷处理24h后,S期细胞的比例分别为28.81%、34.96%、46.57%;凋亡细胞的比例分别为30.06%、30.32%和40.34%。Western blotting结果显示,随着开口箭皂苷浓度的增加,Bax、P53蛋白的表达量增加,而Bcl-2的表达量减少。结论:开口箭皂苷可抑制HepG2和A549细胞的增殖并诱导HepG2细胞凋亡,其机制可能与开口箭皂苷上调P53蛋白表达,从而影响Bax和Bcl-2表达,使细胞阻滞于S期,并最终导致细胞凋亡。