选择性COX-2抑制剂尼美舒利抑制胃癌细胞株SGC7901端粒酶的活性

目的:探讨选择性COX-2抑制剂尼美舒利对胃癌细胞株SGC7901细胞增生及端粒酶活性的影响,为选择性COX-2抑制剂应用于胃癌的防治提供新的理论依据.方法:用不同浓度的尼美舒利(0,50,100,200及400μmol/L)处理SGC7901胃癌细胞株后,采用MTT比色试验和PCR-ELSIA半定量法检测细胞的增生和端粒酶活性,同时用相差显微镜动态观察细胞形态及生长方式上的改变.结果:尼美舒利呈时间剂量依赖性抑制SGC7901细胞的生长,同时他也能显著抑制SGC7901细胞的端粒酶的活性,50,100,200及400μmol/L浓度的尼美舒利实验组的吸光度值分别为2.12±0.11,1.54±0.08,1.13±0.09,0.79±0.12vs2.76±0.06(P<0.01),并呈剂量依赖关系.结论:选择性COX-2抑制剂尼美舒利能抑制胃癌细胞株SGC7901的端粒酶活性,进而抑制其细胞生长,这也可能是选择性COX-2抑制剂抗肿瘤作用的又一新的机制.

Serrin B和Nodosin对HL60、SGC7901、LOVO、U87、AGZY细胞株的毒性作用

目的探讨天然药物Serrin B和Nodosin对人早幼粒白血病细胞株HL60、人胃腺癌细胞株SGC7901、人结肠癌细胞株LOVO、人胶质瘤细胞株U87、人肺腺癌细胞株AGZY的毒性作用。方法将对数期生长的HL60、SGC7901、LOVO、U87、AGZY细胞株接种于96孔板中,细胞贴壁后,分别加入Serrin B或Nodosin,使药物的终浓度分别为0.00、1.25、2.50、5.00、10.00、20.00μmol.L-1,24 h后用四甲基偶氮唑盐法检测细胞株的死亡率。结果 Serrin B对HL60、SGC7901、LOVO、U87和AGZY细胞株均有较强的毒性作用(P<0.01),且其毒性作用呈现剂量-效应关系。Nodosin对HL60、SGC7901、LOVO、U87细胞株具有较强的毒性作用(P<0.05,P<0.01),而对AGZY细胞株无明显毒性作用。结论 Serrin B和Nodosin是中药溪黄草抗癌作用的有效成分,为人类多种肿瘤治疗的新药研究开发提供新的思路。

SGC7901细胞株染色体标本制备条件的探索和比较

目的 :探索胃癌SGC790 1细胞株的染色体制备过程中的适宜条件 ,提高细胞株染色体标本制备的质量。方法 :对细胞株使用不同终浓度的秋水仙碱 ,不同时间的低渗作用以及不同时间的胰酶消化。结果 :秋水仙碱的浓度对染色体的形态长度有明显的影响 ,低渗时间对染色体的分散程度和胞浆去除有一定影响 ,胰酶消化时间对染色体G显带结果有直接影响。结论 :提高染色体标本质量 ,必须摸索。

恩度联合紫杉醇热化疗对人胃癌SGC7901细胞株增殖抑制及凋亡影响

目的观察恩度联合紫杉醇热化疗对人胃癌SGC7901细胞株增殖抑制及凋亡的影响。方法取对数生长人胃癌SGC7901细胞株,分为对照组、41℃、42℃、43℃、44℃组,5组分别加入终浓度30 nmol/L、60 nmol/L、120 nmol/L、240 nmol/L、480 nmol/L紫杉醇,于水浴箱中分别水浴0.5 h、1 h、1.5 h,72 h后MTT法测定紫杉醇热化疗对SGC7901胃癌细胞株细胞抑制作用并确定最佳紫杉醇浓度及热疗温度、热作用时间。流式细胞术分别检测对照组、恩度组(15 mg/L),紫杉醇热化疗组,恩度联合组(恩度+紫杉醇热化疗)的细胞凋亡率并进行细胞周期分析。结果随着紫杉醇浓度以及温度的提高,SGC7901细胞株的抑制率逐步升高。在紫杉醇浓度480 nmol/L、43℃作用1 h条件下,SGC7901细胞株的抑制率达到70.99%,在各组最高。细胞凋亡率在对照组、恩度组、紫杉醇热化疗组以及联合治疗组分别为0.70%、1.48%、8.56%、12.97%。细胞周期分析可见与对照组相比恩度组的增殖期(S+G2/M)细胞比例由(52.5±2.1)%下降到(42.3±2.0)%(P<0.05),紫杉醇热化疗组G2/M期细胞比例由(15.2±1.4)%上升至(32.1±2.2)%(P<0.05)。与紫杉醇热化疗组相比,恩度联合治疗组的G2/M期细胞比例由(32.1±2.2)%下降到(19.9±1.3)%,而G1期比例由(30.5±1.7)%上升到(48.1±2.4)%(P<0.05)。结论 43℃热作用1 h联合480 nmol/L紫杉醇对人胃癌SGC7901细胞株增殖抑制作用在5组中最强,紫杉醇热化疗联合恩度后能够进一步增加对SGC7901胃癌细胞株的抑制作用,并诱导其凋亡。

PDGF-D对人胃癌细胞株SGC7901的作用

目的:探讨血小板衍生生长因子-D(PDGF-D)及其受体PDGFRβmRNA在人胃癌细胞株SGC7901中的表达及其意义。方法:用RT-PCR方法检测人胃癌细胞株SGC7901中PDGF-D及PDGFRβmRNA的表达,将人重组PDGF-D蛋白分别以0、20、50、100、500、2 500、25 000、250 000 pg/mL浓度加入人胃癌细胞株SCG7901中,采用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT法)检测胃癌细胞株SCG7901的增殖情况并画出生长曲线;采用流式细胞仪检测细胞周期变化。结果:PDGF-D及PDGFRβmRNA在胃癌细胞株中表达。MTT检测发现外源性PDGF-D蛋白可以促进SGC7901细胞增殖(P<0.05)。细胞周期分析显示外源性PDGF-D蛋白干预细胞后实验组G0/G1期细胞比例下降,S期细胞比例上升(P<0.05)。结论:PDGF-D在胃癌的发生、发展中可能起着重要的作用。PDGF-D可能成为治疗胃癌的新的靶点。

不同浓度苦参碱对人胃癌细胞株SGC7901的作用及其机制研究

目的:观察不同浓度苦参碱对人胃癌细胞株SGC7901生长的影响及其机制。方法:体外培养人胃癌细胞株SGC7901,分别用不同浓度的苦参碱处理,CCK-8法检测SGC7901细胞的生长情况,RT-PCR法检测miR-221相对表达量。结果:不同浓度的苦参碱对SGC7901细胞增殖有明显的抑制作用,miR-221相对表达量随苦参碱浓度的增加而降低。结论:苦参碱可以抑制胃癌SGC7901细胞的增殖,其作用机制可能与抑制细胞内的miR-221表达有关。

苦参碱抑制胃癌细胞株SGC7901增殖的实验研究

目的探讨苦参碱作用人胃癌细胞株SGC7901后,对细胞增殖的影响。方法应用不同浓度苦参碱(1.5mg/ml、0.75mg/ml、0.375mg/ml、0.1875mg/ml)作用体外培养人胃癌细胞株SGC7901后,分别用倒置显微镜观察细胞形态学改变;MTT法检测苦参碱对SGC7901细胞的增殖抑制作用。结果不同浓度苦参碱作用人胃癌细胞株SGC7901后,与对照组比较细胞生长明显受到抑制(P<0.05),抑制率从18.7%到86.4%。随着苦参碱浓度的增加及时间的延长,SGC7901存活细胞显著减少,呈明显的时间-剂量依赖性。结论苦参碱能显著抑制人胃癌细胞株SGC7901细胞增殖。

罗格列酮逆转丝裂霉素对人胃癌SGC7901/VCR细胞株耐药的作用

目的探讨过氧化物酶体增殖子活化受体γ(PPARγ)配体罗格列酮(ROS),对耐药胃癌SGC7901/VCR细胞药物敏感性的影响。方法以长春新碱(VCR)诱导的人胃癌多药耐药细胞SGC7901/VCR及其亲代SGC7901为研究对象,应用MTT比色法及集落形成实验,研究罗格列酮对丝裂霉素(MMC)抑制人胃癌SGC7901细胞及其耐药亚系SGC7901/VCR细胞生长及增殖的影响及罗格列酮逆转SGC7901/VCR细胞对MMC的耐药作用。结果 ROS对SGC7901/VCR及SGC7901细胞生长具有明显抑制作用,且其作用与ROS浓度呈时间-剂量依赖关系;40μmmol/L、80μmmol/L ROS逆转SGC7901/VCR细胞对MMC的耐药倍数(RI)分别为9.6、10.5,与增敏对照组作用相当(P>0.05);集落形成实验结果显示,ROS与MMC联用降低SGC7901/VCR细胞的集落形成率。结论罗格列酮能部分逆转多药耐药胃癌细胞株SGC7901/VCR对MMC的耐药。

乙酰肝素酶反义寡核苷酸对人胃癌细胞株SGC7901表达bFGF的抑制作用

目的 探讨乙酰肝素酶反义寡核苷酸(AS-ODN)对人胃癌细胞株SGC7901表达碱性成纤维细胞生长因子(basic fibrob-last growth factor,bFGF)的影响。方法 AS-ODN和乙酰肝素酶mRNA起始密码子区互补,无义寡核苷酸(NS-ODN)为对照组,用阳离子脂质体包裹ODNs并转入SGC7901细胞;转染后48小时提取细胞总RNA,半定量RT-PCR法检测乙酰肝素酶基因的含量,免疫细胞化学法检测bFGF的表达。结果 AS-ODN处理后SGC7901表达乙酰肝素酶mRNA下降;处理前bFGF的表达率为72.23％,不同浓度(0.1、0.2、0.4、0.8μmol／L)AS-ODN处理后bFGF的表达率下降程度不同(分别为57.15％、51.11％、42.36％和40.25％)。结论 和乙酰肝素酶mRNA起始密码子区互补的AS-ODN对SGC7901表达bFGF有明显影响,且呈剂量相关性。

槐定碱抑制人胃癌细胞株SGC7901增殖的实验研究

目的观察槐定碱对人胃癌细胞株SGC7901增殖的影响。方法应用不同浓度槐定碱作用于体外培养的人胃癌细胞株SGC7901,分别用倒置显微镜观察各组细胞形态学改变,MTT法检测SGC7901细胞吸光度及生长抑制率。结果不同浓度的槐底碱与阴性对照组比较,细胞生长明显受到抑制(P<0.05),抑制率3.6%-72.1%。随着槐定碱浓度的增加,SGC7901存活细胞显著减少,呈明显的剂量依赖性。结论槐定碱能显著抑制人胃癌细胞株SGC7901细胞增殖。

莪术油含药血清逆转胃癌SGC7901/CDDP多药耐药的研究

目的探讨莪术油含药血清对胃癌耐药细胞株SGC7901/CDDP的耐药逆转作用。方法血清药理法制备莪术油含药血清;MTT法检测莪术油含药血清对SGC7901/CDDP细胞的生长抑制作用;MTT法检测莪术油含药血清作用下化疗药对SGC7901/CDDP细胞生长抑制作用的变化,计算出莪术油含药血清的耐药逆转倍数。结果莪术油高、中剂量含药血清均可逆转SGC7901/CDDP细胞的耐药性(P<0.05),逆转倍数分别为6.06,2.61。结论莪术油含药血清可逆转胃癌耐药细胞株SGC7901/CDDP的耐药性,高剂量组莪术油含药血清的耐药逆转效果明显高于中剂量组,提示制备动物含药血清时,加大动物给药剂量可以增加逆转效果。

紫杉醇对胃癌细胞株SGC7901的杀伤作用及机制分析

目的探讨紫杉醇作用人胃癌细胞株SGC7901后,对细胞的杀伤作用和杀伤机制。方法通过MTT观察不同浓度紫杉醇对SGC7901细胞凋亡的影响,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫组化的方法检测bax和c-myc基因的表达情况。结果紫杉醇诱导胃癌细胞株的凋亡增加,其中凋亡基因bax的表达增高,bax的蛋白表达也增高;而促进细胞无限增殖的c-myc基因表达降低,同时c-myc蛋白表达降低。结论紫杉醇对胃癌细胞株生长有明显的抑制作用,紫杉醇通过bax和c-myc基因的表达变化诱导胃癌细胞株的凋亡。

基质细胞衍生因子-1基因转染对人胃癌细胞株SGC7901增殖、耐药的影响及其机制

目的观察基质细胞衍生因子-1(SDF-1)基因转染对人胃癌细胞株SGC7901增殖、耐药的影响,并探讨其可能作用机制。方法 取对数生长期 SGC7901 细胞分为实验组、阴性对照组、空白对照组,实验组、阴性对照组分别转染pcDNA3.1-SDF-1质粒、pcDNA3.1质粒(空白质粒),空白对照组不做任何处理。质粒转染48 h时分别采用RT-PCR法、Western bloting法检测细胞SDF-1 mRNA及蛋白,质粒转染24、48、72、96 h时MTT法测算三组细胞增殖能力(以光密度OD值表示),质粒转染48 h时观察三组细胞对奥沙利铂的耐药性(以奥沙利铂对细胞的半数抑制浓度IC 50 表示),质粒转染48 h时流式细胞仪测算三组细胞凋亡率,质粒转染48 h时Western blotting法检测三组细胞上皮型钙黏蛋白( E-cadherin)、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)及波形蛋白(Vimentin)、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3-Ⅱ)自噬相关因子(Beclin 1)。结果 与空白对照组、阴性对照组比较,培养48 h时实验组细胞SDF-1 mRNA及蛋白相对表达量均升高( P 均<0.05)。与空白对照组、阴性对照组比较,培养24、48、72、96 h实验组细胞OD值均升高( P 均<0.05)。质粒转染48 h时奥沙利铂对实验组、空白对照组、阴性对照组细胞的IC 50 值分别为 28.039 ±3.011、10.403±1.253、10.612±1.044(μg/mL),与空白对照组、阴性对照组比较,奥沙利铂对实验组细胞的IC 50 值升高( P 均<0.05)。质粒转染48 h时实验组、空白对照组、阴性对照组细胞凋亡率分别为39.10%± 2.26%、53.90%±3.19%、51.30%±3.37%,与空白对照组、阴性对照组比较,实验组细胞凋亡率降低( P 均< 0.05 )。质粒转染48 h时倒置显微镜下可见实验组细胞存在上皮-间质转化(EMT)现象,加入奥沙利铂后实验组细胞自噬活动增加;与空白对照组、阴性对照组比较,实验组细胞E-cadhein蛋白相对表达量降低,N-cadhein、Vimentin、LC3-Ⅱ、Beclin 1蛋白相对表达量均升高( P 均<0.05)。结论 SDF-1基因过表达可促进SGC7901细胞增殖,显著提高SGC7901细胞对奥沙利铂的耐药性,可能与SDF-1促进EMT、诱导细胞自噬增加进而抑制细胞凋亡有关。

氯化两面针碱对胃癌细胞株SGC7901凋亡的影响及初步机制

目的探讨氯化两面针碱对胃癌细胞株SGC7901凋亡的影响,并研究其可能的初步机制.方法MTT法检测不同浓度氯化两面针碱(0、5、10、20和40?mol/L)对胃癌细胞株SGC7901存活率的影响;Hoechst染色观察SGC7901细胞的形态学;Annexin V-FITC/PI双染法检测SGC7901细胞的凋亡;JC-1单标法检测细胞内线粒体膜电位变化;免疫印迹法检测caspase-3剪切体、caspase-9剪切体和PARP剪切体与其各自未激活体的蛋白表达变化.结果S G C 7 9 0 1的存活率随着氯化两面针碱浓度的增加而逐渐下降,并与时间呈正相关;Hoechst染色与Annexin V-FITC/PI双染法结果分别显示氯化两面针碱干预后SGC7901细胞的凋亡特征更显著,细胞凋亡率明显增多;经过氯化两面针碱处理后,SGC7901细胞线粒体膜电位显著下降,caspase-3剪切体、caspase-9剪切体和PARP剪切体蛋白表达水平显著上升,其未激活体蛋白表达明显下降.结论氯化两面针碱呈浓度依赖性抑制SGC7901细胞的存活率,增加细胞凋亡率,可能是通过激活内源性线粒体通路有关.

c-erbB-2反义寡核苷酸对胃癌细胞株SGC7901的影响

目的 观察c erbB 2反义寡核苷酸 (ASODN)对胃癌细胞株SGC790 1细胞的影响。方法 采用脂质体c erbB 2反义 (ASODN)组及空白对照、错配 (SCODN)组转染SGC790 1细胞 ,采用Westernblot观察c erbB 2蛋白表达的变化 ,采用四氮唑盐 (MTT)比色法测定细胞增殖以及对顺铂细胞毒性的影响。结果 转染ASODN能特异性下调c erbB 2蛋白表达和抑制胃癌细胞增殖。此外 ,顺铂在空白组、ASODN组及SCODN组的抑制率分别为 ( 3 3 .3± 2 .0 ) %、( 4 9.9± 5 .9) %和 ( 3 4.8± 3 .0 ) %。与空白对照组相比 ,ASODN组的抑制率显著增加 (P <0 .0 1)。结论 c erbB

As_2O_3对胃癌细胞SGC7901/ADR阿霉素耐药性逆转作用

目的探讨三氧化二砷(As2O3)对胃癌细胞SGC7901/ADR阿霉素(ADM)耐药性的逆转作用和对Pgp、GSTπ表达的影响。方法以胃癌多药耐药细胞株SGC7901/ADR为靶细胞,用MTT法检测SGC7901/ADR细胞对ADM的敏感性,用流式细胞仪检测细胞内药物浓度及免疫组织化学法检测细胞Pgp、GSTπ表达。结果0.4～0.8μmol/LAs2O3对耐药细胞SGC7901/ADR无明显毒性(P>0.05)。As2O3可下调Pgp、GSTπ表达,提高SGC7901/ADR细胞内ADM浓度,增加SGC7901/ADR细胞对ADM的敏感性。结论As2O3能够抑制SGC7901/ADR细胞Pgp、GSTπ表达,增加细胞内ADM药物浓度而部分逆转其对ADM的耐药性。

MASPIN真核表达载体的构建及对胃癌细胞SGC7901的诱导凋亡作用

背景与目的:MASPIN基因与多种恶性肿瘤的发生密切相关,在细胞的生长、浸润、转移和凋亡中起着十分重要的作用。本研究通过构建MASPIN基因真核表达载体,分析MASPIN过表达对胃腺癌细胞株SGC7901凋亡的影响。方法:构建MASPIN/PCR2.1表达载体,转染胃癌细胞株SGC7901。RT-PCR和Western bolt检测MASPIN基因、Bax/Bcl-2基因表达变化;琼脂糖凝胶电泳检测凋亡特征性DNA梯形带;采用AnnexinV-FIFC/PI检测凋亡率。结果:酶切证实成功构建真核表达质粒MASPIN/PCR2.1;转染重组质粒组MASPIN mRNA(33.6±1.2)和蛋白水平(23.4±1.6)的表达明显高于未处理组(13.7±2.0、12.0±1.3)和空质粒组(15.0±1.5、12.3±1.5,P<0.05);凝胶电泳观察到特征性DNA梯带;各组细胞均有凋亡率的增加且呈时间依赖性:转染重组质粒∕TRAIL作用组最高,12、24、48h分别达到8.0%、16.3%、25.8%,转染重组质粒组为3.0%、8.2%、14.4%,TRAIL作用组为4.1%、9.8%、15.9%(P<0.05);48h转染重组质粒∕TRAIL组BaxmRNA和蛋白表达(55.3±2.1、75.4±1.3)高于转染重组质粒组(34.3±1.2、40.7±1.8,P<0.05)和TRAIL作用组(43.2±1.8、36.2±1.3,P<0.05);48h转染重组质粒∕TRAIL组、转染重组质粒组、TRAIL作用组Bcl-2mRNA表达为28.3±2.5、34.3±1.2、32.8±2.1(P<0.05),蛋白表达为17.4±1.5、45.1±2.1、42.8±1.5(P<0.05)。结论:上调MASIPIN基因的表达能显著增加胃癌细胞对凋亡刺激的敏感性。其机制可能通过上调Bax,下调Bcl-2基因的表达诱导胃癌细胞凋亡。

吡格列酮对人胃癌SGC7901细胞增殖和凋亡的影响

目的研究吡格列酮对人胃癌SGC7901细胞株体外生长的影响。方法采用5 ng·m L^-1 TGF-β1诱导胃癌SGC7901细胞24 h后,给予不同浓度（0、5、10、20、40μmol·L^-1）吡格列酮处理不同时间（0、12、24、48、72 h）,分别采用MTT法和流式细胞术检测细胞增殖和细胞凋亡情况,同时采用实时荧光定量聚合酶链反应技术（RT-q PCR）检测和比较其PPARγm RNA的表达水平。结果在5-40μmol·L-^1的浓度范围内,吡格列酮以剂量和时间依赖性方式抑制5ng·m L^-1的TGF-β1诱导的胃癌SGC7901细胞增殖（P〈0.05）。10μmol·L-1吡格列酮处理人胃癌SGC7901细胞12 h,其凋亡率较对照组显著升高,并随其作用浓度的升高和时间的延长逐渐升高,72 h时最高（P〈0.01）。PPARγm RNA表达水平随着吡格列酮浓度的增加和作用时间的延长而逐渐上调,差异较正常组具有统计学意义（P〈0.05）。结论吡格列酮可能通过上调PPARγ的表达以剂量和时间依赖性方式抑制TGF-β1诱导的人胃癌SGC7901细胞的生长,并促进其凋亡。

重组pEGFP-C1-Smad4表达载体的构建及在SGC7901细胞中的表达

目的:构建pEGFP-C1-Smad4表达载体,并观察其在人胃癌SGC7901细胞中的表达。方法:应用基因重组技术,构建增强绿色荧光蛋白与Smad4的融合表达载体,经限制性内切酶酶切鉴定和PCR分析,用基因转染技术将其转入人胃癌SGC7901细胞,荧光显微镜、Western blot检测其表达。结果:酶切鉴定和PCR分析证实重组质粒中插入的目的基因片段及载体DNA大小、方向和插入位点均正确,在转染的人胃癌SGC7901细胞中观察到绿色荧光蛋白的表达,Western blot检测到Smad4在蛋白水平的表达。结论:成功构建真核表达质粒pEGFP-C1-Smad4,并在胃癌SGC7901细胞瞬时表达成功,为进一步研究Smad4在胃癌发生中的作用奠定基础。

RXRγ、RARβ在9-cis-RA抑制人胃癌SGC7901细胞生长中的作用

目的:探讨维甲类X受体(RXR)γ、RARβ在RXR激动剂9-顺维甲酸(9-cis-RA)抑制人胃癌SGC7901细胞生长中的作用。方法:体外培养SGC7901细胞给予9-cis-RA干预,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、流式细胞术、HE染色、免疫组化染色、Western-blot检测9-cis-RA作用后SGC7901细胞生长情况、凋亡率、细胞周期的改变、RXRγ及RARβ表达情况。结果:SGC7901细胞与9-cis-RA共同培养48h后,肿瘤细胞生长受到抑制,其作用具有浓度及时间依赖性。流式细胞仪检测显示处于G0/G1期的细胞增多,凋亡率增高,免疫组化及Western-blot检测显示20μmol/L的9-cis-RA作用72h后,RXRγ、RARβ蛋白表达增加。结论:9-cis-RA可通过上调RXRγ、RARβ蛋白表达诱导细胞凋亡从而抑制人胃癌SGC7901细胞生长。