芒柄花黄素对人胃癌细胞系SGC7901生长、增殖及侵袭影响

目的:探讨芒柄花黄素(Form)对人胃癌细胞株SGC7901的作用及机制。方法:用不同浓度(0、20、40、80μmol/L)Form处理SGC7901后,采用Hoechst、MTT、流式细胞术等检测细胞抑制率、细胞周期、细胞核形态及凋亡。采用蛋白质印迹检测β-Catenin、p-β-Catenin、Cyclin D1、CDK4及p-AKT、AKT、BCL-2、BAX、Caspase3等蛋白的表达,RT-PCR检测BCL-2、CDK4、CDK6、AKT、Cyclin D1及BAX、Caspase3等m RNA表达。结果:Form抑制SGC7901细胞的增殖,呈浓度和时间依赖性。Hoechst结果表明,相比于对照组(0μmol/L),实验组Form(20、40、80μmol/L)作用48 h后,细胞核固缩、溶解,破裂后呈颗粒状聚集。流式细胞术结果显示,不同浓度Form处理48 h,细胞凋亡率分别为17.0%、21.5%、32.5%,呈浓度依赖性。RT-PCR结果显示,SGC7901中Caspase3、BAX m RNA表达量随Form浓度增加而上升(P<0.01);BCL-2、CDK4、CDK6、AKT、Cyclin D1的m RNA表达量逐渐降低(P<0.01)。WB结果表明,SGC7901细胞中β-Catenin、p-β-Catenin、Cyclin D1、CDK4以及p-AKT、AKT、BCL-2等蛋白的相对表达量随Form浓度增加而降低(P<0.01);Caspase3、BAX等蛋白表达逐渐上升(P<0.01)。结论:Form具有促进SGC7901细胞凋亡的作用;其机制可能是通过抑制Wnt/β-catenin信号,活化Caspase家族实现的。

瘦素对胃癌细胞系SGC7901增殖和凋亡的影响

目的 观察人胃癌细胞系SGC7901瘦素及瘦素受体的表达及瘦素对SGC7901增殖及凋亡的影响。方 法 免疫组化和RT-PCR检测SGC7901瘦素和瘦素受体的表达,噻唑蓝比色实验观察瘦素对SGC7901的增殖 作用,流式细胞仪检测瘦素对细胞周期及凋亡的影响,RT-PCR方法半定量检测瘦素对促凋亡基因bax mRNA 表达的影响。结果SGC7901既表达瘦素又表达瘦素受体,重组瘦素呈剂量依赖性地促进细胞的增殖,并明显 抑制细胞的凋亡,瘦素可抑制促凋亡基因bax mRNA的表达。结论 瘦素可能以自分泌方式调节人胃癌细胞系 SGC7901的增殖及凋亡。

RNA干扰沉默Twist基因对人胃癌细胞系SGC7901细胞增殖能力的影响

目的探讨Twist基因沉默后对人胃癌SGC7901细胞增殖能力的影响。方法利用脂质体转染法将携带有Twist干扰片段的pGen-esil/Twist载体导入人胃癌SGC7901细胞,G418筛选阳性克隆,经RT-PCR,Western印迹法检测干扰效果。通过绘制生长曲线、流式细胞术检测细胞周期等反映Twist对SGC7901细胞增殖能力的影响。结果生长曲线结果显示Twist基因沉默组细胞生长速度较两对照组缓慢。细胞周期结果显示Twist基因沉默组S期细胞数明显较对照组减少,增殖能力下降。结论Twist基因沉默后可抑制SGC7901细胞的分裂增殖,可能成为临床胃癌基因治疗的新靶点。

人胃癌细胞系SGC-7901放射敏感性及异质性的研究

目的研究人胃癌细胞系ＳＧＣ７９０１及其克隆亚系的放射敏感性。方法ＳＧＣ７９０１细胞株及其两个克隆亚系（大集落、小集落）的细胞用８ＭｅＶ直线加速器电子束以不同剂量照射，分别经４８小时、７２小时培养及集落培养后，计数并得出各组存活曲线。结果１．两个克隆亚系之间的Ｄ０值有显著差异（Ｐ＜００５）；２．大集落亚系与ＳＧＣ母系之间在集落形成实验中，其Ｄ０值有差异（Ｐ＜００５）。结论ＳＧＣ７９０１细胞系及其克隆亚系对放射的敏感性存在着异质性。

化疗药物对人胃癌SGC-7901细胞系端粒酶活性影响

目的 研究常见化疗药物对人胃癌SGC 790 1细胞系端粒酶活性影响。方法 MTT (噻唑蓝 )法测定化疗药物顺铂、丝裂霉素、阿霉素、 5 氟尿嘧啶、氟铁龙 (脱氧氟尿苷 )对人胃癌SGC 790 1细胞系毒性作用的半数抑制(IC5 0 )浓度 ;用TRAP ELISA法测定 4 0×IC5 0浓度化疗药物作用于SGC 790 1细胞 4h、 2 8h端粒酶活性及IC5 0浓度IC5 0化疗药物作用于SGC 790 1细胞 2 4h、 72h、 12 0h细胞端粒酶活性。结果 高浓度 ,低浓度顺铂、丝裂霉素对SGC 790 1细胞端粒酶活性有完全抑制作用 ;而阿霉素、 5 氟尿嘧啶、氟铁龙对SGC 790 1细胞端粒酶活性有部分抑制作用。结论 阿霉素、 5 氟尿嘧啶、氟铁龙对SGC 790 1细胞端粒酶活性有轻度抑制作用 ;顺铂、丝裂霉素能完全抑制端粒酶活性 。

奥曲肽抑制胃癌细胞系SGC-7901生长的实验研究

目的 研究奥曲肽对胃癌细胞系SGC -790 1生长的抑制作用。方法 将奥曲肽注入胃癌细胞 ,采用四甲基偶氮唑蓝 (MTT )法测定细胞生长抑制效应 ,将3 H -胸腺嘧啶核苷 (3 H -TdR )掺入试验测定奥曲肽对胃癌细胞DNA合成的影响 ,显微镜下观察胃癌细胞形态变化 ,应用流式细胞仪 (FCM )检测细胞周期 ,并采用TRAPPCR -ELISA法对胃癌细胞端粒酶活性进行检测。结果 奥曲肽对胃癌细胞系SGC -790 1的生长及DNA合成均有抑制作用 ,显微镜下可见细胞变圆、变小、脱落 ,FCM检测结果显示奥曲肽作用后 ,G0 /G1期细胞比例增高 ,S期、G2 /M期细胞比例下降 ,端粒酶活性显著受抑制。结论 奥曲肽能明显抑制胃癌细胞系SGC -790 1的生长 ,形成G0 /G1期阻滞 。

D-氨基葡萄糖衍生物对人胃癌细胞系SGC-7901增生的影响

目的:观察D-氨基葡萄糖衍生物体外对人胃癌SGC- 7901细胞增生的影响,探讨其可能作用机制. 方法:采用MTT法,筛选药物作用最佳浓度.用流式细胞仪分析诱导凋亡前后的细胞DNA含量,透射电镜观察凋亡细胞的超微结构.免疫组化测定CD44表达. 结果:D-氨基葡萄糖衍生物能明显抑制胃癌细胞的增长(P<0.01),MTT法显示抑制程度具有时间和剂量效应关系,统计组间比较差异有显著性(P<0.01);流式细胞仪分析可见亚二倍体(Sub-G1)凋亡峰;电镜观察到凋亡细胞的典型变化,免疫组化及光密度检测示CD44表达下降(216.5±7.0 vs 190.0±14.2,P=0.000). 结论:D-氨基葡萄糖衍生物通过诱导肿瘤细胞凋亡而抑制人胃癌SGC-7901细胞增生,同时还有下调CD44的作用.

四嗪二甲酰胺诱导人胃癌AGS、SGC7901细胞系凋亡及其分子机制的实验研究

目的:观察四嗪二甲酰胺(ZGDHu-1)体外抑制胃癌细胞株 AGS 和 SGC7901增殖并诱导细胞凋亡及其作用机制。方法:将不同浓度的 ZGDHu-1与 AGS 和 SGC7901细胞在体外培养,用台盼蓝染色、SRB 法、5′-溴-2′脱氧尿苷(Brdu)-ELISA 法观察 ZGDHu-1对 AGS 和 SGC7901细胞增殖的抑制作用;用细胞形态学、DNA 凝胶电泳、DNA 含量及细胞周期分析、Annexin-V/PI 双标记、Hoechst33258荧光染色等技术检测细胞凋亡。用流式细胞术观察经 ZGDHu-1作用后 AGS 和SGC7901细胞 bcl-2、bax、P53蛋白质和 P38MAPK 和 Stat3磷酸化表达的变化的表达改变。结果:ZGDHu-1能抑制 AGS和 SGC7901细胞增殖和活力,呈现作用时间和剂量的量效关系。AGS 和 SGC7901细胞与 ZGDHu-1作用后,大部分细胞阻滞于 G_2-M 期;出现典型的细胞肜态改变,DNA 片断化,亚 G1峰检出并显著增加,Annexin-V+/PI-表达升高,Ho-echst33258荧光染色后出现凋亡细胞的特征性改变等均证实 ZGDHu-1能诱导 AGS 和 SGC7901细胞凋亡。AGS 和SGC7901细胞经不同浓度的 ZGDHu-1体外培养后,bcl-2蛋白有所下调,但主要是上调 bax 和 P53蛋白,导致 bax/bcl-2比值明显增高,均并呈现剂量依赖性;磷酸化 P38MAPK 表达增强,而磷酸化 Stat3表达降低。结论:ZGDHu-1通过诱导细胞凋亡抑制 AGS 和 SGC7901细胞增殖,其机制可能与上调 bax 和 P53的表达,增强 P38MAPK 的磷酸化和抑制 STAT3的活化有关。

人端粒酶反义寡脱氧核苷酸对胃癌细胞系SGC-7901的生长抑制和诱导凋亡的研究

端粒酶活性在胃癌组织中表达率很高,在正常胃黏膜组织中则基本不表达。因此,以端粒酶为靶点的反义治疗有望成为胃癌治疗的有效途径之一。目的:检测特定的人端粒酶反义寡脱氧核苷酸(AS-ODN)对胃癌细胞系SGC-7901生长的抑制作用,并证明其主要机制为抑制端粒酶活性和诱导细胞凋亡。方法:用改良的聚合酶链反应(PCR)-端粒重复扩增协议(TRAP)法定量检测端粒酶AS-ODN作用前后SGC-7901细胞的端粒酶活性;台盼蓝染色法观察SGC-7901细胞活力;光镜和电镜观察凋亡细胞形态,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:SGC-7901细胞有端粒酶活性表达。不同浓度的端粒酶AS-ODN作用于SGC-7901细胞48～96h后,细胞端粒酶活性和生长受到明显抑制,光镜、电镜观察和流式细胞仪检测均证实有细胞凋亡存在。错义AS-ODN(N-ODN)处理组SGC-7901细胞则无显著变化(P<0.05)。结论:端粒酶AS-ODN通过抑制胃癌细胞的端粒酶活性和诱导细胞凋亡,最终抑制胃癌细胞生长,其抑制作用呈剂量、时间依赖性和序列特异性。端粒酶AS-ODN对端粒酶活性的抑制比对细胞生长的抑制更敏感,两种抑制作用并不完全平行。

Y-27632抑制胃癌SGC-7901细胞系侵袭与转移

目的探讨Y-27632对胃癌SGC-7901细胞侵袭和迁移的影响,及其作用机制是否是通过对SRF的调控来实现的。方法将细胞分为3组:1)对照组;2)Y-27632通路阻断剂组;3)siRNA-SRF-1107干扰组。各组分别转染、加药,孵育48 h。用CCK-8法检测细胞增殖,Transwell小室和划痕实验检测细胞侵袭能力和迁移能力。Western blot法检测SRF、ROCK1、E-cadherin、β-catenin、F-actin、MRTF-A及Cyclin D1的表达。结果 Y-27632能显著抑制胃癌SGC-7901细胞的侵袭、迁移能力(P<0.05),而对其增殖没有影响。Y-27632能显著下调SGC-7901细胞的ROCK1、SRF、F-actin和MRTF-A的表达,上调E-cadherin的表达(P<0.05)。结论 Y-27632通过上调E-cadherin表达,同时阻断ROCK信号抑制SRF辅因子MRTF-A的表达,最终下调SRF转录水平,从而抑制胃癌SGC-7901细胞侵袭、转移和迁移能力。

17β-雌二醇对胃癌细胞系SGC7901中NF-κB蛋白表达的影响

目的:观察不同浓度雌二醇处理不同时间的情况下,人胃癌细胞系SGC7901中NF-B蛋白表达量的变化,探讨胃癌中雌激素对NF-B蛋白表达可能存在的影响.方法:SGC7901细胞经10 10mol/L和10 8mol/L的17-雌二醇(17β-estradiol,E2)处理6 h、12 h和24 h,应用Western Blot及灰度分析的方法检测蛋白表达量的改变,平均光密度值采用t检验分析.结果:E2作用于SGC7901细胞6h后,NF-κB蛋白表达量在10 10mol/L浓度组与对照组无明显差异,而10 8mol/L浓度组明显高于对照组(P<0.05).12h后,NF-κB蛋白表达量在10 10mol/L浓度组和10 8mol/L浓度组明显低于对照组(P<0.05).24 h后,NF-κB蛋白表达量在10 10mol/L浓度组和10 8mol/L浓度组低于对照组,但差异无统计学意义(P>0.05).结论:雌激素可对胃癌细胞系SGC7901中NF-κB蛋白表达量产生影响.

熊果酸体外抗胃癌细胞SGC7901机制的研究

目的 探讨熊果酸（ursolic acid,UA）体外抑制胃癌细胞SGC7901生长的作用机制.方法 体外培养人胃癌细胞株SGC7901,MTT法观察不同浓度UA作用不同时间对细胞生长的影响;不同浓度UA（0～40 μmol/L）处理SGC7901细胞24 h后,倒置显微镜观察细胞形态变化;荧光染料Hoechst 33258染色和流式细胞仪检测细胞凋亡情况;Western Blotting法检测凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达.结果 20～40 μmol/L UA可抑制SGC7901的生长,并呈浓度和时间依赖性,其作用12、24、36、48 h的IC50分别为（57.50±1.18）、（34.28±2.05）、（27.54±1.11）、（24.83±1.02）μmol/L.20～40 μmol/L UA作用24 h后,SGC7901细胞变圆,出现不同程度的漂浮;同时细胞被阻滞于G0/G1期并发生凋亡,随药物浓度升高,凋亡率增加,凋亡相关蛋白Bcl-2表达减少,Bax无明显变化.结论 熊果酸对SGC7901细胞具有较强的抗肿瘤活性,其机制可能与细胞毒作用、增殖抑制作用以及下调凋亡相关蛋白Bcl-2表达而促进凋亡有关.

非甾体类抗炎药对胃癌SGC7901细胞增生及环氧合酶活性的影响

目的:探讨非甾体类抗炎药(nonsteroidal anti-inflammatory drugs,NSAID)对体外培养的胃癌细胞SGC7901生长及环氧合酶活性的作用。 方法:用MTF法观察阿司匹林、尼美舒利对胃癌细胞SGC7901生长的影响;免疫细胞化学方法检测Ki-67及COX-2蛋白表达;采用放射免疫分析法测定细胞培养上清PGE2水平。 结果:阿司匹林和尼美舒利呈时间、剂量依赖性方式抑制细胞增生,减少Ki-67蛋白表达。胃癌细胞SGC7901COX-2蛋白表达阳性,并伴有PGE_2释放,尼美舒利可减少PGE_2产生,但对COX-2蛋白表达无影响。 结论:阿司匹林和尼美舒利均可抑制COX-2表达阳性的胃癌细胞SGC7901生长,尼美舒利通过抑制COX-2酶活性而减少PGE_2释放,该研究提示COX-2可能在胃癌细胞SGC7901增生中起重要作用。

姜黄素诱导人胃癌SGC7901细胞自噬性凋亡的研究

目的观察姜黄素体外诱导人胃癌SGC7901细胞自噬性凋亡的作用,并探讨其可能的作用机制。方法用不同浓度的姜黄素处理SGC7901细胞,MTT法检测细胞增殖;单丹磺酰尸胺(monodansylcadaverin,MDC)荧光染色和Hoechst33342荧光染色观察细胞自噬和凋亡的发生;流式细胞术检测细胞凋亡率;Westernblot检测细胞凋亡相关蛋白NF-κB、自噬相关蛋白Beclin1及LC3Ⅱ的表达。结果姜黄素可呈剂量依赖性明显抑制SGC7901的生长。MDC染色显示,40μmol/L姜黄素在作用12 h后即可诱导SGC7901细胞发生自噬,24 h自噬减少;Hoechst33342荧光染色显示,40μmol/L姜黄素诱导凋亡在24 h最明显;流式细胞术显示,40μmol/L姜黄素作用24 h时SGC7901细胞凋亡率明显增加。Western blot检测显示,姜黄素诱导SGC7901细胞自噬性凋亡过程中,凋亡相关蛋白NF-κB、自噬相关蛋白Beclin1及LC3的表达均上调。结论姜黄素通过诱导自噬性凋亡抑制人胃癌细胞SGC7901的生长,其机制与NF-κB、Beclin1及LC3蛋白的表达上调有关。

藤梨根提取物对人胃癌SGC7901细胞增殖抑制的影响

目的研究藤梨根提取物对胃癌细胞SGC7901的抑制作用及其机制。方法用MTT法检测不同剂量的藤梨根提取物对人胃癌细胞SGC7901的增殖抑制作用,并用流式细胞仪分别检测细胞周期以及凋亡程度。结果在浓度范围25~200μg/ml范围内,不同浓度的藤梨根提取物对胃癌细胞SGC7901均有抑制作用,且有一定的浓度依赖性。且在藤梨根提取物细胞浓度为53、86以及142μg/ml作用48 h后SGC7901在S期比例增多,凋亡率明显增加。结论藤梨根提取物可能通过干预细胞周期和凋亡对胃癌细胞SGC7901增殖起抑制作用,同时与药物浓度有一定的依赖性。

莪术对SGC7901胃癌细胞COX-1,COX-2,VEGF和PGE_2表达的影响

目的:观察莪术对人胃癌SGC7901细胞 COX-1,COX-2,VEGF和PGE2的影响．方法:MTT法观察莪术对胃癌细胞的抑制作用,绘制其抑制率曲线,选取抑制率为25％时的药物浓度作为加药浓度,用RT-PCR以及Western blot方法检测加药后人胃癌细胞 COX-1,COX-2基因及其蛋白表达的变化．用ELISA方法检测加药后培养基中VEGF和 PGE2的表达情况．结果:莪术对胃癌细胞有一定的抑制作用,且随着浓度的增加,其抑制作用加强;将RT-PCR 产物经电泳分析,证实胃癌细胞中有COX-1、 COX-2基因的表达,对各条带进行灰度分析发现:中西药对COX-1和COX-2均有抑制作用,莪术对COX-2的抑制作用大于塞来昔布;Western blot曝光结果可见,COX-1各组在 70 kDa处可见特异性的蛋白条带,COX-2各组在80 kDa处可见特异性的蛋白条带．对各条带进行灰度分析发现:各组中西药对COX-2 均有明显的抑制作用,而对COX-1则无抑制作用,其中,莪术对COX-2的抑制作用要强于celecoxib;西药celecoxib及莪术组可明显降低人胃癌细胞VEGF的表达,与细胞组相比,其差别有统计学意义(91．0±18．2,127．8 ±12．1 ng／L vs162．0±15．1 ng／L,P<0．01);西药celecoxib组PGE2表达低于细胞组,但其差别无统计学意义,莪术可明显降低人胃癌细胞PGE2的表达,与细胞组相比,其差别有统计学意义(67．5±6．9 ng／L vs 78．7±5．6 ng／L, P<0．01)．结论:莪术可能是通过抑制COX-2及其下游 PGE2表达,使VEGF表达下调而抑制肿瘤．

As_2O_3对胃癌细胞SGC7901/ADR阿霉素耐药性逆转作用

目的探讨三氧化二砷(As2O3)对胃癌细胞SGC7901/ADR阿霉素(ADM)耐药性的逆转作用和对Pgp、GSTπ表达的影响。方法以胃癌多药耐药细胞株SGC7901/ADR为靶细胞,用MTT法检测SGC7901/ADR细胞对ADM的敏感性,用流式细胞仪检测细胞内药物浓度及免疫组织化学法检测细胞Pgp、GSTπ表达。结果0.4～0.8μmol/LAs2O3对耐药细胞SGC7901/ADR无明显毒性(P>0.05)。As2O3可下调Pgp、GSTπ表达,提高SGC7901/ADR细胞内ADM浓度,增加SGC7901/ADR细胞对ADM的敏感性。结论As2O3能够抑制SGC7901/ADR细胞Pgp、GSTπ表达,增加细胞内ADM药物浓度而部分逆转其对ADM的耐药性。

川芎嗪联合氟尿嘧啶对胃癌细胞SGC-7901/ADR的杀伤作用

目的观察川芎嗪(TMP)联合氟尿嘧啶(5-Fu)对胃癌多药耐药细胞SGC7901/ADR细胞的体外杀伤作用。方法采用MTT法观察TMP联合5-Fu对SGC7901/ADR细胞的杀伤作用,光镜下观察并采用流式细胞仪(FCM)测定各药物组细胞周期的分布。结果5-Fu对SGC-7901/ADR细胞的半数抑制率(IC50)为13.001mg/L,与300mg/LTMP联合后,使其的IC50降至1.542mg/L,逆转倍数是8.43倍,与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.01)。光镜下可见5-Fu+TMP(终浓度300mg/L)组较5-Fu组癌细胞皱缩变小变圆,出现凋亡改变。FCM分析:TMP联合5-Fu与对照组相比将细胞阻滞在DNA合成前期和静息期-G0/G1期(P<0.05)。结论TMP与5-Fu联合对胃癌多药耐药细胞SGC7901/ADR有较强的杀伤作用,为当前胃癌治疗提供了新思路。