高盐饮食对Dahl大鼠肾脏SGK1基因表达的影响

目的通过观察高盐负荷后Dahl盐敏感大鼠肾脏血清和糖皮质激素调节蛋白激酶1(SGK1)基因的表达,探索其在盐敏感性高血压形成中的作用。方法对Dahl盐敏感大鼠和对照组SS-13BN大鼠分别给予正常盐[0.3%氯化钠(NaCl)]和高盐(8%NaCl)饮食3周干预,测定血压,采用Real-time PCR检测肾脏SGK1基因信使核糖核酸(mRNA)。结果 SS高盐饮食组大鼠及SS-13BN高盐组大鼠血压均比其低盐饮食组高;与13BN组相比,SS高盐组血压较低盐组升高幅度更为显著;Dahl盐敏感大鼠高盐组肾脏SGK1的表达较低盐组显著增加,同时也显著高于高盐组SS-13BN大鼠。结论高盐引起Dahl盐敏感大鼠肾脏SGK1的表达异常增加可能是盐敏感性高血压形成的重要原因。

SGK1基因沉默对人乳腺癌细胞生长抑制作用

目的观察血清和糖皮质激素调节蛋白激酶1(SGK1)基因沉默对人乳腺癌细胞生长抑制作用,为探讨乳腺癌治疗靶点提供实验依据。方法采用RNA干扰技术,以pGenesil 3为载体,建立针对SGK1的短发卡RNAC(shRNA)干扰质粒pGen-3-siSGK1和阴性对照质粒pGen-3-control,转染人乳腺癌细胞系MDA-MB-231,经筛选得到稳定SGK1基因沉默的乳腺癌细胞模型;采用实时定量PCR法、免疫荧光法以及蛋白免疫印迹法,检测shR-NA干扰组、阴性对照组及未转染组细胞中SGK1的表达;采用体外浸润实验、细胞迁移实验检测各组细胞的侵袭和转移能力,噻唑蓝比色法检测细胞体外生长能力。结果成功构建针对SGK1基因的shRNA干扰质粒,建立稳定的SGK1基因沉默乳腺癌细胞模型;模型细胞中SGK1蛋白表达量与对照组相比下降了60%(P<0.01);β-catenin与SGK1表达条带亮度均明显下降;PGen-3-siSGK1组SGK1 mRNA相对含量(RQ)为0.35,低于其他2组(分别为0.96、1.00),与pGen-3-control组相比下降了65.5%,差异有统计学意义(P<0.05),高倍显微镜视野下,pGen-3-siSGK1组的穿膜细胞数为22个/HPF,其他2组分别为66、62个/HPF;pGen-3-siSGK1组的细胞迁移率为17.01%,其他2组分别为72.22%、68.47%;凝血酶不同浓度下pGen-3-siSGK1组细胞生长均受到抑制,生长速度缓慢,其中0.1、1.0 U/mL浓度下,细胞含量(吸光度)分别为0.10、0.05,远低于其他2组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 SGK1基因沉默可抑制SGK1基因表达,可使人乳腺癌细胞MDA-MB-231株的浸润能力、迁移能力下降,抑制乳腺癌细胞生长。