运用重叠延伸PCR技术构建SGK3激酶PX结构域突变体

目的:构建SGK3激酶PX结构域突变体载体,观察其在人肾胚细胞293T中的表达与定位。方法:利用重叠延伸PCR原则设计引物,合成具有点突变的SGK3突变体,将其连接到p EGFP载体上,测序验证;将所获突变载体瞬时转染人肾胚细胞293T,利用荧光倒置显微镜检验突变体在细胞中的表达及功能实现。结果:测序结果表明合成了具有点突变的SGK3序列;荧光倒置显微镜下SGK3突变体相较野生型SGK3在293T细胞内的不均匀分布表明转染成功,突变体载体在人肾胚细胞293T中获得表达且有所定位。结论:通过改变PX结构域序列上第90位氨基酸可以使SGK3激酶失去定位的功能,从而为研究SGK3在细胞中的功能提供基础。

蛋白激酶SGK3过表达促进卵巢癌细胞SKOV3增殖和侵袭

目的研究血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶3(SGK3)过表达对卵巢癌细胞克隆增殖和侵袭行为的影响及其机制。方法免疫组化方法检测不同类型卵巢癌组织中SGK3蛋白的表达;通过Gen EscortTMⅠ介导用重组质粒p EGFPN1-SGK3瞬时转染卵巢癌SKOV3细胞,免疫印迹方法对转染细胞中的蛋白表达进行鉴定;克隆形成实验观察过表达SGK3后SKOV3细胞形成单个细胞克隆的能力;细胞侵袭实验用于观察在过表达SGK3后SKOV3细胞侵袭能力的变化;免疫印迹方法检测肿瘤转移相关基因的表达。结果 SGK3在卵巢癌组织的表达明显高于癌旁正常组织(P<0.05)。过表达SGK3的SKOV3细胞,其克隆形成和侵袭力均增强,与对照组细胞比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 SGK3在卵巢癌组织中呈高表达,SGK3过表达可促进卵巢癌细胞的侵袭。

血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶3在乳腺癌分子诊断与治疗中的意义

目的研究血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶(SGK)3过表达对乳腺癌细胞生物学行为的影响及检测SGK3与乳腺癌临床病理特征的关系。方法利用真核表达载体SGK3-pEGFP-N1瞬时转染乳腺癌MDA-MB-231细胞,细胞划痕实验和流式细胞术检测SGK3过表达对细胞周期、凋亡和迁移的影响;利用组织芯片,通过免疫组化法检测分析SGK3与乳腺癌临床病理特征的相关性。结果 SGK3过表达可促进MDA-MB-231细胞迁移(P<0. 05)、抑制细胞凋亡(P<0. 01),但对细胞周期无明显影响。SGK3在不同TNM分级、同一分级不同淋巴结转移及孕激素受体(PR)+和PR-的浸润性乳腺癌组织中的表达差异均无统计学意义(P>0. 05)。结论尽管SGK3过表达对乳腺癌恶性生物学行为有影响,且其表达与乳腺癌临床病理特征相关,但其在乳腺癌分子诊断与治疗中的意义尚需确定。