木聚糖酶对尼罗罗非鱼钠葡萄糖共转运载体(SGLT_1)mRNA表达的影响

以尼罗罗非鱼[体重(106.16±16.77)g]为实验对象,小麦基础饲料为对照,小麦基础饲料中分别添加不同水平的木聚糖酶(0.05%、0.10%、0.15%)作为试验饲料。每个处理设5个重复,每个重复放养40尾雄性尼罗罗非鱼,旨在研究木聚糖酶对尼罗罗非鱼前肠和中肠钠葡萄糖共转运载体(SGLT_1)mRNA表达的影响,从分子水平揭示木聚糖酶促进尼罗罗非鱼生长的机理。饱食投喂,饲养75 d后,每饲料组分别取10尾鱼,尾静脉取血制备血清,测定血糖含量;采用离心柱型总RNA提取试剂金提取前肠和中肠总RNA,通过RT-PCR对前肠和中肠SGLT_1mRNA的表达进行相对定量。结果表明,0.05%组、0.10%组和0.15%组前肠SGLT_1 mRNA的相对表达量分别比对照组提高19.28%(P<0.05)、42.17%(P<0.01)和16.87% (P<0.05);对照组尼罗罗非鱼在摄食后2 h血糖仅为5.56 mmol·L^(-1),0.10%组极显著高于对照组(P<0.01);0.05%组和0.10%组的增重率较对照组分别提高8.29%、17.45%(P<0.01),0.15%组的增重率与对照组相比没有统计学差异(P>0.05)。研究结果表明,在小麦基础饲料中适量添加木聚糖酶能显著上调前肠SGLT_1mRNA的表达,促进葡萄糖吸收,从而提高尼罗罗非鱼的生长速度。

钠葡萄糖共转运载体(SGLT1)研究进展

综述了钠葡萄糖共转运载体 ( SGLT1 )研究的新进展 ,葡萄糖的跨膜转运主要是通过 SGLT1结合 1 mol葡萄糖 ,2 mol的 Na+ ,形成 Na+ -载体 -葡萄糖复合物 ,顺 Na+的浓度梯度进入细胞。不同物种的 SGLT1具有较高的同源性 ,大小为 662～ 665个氨基酸。其二级结构业已阐明 ,它由 1 4个连为一体的 α螺旋 ( MS1～ MS1 4)组成 ,动物种类、年龄、饥饿状况、Na+ 摄入水平和血清醛固酮水平均影响 SGLT1的基因表达 ,表皮生长因子 ( EGF)、精氨酸加压素 ( AVT)、胰岛素样生长因子 ( IGF)以及蛋白激酶 A和蛋白激酶 C对

参苓白术散对脾虚泄泻大鼠SGLT1 mRNA表达的影响

目的:研究参苓白术散对脾虚泄泻大鼠的治疗作用及对SGLT1 mRNA表达的影响。方法:制作大鼠脾虚泄泻模型,以不同剂量的参苓白术散治疗,观察实验大鼠的一般症状、稀便率、体质量、D-木糖排泄及肠黏膜SGLT1 mRNA的表达。结果:参苓白术散能明显改善脾虚泄泻大鼠的一般状态、减少稀便率、减少体质量下降、促进D-木糖排泄及SGLT1 mRNA的表达,并具有一定的量效关系。结论:脾虚泄泻大鼠SGLT1 mRNA表达下调,参苓白术散可通过上调SGLT1 mRNA的表达治疗脾虚泄泻。

鲤肠道sglt1基因的表达与抗体制备

钠/葡萄糖共转运载体1(sodium/glucose cotransporter 1,Sglt1)是协助葡萄糖吸收的主要蛋白。实验首先采用RT-PCR获取sglt1基因全长,克隆至PGME-T载体进行序列及免疫原性分析,选择长度为92个氨基酸(544～637)的多肽作为目的片段(sglt1-P)),扩增sglt1-P,引入双酶切位点EcoRⅠ和HindⅢ后,连接至pET-32a(+)上,构建表达载体pET-32a(+)-sglt1-P,转化至E.coli Rosetta中,获得重组基因工程菌,通过IPTG诱导表达,获得目标多肽,并以此为抗原制备Sglt1特异性抗体。SDS-PAGE电泳分析表明,目标多肽分子量约为30 ku。采用耳缘静脉结合皮下注射,免疫新西兰长耳兔,免疫总时长为38 d。制备了鲤Sglt1抗体,ELISA测得效价为1∶105;免疫组化结果表明,抗体具有较高亲和力和特异性,可以应用于鲤Sglt1的表达定位研究。该抗体的获得为鲤肠道Sglt1表达及转运活性的系统研究奠定了基础,同时,获取的Sglt1抗体亦可用于其它鱼类Sglt1转运蛋白表达定位和定量研究。

高糖腹膜透析液对HPMECs中GLUT1、SGLT1、TGF-β 1、VEGF-A、CTGF表达的影响研究

目的探讨高糖腹膜透析液对人腹膜微血管内皮细胞(HPMECs)中GLUT1、SGLT1、TGF-β1、VEGF-A、CTGF表达的影响。方法体外培养HPMECs并分为5组,N组用含葡萄糖的无酚红RPMI-1640培养基培养;P组用2.5%葡萄糖腹膜透析液培养;GN组用含50g/ml葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)拮抗剂根皮素的2.5%葡萄糖腹膜透析液培养;SN组用含10g/ml钠-葡萄糖共转运载体1(SGLT1)拮抗剂根皮苷的2.5%葡萄糖腹膜透析液培养;GN+SN组用含50g/ml根皮素和含10g/ml根皮苷的2.5%葡萄糖腹膜透析液培养。分别采用RT-PCR法、Western blot法检测各组HPMECs GLUT1、SGLT1、细胞因子转化生长因子-β1(TGF-β1)、血管内皮生长因子-A(VEGF-A)、结缔组织生长因子(CTGF)的mRNA、蛋白表达水平。结果 5组HPMECs GLUT1、SGLT1、TGF-β1、VEGF-A、CTGF的mRNA、蛋白表达水平比较均有统计学差异(均P<0.05)。与N组比较,P组HPMECs GLUT1、SGLT1、TGF-β1、VEGF-A、CTGF的mRNA、蛋白表达水平均升高(均P<0.05);与P组比较,GN组、SN组、GN+SN组HPMECs GLUT1、SGLT1、TGF-β1、VEGF-A、CTGF的mRNA、蛋白表达水平均降低(均P<0.05)。结论高糖腹膜透析液或通过上调HPMECs中GLUT1、SGLT1的表达,进而上调TGF-β1、VEGF-A、CTGF的表达,从而起促腹膜纤维化作用。

钠葡萄糖共转运载体1在卵巢癌中的表达及作用研究

目的:探讨钠葡萄糖共转运载体1(SGLT1)在卵巢癌中的表达及其作用。方法:收集卵巢癌及癌旁正常组织,Western blot及PCR检测SGLT1蛋白及mRNA水平;培养类癌细胞系(carcinoid cancer)及卵巢癌细胞系(OVCAR3,SKOV3和A2780),WB及PCR检测SGLT1蛋白及mRNA水平;构建慢病毒小分子干扰SGLT1载体并筛选稳定细胞株,甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)及BrdU掺入比色法检测细胞增殖情况,WB检测细胞周期相关蛋白的表达水平。结果:SGLT1在卵巢癌组织中表达上调,在卵巢癌细胞系OVCAR3中表达明显上调;慢病毒载体介导干扰SGLT1后,OVCAR3细胞P21及P27表达增加,p-Rb水平下调,OVCAR3细胞增殖被抑制。结论:SGLT1在卵巢癌中的表达上调,敲除SGLT1抑制OVCAR3细胞增殖。

乳源β-酪啡肽7对大鼠葡萄糖吸收的影响及其作用机制

目的:探讨乳源活性肽β-酪啡肽-7(β-Casomorphin-7,β-CM7)应用于食品时对葡萄糖吸收的影响及其作用机制.方法:选用健康成年SD大鼠,分为对照组(0mol/Lβ-CM7),L低剂量组、M中剂量组、H高剂量组(终浓度分别为7.5×10-7,7.5×10-6,7.5×10-5mol/L).利用翻转离体小肠囊模型进行实验:(1)葡萄糖氧化酶法测定翻转后小肠内液葡萄糖含量;(2)比色法测定小肠黏膜Na+-K+-ATP酶活力;(3)荧光定量PCR法分析小肠黏膜组织中钠葡萄糖共转运载体(SGLT-1)和葡萄糖协助扩散转运载体(GLUT-2) mRNA的表达.结果:在离体环境下β-CM7在7.5×10-7-7.5×10-5mol/L浓度下对葡萄糖的吸收均有一定的抑制作用(1.09mol/L,1.24mol/L,1.12mol/L vs 1.74mol/L,P=0.01,0.04,0.02),能够降低Na+-K+-ATP酶活力(85.73,112.06,109.68 vs 114.93,P=0.004,0.73,0.54);荧光定量PCR结果发现:与对照组相比,β-CM7能够显著降低SGLT-1及GLUT-2 mRNA水平(0.46,0.58,0.77 vs 1.11,P=0.20,0.05,0.02;0.50,0.66,0.85 vs 1.14,P=0.30,0.14,0.03).结论:β-CM7可以通过降低Na+-K+-ATP酶活力及下调SGLT-1、GLUT-2 mRNA水平,减少大鼠小肠对葡萄糖的吸收.

桃胶多糖对Caco-2细胞模型吸收葡萄糖的影响

目的:通过Caco-2体外细胞模型研究桃胶多糖影响葡萄糖吸收的机制。方法:以培养的Caco-2单层细胞为葡萄糖吸收模型,观察在桃胶多糖影响下,葡萄糖吸收量随时间的变化关系,从而推断桃胶多糖对葡萄糖跨膜转运过程的影响。结果:一定浓度桃胶多糖作用下,不同浓度葡萄糖的吸收量与对照组相比,均有显著差异(P<0.05),表明葡萄糖吸收受到桃胶多糖的抑制,且葡萄糖浓度越低,桃胶多糖抑制葡萄糖吸收的效果越显著(P<0.05);不同浓度的桃胶多糖作用下,相同浓度葡萄糖的吸收量与对照组相比,均有显著差异(P<0.05),且桃胶多糖浓度越高,抑制葡萄糖吸收的效果越好(P<0.05)。结论:桃胶多糖能够竞争性抑制葡萄糖的吸收,其是否可能通过影响或者占据肠道刷状缘侧钠葡萄糖共转运载体1(SGLT-1)上葡萄糖的吸收位点达到降血糖目的,其机制尚有待进一步研究。

断奶仔猪日粮添加人工甜味剂可提高钠／葡萄糖共转运载体的表达

在当今集约化养殖日益突出的环境下,缩短仔猪断奶日龄可以提高母猪的年产仔猪数量。然而,这种人为干预会导致小猪出现营养吸收紊乱,表现出腹泻、营养不良和脱水等症状。为了预防这些症状,研究人员提出了很多解决方案。人工合成的甜味剂由于能够改善日粮的适口性而被广泛应用于仔猪日粮中。本研究证明了在仔猪日粮中添加含人工合成甜味剂糖精钠和新橙皮苷二氢查耳酮(NHDC)的产品能够提高SGLT1的表达以及肠道对葡萄糖的转运能力,T1R2、T1R3和味导素在仔猪肠道内分泌细胞中共同表达生成,并且一些肠道内分泌激素与日粮的碳水化合物、类胰高血糖素肽(GLP1和GLP2)、葡萄糖依赖促胰岛素肽(GIP)相互作用且和I型GTP结合蛋白耦联受体(T1R)以及味导素等在肠道共表达,仅仅很少数目的L-型和K-型内分泌细胞能够表达这些味觉因子且与I型GTP结合蛋白耦联受体和5-羟色胺共同表达释放。此外,本研究亦证明了人T1R3的抑制剂(Lactisole)不能抑制仔猪肠道SGLT1的表达。总之,通过对甜味剂上调SGLT1机理的深入研究有助于营养学家更深入地了解如何更好地预防仔猪断奶相关的营养吸收不良等问题的发生。

新型SGLT1/2双靶点抑制剂sotagliflozin

钠-葡萄糖共转运蛋白2(SGLT2)抑制剂是一类新兴的治疗糖尿病的药物。近年来,遗传学和药理学研究发现,胃肠道SGLT1蛋白也可能成为一个有治疗前景的药物靶点。SGLT1/SGLT2双靶点抑制剂的开发将为糖尿病的治疗提供另一个非胰岛素依赖的途径。临床研究表明,sotagliflozin可以通过双重抑制SGLT1和SGLT2的作用来降低餐后血糖、升高GLP-1和促进尿糖排出。因此,这些特征使得sotagliflozin在对1型和2型糖尿病的治疗方面具有重要临床意义。

β-CM5对离体大鼠小肠葡萄糖吸收的影响

为了探讨β-酪啡肽-5(β-CM5)对大鼠小肠葡萄糖吸收的影响,利用翻转的离体小肠模型,通过测定60 min内β-CM5不同浓度组肠囊内葡萄糖含量及葡萄糖的转运率;测定离体肠道黏膜α-葡萄糖苷酶、Na+-K+-ATP酶活力,分析大鼠小肠钠依赖性葡萄糖共转运载体(SGLT-1)及葡萄糖转运载体2(GLUT-2)mRNA表达水平,揭示β-CM5对葡萄糖吸收影响及机制。结果:不同浓度β-CM5肠囊内葡萄糖的转运量及转运率均显著低于对照组;β-CM5组小肠黏膜中α-葡萄糖苷酶和Na+-K+-ATP酶活力显著低于对照组;β-CM5组小肠黏膜中SGLT-1、GLUT-2 mRNA表达量与对照组相比均显著性下调。结果表明:β-CM5可以通过抑制葡萄糖吸收的相关酶活性,下调葡萄糖转运载体mRNA的表达,从而抑制肠道葡萄糖的吸收,提示β-CM5可能具有降糖作用。

2型糖尿病新一代降糖药的药物基因组学的最新进展

精准医学是综合考虑个人的基因、环境和生活方式的一种新的疾病预防和治疗理念。随着药物遗传学和药物基因组学迅速发展和壮大,对个体遗传变异和药物剂量与治疗反应之间的联系进行研究,成为精准医学治疗的关键。2型糖尿病是一种以高血糖为特征的慢性代谢性疾病,可以导致心血管、肾脏等并发症。最新美国糖尿病协会和欧洲糖尿病协会的2型糖尿病高血糖管理共识中建议,合并动脉粥样硬化性心血管疾病(ASCVD)或慢性肾脏疾病、有低血糖风险或体质量相关问题的2型糖尿病患者,在二甲双胍单药起始治疗后优先使用胰高血糖素样肽-1(GLP-1)受体激动剂、钠-葡萄糖共转运体-2(SGLT2)抑制剂和二肽基肽酶-4(DPP-4)抑制剂。药物基因组学研究已经鉴定出许多与降糖药物反应相关的生物标志物,这些基因的功能变异对血糖控制、不良反应和并发症的风险有显著影响。我们综述了临床实践中新型二线降糖药物的药物遗传学的最新进展,为精准医学预防和治疗T2DM及其并发症提供有效工具。