miR-155-5p靶向下调SOCS1减轻脂多糖诱导的SH-SY5Y人神经母细胞瘤细胞炎症损伤

目的探讨微小RNA-155-5p(miR-155-5p)对脂多糖(LPS)诱导SH-SY5Y人神经母细胞瘤细胞神经炎症损伤的影响。方法采用人SH-SY5Y细胞,设立miR-155-5p过表达及其阴性对照(miR-155-5p mimic组、mimic-NC组)和miR-155-5p低表达及其阴性对照(miR-155-5p inhibitor组、inhibitor-NC组),将LPS处理上述各组转染成功细胞24 h,并设置未转染SH-SY5Y细胞的对照组和LPS处理组(LPS组)。噻唑蓝(MTT)法检测SH-SY5Y细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡率,反转录PCR法检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6和IL-10 mRNA水平和miR-155-5p表达,Western blot法检测细胞裂解型胱天蛋白酶3(c-caspase-3)、B细胞淋巴瘤因子2(Bcl2)、Bcl2相关X蛋白(BAX)、磷酸化核因子κB p65/核因子κB p65(p-NF-κB p65/NF-κB p65)、磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶/p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38 MAPK/p38 MAPK)蛋白水平。采用miR-155-5p模拟物(miR-155-5p mimic)、miR-155-5p抑制物(miR-155-5p inhibitor)调节SH-SY5Y细胞miR-155-5p表达,生物信息学预测miR-155-5p与细胞因子信号传送阻抑物1(SOCS1)靶向关系并进行荧光素酶实验验证。构建miR-155-5p与SOCS1均下调的SH-SY5Y细胞(miR-155-5p inhibitor/si-SOCS1组),采用上述方法检测细胞活性、细胞凋亡、炎性细胞因子mRNA表达以及SOCS1蛋白表达和p-NF-κB p65/NF-κB p65、p-p38 MAPK/p38 MAPK比值。结果与对照组相比,LPS组SH-SY5Y细胞活性、Bcl2蛋白表达、IL-10 mRNA水平、SOCS1蛋白表达降低,细胞凋亡率、c-caspase-3和BAX蛋白表达、TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA水平升高,miR-155-5p表达量和p-NF-κB p65/NF-κB p65和p-p38 MAPK/p38 MAPK比值升高。与LPS组相比,miR-155-5p inhibitor组SH-SY5Y细胞活性、Bcl2蛋白表达、IL-10 mRNA水平、SOCS1蛋白表达升高,miR-155-5p表达量、细胞凋亡率、c-caspase-3和BAX蛋白表达、TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA水平、p-NF-κB p65/NF-κB p65、p-p38 MAPK/p38 MAPK比值降低。与LPS组相比,miR-155-5p mimic组SH-SY5Y细胞活性、Bcl2蛋白表达、IL-10 mRNA水平、SOCS1蛋白表达降低,miR-155-5p表达量、细胞凋亡率、c-caspase-3和BAX蛋白表达、TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA水平、p-NF-κB p65/NF-κB p65、p-p38 MAPK/p38 MAPK比值增加。miR-155-5p与SOCS1具有靶向关系,与miR-155-5p inhibitor组相比,miR-155-5p inhibitor/si-SOCS1组细胞活性、IL-10 mRNA水平降低,细胞凋亡率、p-NF-κB p65/NF-κB p65、p-p38 MAPK/p38 MAPK比值、TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA水平升高。结论抑制miR-155-5p表达可减轻LPS诱导的神经炎症损伤,可能与靶向下调SOCS1表达有关。

LncRNA OIP5-AS1通过调节miR-186-5p/KIF14信号轴来促进神经母细胞瘤的增殖

目的:神经母细胞瘤(NB)是儿童最常见的实体瘤。本研究旨在确定长链非编码RNA(LncRNA)Opa相互作用蛋白5反义RNA 1(OIP5-AS1)在NB中的作用及其可能的分子机制。方法:体外培养神经母细胞瘤细胞系SK-N-SH和人神经母细胞BE2C。通过定量实时聚合酶链式反应测定OIP5-AS1、miR-186-5p和驱动蛋白分子14(KIF14)的表达。使用CCK-8测定法、平板克隆形成法和EdU掺入法评估细胞增殖。蛋白质印迹法检测KIF14蛋白水平。通过在线数据库Starbase3.0预测靶基因,并通过双荧光素酶报告基因测定进行验证。结果:OIP5-AS1在SK-N-SH细胞中的表达水平较BE2C细胞显著上调(1.88±0.14 vs 1.00±0.07),P<0.05。shOIP5-AS1组下调OIP5-AS1表达后,SK-N-SH细胞活力、克隆形成能力(111.33±15.57个vs 154.67±20.74个vs 149.33±17.01个,P<0.05)和DNA合成能(EdU阳性细胞比例:35.09±8.02%vs 67.87±7.21%vs 63.33±7.17%,P<0.05)弱于NC组和shCtrl组。经生物信息学预测和双荧光素酶报告基因验证,OIP5-AS1与miR-186-5p以及miR-186-5p与KIF143'-UTR具有靶向调控作用。与NC组和shCtrl组相比,shOIP5-AS1组KIF14 mRNA相对表达量(0.41±0.09,P<0.05)和KIF14蛋白表达(0.20±0.02,P<0.05)均下调。相反,shOIP5-AS1+miR-186-5p inhibitor组KIF14 mRNA相对表达量和KIF14蛋白表达量分别为0.83±0.12和0.62±0.04,较shOIP5-AS1+miR-NC组升高。RNA结合蛋白免疫共沉淀结果也显示,与对照(IgG)相比,Ago2抗体可以富集OIP5-AS1和miR-186-5p。与shOIP5-AS1+miR-NC组相比,shOIP5-AS1+miR-186-5p inhibitor组细胞活力和克隆形成能力(180.0±11.36 vs 136.0±14.53)显著增加(P<0.05)。在挽救性实验中,与shOIP5-AS1+miR-186-5p inhibitor+siNC组相比,shOIP5-AS1+miR-186-5p inhibitor+siKIF14组细胞活力和克隆形成能力(139.33±8.96 vs 183.03±18.0,P<0.05)明显降低(P<0.05)。结论:SK-N-SH细胞中OIP5-AS1表达水平显著上调,并且作为ceRNA竞争性地抑制miR186-5p,上调KIF14表达,从而促进NB进展。

白藜芦醇对H_(2)O_(2)诱导的SH-SY5Y细胞氧化损伤的作用

目的研究白藜芦醇(Res)对H_(2)O_(2)诱导的人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)氧化损伤的作用。方法选取一定剂量H_(2)O_(2)诱导SH-SY5Y细胞氧化损伤模型,通过检测Res对氧化损伤SH-SY5Y细胞的活力影响,筛选后续试验剂量。分别选取20,10,5,1μmol/L Res处理SH-SY5Y细胞24 h,加入1.2 mmol/L H_(2)O_(2),作用24 h,采用MTT法、生长曲线法测定细胞活力,流式细胞术测细胞周期,HE染色观察细胞形态,试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)活力、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力、丙二醛(MDA)含量及细胞外乳酸脱氢酶(LDH)活力。结果1.2 mmol/L的H_(2)O_(2)造成SH-SY5Y细胞氧化损伤,细胞活力降低,细胞周期改变,细胞形态变化,SOD和GSH-Px活力下降,细胞内MDA含量、细胞外LDH活力升高(P<0.01)。与模型组相比,20,10,5μmol/L Res组细胞活力升高,G_(0)/G_(1)期和G_(2)/M期细胞百分率显著升高,S期降低(P<0.01);细胞内SOD和GSH-Px活力上升(P<0.01),MDA含量、细胞外LDH活力明显降低(P<0.01)。结论20,10,5μmol/L Res对H_(2)O_(2)诱导的SH-SY5Y细胞氧化损伤有一定的保护作用。

2,3-吲哚醌诱导人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡及周期阻滞

背景与目的:2,3-吲哚醌(isatin,ISA)是存在于哺乳动物体液及组织中的一种天然物质,已发现其对肿瘤细胞的生长有抑制作用,但具体作用机制尚不明。本研究以人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y为靶细胞,观察ISA对SH-SY5Y细胞的作用及其机制。方法:采用荧光染色、流式细胞术(flow cytometry,FCM)及Western blot等方法检测不同浓度ISA(0、100、200、400μmol/L)诱导SH-SY5Y细胞凋亡及细胞周期阻滞的作用机制。结果:400μmol/L ISA作用48h后,在荧光显微镜下观察到SH-SY5Y细胞出现核固缩、DNA断裂等典型的凋亡形态学改变。Western blot结果显示,随ISA浓度的增加,Bcl-2蛋白表达下降、Bax蛋白表达无明显改变,Bcl-2/Bax下降。100、200、400μmol/L ISA处理SH-SY5Y细胞48h,活化Caspase-3的表达率分别为19.28%、25.88%、33.43%,明显高于对照组(P<0.05)。Western blot进一步检测到其下游底物Caspase激活的脱氧核糖核酸酶抑制剂(inhibitor of caspase-activated DNase,ICAD)被降解。细胞周期分析表明,经100、200、400μmol/L ISA处理48h后,G1期SH-SY5Y细胞数明显增加,呈明显的G1期阻滞;磷酸化的ERK蛋白及Cyclin D1(CDK1)蛋白表达显著减少(P<0.05)。结论:ISA能明显诱导SH-SY5Y细胞凋亡和细胞周期G1期阻滞,该作用可能与Bcl-2/Bax降低、Caspase-3激活,以及下调磷酸化ERK和细胞周期因子CDK1表达有关。

鱼藤素对SH-SY5Y神经母细胞瘤细胞凋亡的诱导作用

目的研究鱼藤素对SH-SY5Y细胞凋亡的诱导作用。方法鱼藤素(0、0.625、1.25、2.5、5、10、20μmol·L^(-1))处理SH-SY5Y细胞24、48、72 h后,CCK-8法测定细胞存活率。鱼藤素(0、8、20、50μmol·L^(-1))处理SH-SY5Y细胞24 h,光镜下及AO/EB双染分别观察细胞形态和凋亡形态,流式细胞术检测细胞凋亡率,DCFH-DA荧光探针法检测细胞活性氧水平,分光光度法检测caspase-3活化程度。结果鱼藤素对SH-SY5Y细胞存活率呈时间和浓度依赖性抑制作用,作用24、48、72 h的IC50值分别为(26.07±2.18)、(18.33±0.94)、(12.5±1.49)μmol·L^(-1)。鱼藤素处理24 h后,细胞凋亡率、细胞活性氧水平明显上升(P<0.05),caspase-3活化程度升高,且三者均有浓度-效应特征。结论鱼藤素可抑制SH-SY5Y细胞存活,诱导细胞凋亡,其机制可能与升高活性氧水平和活化caspase-3相关。

微波辐射诱导人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡的可能机制

目的:观察微波辐射对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡的影响,并探讨其机制。方法:采用10、30和50 mW.cm-2辐射强度的微波辐射SH-SY5Y细胞5 min,以假辐射组(0 mW.cm-2)为对照,光镜下观察细胞形态变化;荧光显微镜下观察DAPI染色细胞核的形态;CTAB法提取细胞基因组DNA,电泳观察DNAladder;台盼蓝拒染法检测细胞存活率;AnnexinV-FITC和PI双染色,流式细胞仪检测细胞凋亡率;MTT法检测细胞相对活性;蛋白质印迹检测细胞凋亡相关蛋白的表达。结果:微波辐射后SH-SY5Y细胞形态即刻改变,胞核、胞质结构欠清,细胞皱缩甚至脱壁;细胞核内的染色质出现不规则凝集,碎裂成2～5个微核;细胞DNA出现明显的梯状条带;细胞存活率随微波辐射强度增大逐渐降低,10 mW.cm-2辐射组与假辐射组比较,细胞存活率差异无统计学意义(P>0.05),但30、50 mW.cm-2辐射组细胞存活率明显低于假辐射组(P<0.05);微波辐射后6 h的细胞凋亡率随辐射强度的增加逐渐升高,各辐射组细胞凋亡率均明显高于假辐射组(P<0.05);微波辐射后24和48 h,细胞相对活力随辐射强度的增加明显降低,各辐射组的细胞相对活力均明显低于假辐射组(P<0.05)。微波辐射后,细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、survivin表达水平逐渐下降,Bax、caspase-3和caspase-7表达水平逐渐升高,caspase-8和-9表达水平无明显变化。结论:微波辐射可诱导SH-SY5Y细胞凋亡,其作用机制可能与survivin、Bcl-2蛋白表达水平下调、Bax蛋白表达水平上调及caspase-3和caspase-7的作用有关,而与caspase-8和caspase-9介导的caspase-3活化这一作用无密切关系。

叶酸和维生素B12对人神经母细胞瘤株SH-SY5Y细胞的保护作用

目的通过观察叶酸和维生素B12对人神经母细胞瘤株SH-SY5Y细胞生长的影响,探讨叶酸和维生素B12对神经细胞的保护作用。方法体外培养SH-SY5Y细胞,分为对照组、叶酸组(1.875 mg/L)、维生素B12组(800μg/L)、叶酸(1.875 mg/L)+维生素B12(800μg/L)组,进行细胞形态观察、细胞计数分析以及测定各组细胞的噻唑蓝(thiazolyl blue,MTT)代谢率、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)漏出率。结果与对照组相比,叶酸组、维生素B12组、叶酸+维生素B12组的细胞计数和MTT代谢率升高(P<0.05),LDH漏出率降低(P<0.05),在细胞形态上,叶酸组、维生素B12组、叶酸+维生素B12组明显好于对照组,表现为细胞胞体饱满、存活细胞数目增多、贴壁良好、突起延长。结论叶酸、维生素B12能促进神经细胞生长,降低神经细胞死亡率,从而达到保护神经元的作用。

环境雌激素双酚AF诱导神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞系增殖与侵袭的体外实验

目的探讨环境雌激素双酚AF(bisphenol AF,BPAF)对神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y增殖,及雌激素受体α(estrogen receptorα,ERα)转录活性的影响。方法 SH-SY5Y细胞转染ERE-Luc或Cat D-Luc荧光素酶报告基因后,使用0.01μmol/L、0.03μmol/L、0.1μmol/L、0.3μmol/L、1μmol/L、3μmol/L和10μmol/L浓度梯度的BPAF处理SH-SY5Y细胞,采用荧光素酶报告基因实验(luciferase)检测BPAF对ERα转录活性的影响;使用BPAF作用诱导ERα转录活性的EC_(max)浓度处理SH-SY5Y细胞,采用CCK-8实验检测细胞样品在450 nm波长的吸光度值;在ERα表达阴性的三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)细胞系MDA-MB-231中转染ERα表达载体;在SH-SY5Y细胞中转染ERα的小干扰RNA(si RNA)或使用ERα的拮抗剂ICI-182780(100 nmol/L)预处理SH-SY5Y细胞后,检测BPAF对ERα转录活性的诱导作用或对SH-SY5Y细胞增殖/侵袭的促进作用。结果 BPAF能够剂量依赖性地(R^2=0.94,P=0.007 6)在SH-SY5Y细胞中提高ERα的转录活性,其EC_(50)值为(0.44±0.09)μmol/L,EC_(max)值为3μmol/L;在SH-SY5Y细胞中转染ERα的si RNA载体,或使用ERα的拮抗剂(100 nmol/L ICI-182780)处理SH-SY5Y细胞能够显著下调BPAF诱导的ERα转录活性(抑制率分别为76.97%和77.75%),及其对SH-SY5Y细胞增殖(抑制率分别为77.42%和86.76%)、侵袭的促进作用(抑制率分别为95.87%和105.56%)。结论 BPAF可能通过诱导ERα的转录活性,促进神经母细胞瘤细胞系的增殖与侵袭。

不同能量的培养条件对人神经母细胞瘤株SH-SY5Y细胞生长的影响

目的建立热量限制的体外模型,观察不同能量培养条件下对人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y细胞生长代谢的影响。方法将人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y细胞分别采用含有低浓度(2 g/L)、正常浓度(3.15g/L)或高浓度(4.5 g/L)葡萄糖的培养基进行常规传代培养,利用MTT代谢率、细胞生长曲线及LDH漏出率等指标观察各组细胞生长情况。结果与正常葡萄糖浓度培养条件下培养的对照组相比,高糖组细胞突起缩短,细胞胞体皱缩,MTT代谢率稍低(0.573±0.001),LDH漏出率高,细胞生长状态差;与对照组相比,低糖组细胞突起伸展,MTT代谢率较低(0.428±0.003),LDH漏出率低,细胞生长速度缓慢,但是形态良好。结论高糖培养对细胞有损伤作用,细胞代谢加速,更容易衰老死亡;而低糖培养起到保护作用,在热量限制允许范围内降低培养液的含糖量,不但不会对细胞造成损伤,反而对细胞的代谢及生长起到保护作用,延长细胞的总体寿命。

锰化合物对神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y脂质过氧化的作用

[目的 ]通过锰染毒神经母细胞瘤细胞 (SH SY5Y) ,观察脂质过氧化及其相关酶水平的改变 ,探讨锰对SH SY5Y的脂质过氧化及相关酶活性的影响 ,为进一步研究锰神经毒作用的机制提供科学依据。 [方法 ]采用浓度为 0 .2 5、0 .5 0、0 .75mmol/L的二价锰和三价锰 ,分别对体外培养的SH -SY5Y细胞染毒 2 4h ,测定超氧化物歧化酶 (SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽 (GSH)、谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH Px)和过氧化氢酶 (CAT)的活性。 [结果 ]二价锰和三价锰均可引起SOD、MDA、GSH、GSH Px和CAT活性的改变 ,其中SOD、GSH、GSH Px和CAT活性与对照组比较差异均有显著性 (P <0 .0 5或P <0 .0 1) ,且存在剂量 效应关系。而MDA含量则较对照组升高 (P <0 .0 1) ,且随染毒浓度增高而上升。 [结论 ]一定浓度的锰化合物可使SH SY5Y细胞脂质过氧化反应增强 ,引起相关酶活性的改变。提示这种变化很可能是锰对神经细胞发挥毒作用的重要途径之一。

lncRNA SNHG8负调控miR-411-5p影响神经母细胞瘤细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的机制研究

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)、小核仁RNA宿主基因子8(SNHG8)对神经母细胞瘤(NB)细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响及作用机制。方法:实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测31例NB病人NB组织和瘤旁组织中SNHG8和miR-411-5p表达水平。体外培养NB细胞系SK-N-SH,双荧光素酶报告基因实验验证SNHG8和miR-411-5p调控关系。将SK-N-SH细胞分为对照组、si-NC组、si-SNHG8组、si-SNHG8+anti-miR-NC组和si-SNHG8+anti-miR-411-5p组,细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell检测细胞迁移和侵袭,蛋白质免疫印迹(Western Blot)法检测Ki67、活化的半胱天冬酶-3(Cleaved-Caspases-3)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达水平。结果:与瘤旁组织比较,NB组织中SNHG8表达水平升高(P<0.05),miR-411-5p表达水平降低(P<0.05)。SNHG8在SK-N-SH细胞中负调控miR-411-5p表达。与对照组、si-NC组比较,si-SNHG8组SK-N-SH细胞OD值、迁移和侵袭数及Ki67、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平降低(P<0.05),SK-N-SH细胞凋亡率和Cleaved-Caspases-3蛋白表达水平升高(P<0.05)。与si-SNHG8+anti-miR-NC组比较,si-SNHG8+anti-miR-411-5p组SK-N-SH细胞OD值、迁移和侵袭数及Ki67、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平升高(P<0.05),SK-N-SH细胞凋亡率和Cleaved-Caspases-3蛋白表达水平降低(P<0.05)。而对照组与si-NC组,si-SNHG8组与si-SNHG8+anti-miR-NC组各检测指标比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:下调SNHG8通过负调控miR-411-5p抑制NB细胞增殖、迁移和侵袭,并诱导细胞凋亡。

谷氨酸对人交感神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞系超极化激活的阳离子通道的影响

目的观察谷氨酸(Glu)对交感神经细胞超极化激活的阳离子通道(Ih通道)活动的影响。方法采用人交感神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞系作为交感神经细胞模型,用全细胞电压箝方式记录Ih通道电流。结果 SH-SY5Y细胞存在Ih通道电流;Glu(1mmol/L)可抑制SH-SY5Y细胞Ih电流的K+电流成分,但增强Ih电流的Ca2+电流和Na+电流成分,综合效应是使Ih电流增大。结论 Glu可增大SH-SY5Y细胞的Ih电流。这一效应提示,Glu可能通过诱发交感神经元去极化并促进其传出冲动增加。

微波辐射对人成神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞增殖与分化的影响

目的观察微波辐射对人成神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞增殖与分化的影响。方法采用10、30、50 mW/cm2辐射强度的微波辐射SH-SY5Y细胞5 min,0mW/cm2为对照组,锥虫蓝拒染法进行细胞计数并计算增殖率;20μmol/L全反式维甲酸黑暗下诱导分化72 h后,在光学显微镜下观察细胞分化的形态并计算分化细胞率;流式细胞仪检测细胞周期;蛋白质印迹检测细胞神经纤丝重链亚基的蛋白表达。结果微波辐射后随辐射强度增加,细胞增殖率在各时间点上均出现不同程度的梯度抑制,与对照组(0mW/cm2)相比,10 mW/cm2辐射组在72 h时出现明显抑制;30 mW/cm2辐射组在48 h时出现明显抑制;50 mW/cm2辐射组在辐射12 h时就出现明显抑制;20μmol/L全反式维甲酸黑暗下诱导分化72 h后,30、50 mW/cm2微波辐射组细胞分化的数量少于对照组细胞,而且细胞轴突长度短于对照组细胞;随着辐射强度的增加,G0/G1期的SH-SY5Y细胞比例逐渐增加,S期细胞比例逐渐减少,G2+M期细胞比例变化相对较小;微波辐射后,SH-SY5Y细胞总NF-H蛋白表达无明显变化,但磷酸化的NF-H蛋白表达随辐射强度的增加逐渐降低。结论微波辐射可同时抑制SH-SY5Y细胞增殖与分化并呈现明显的剂量依赖性抑制作用;细胞周期呈G0/G1期阻滞;对NF-H的表达无影响,但明显抑制了NF-H的磷酸化。

多柔比星联合蛋氨酸脑啡肽对神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的生长抑制及Tau蛋白磷酸化的调节作用

目的探讨多柔比星联合蛋氨酸脑啡肽(Met-ENK)对神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的生长抑制及Tau蛋白磷酸化的调节作用。方法阳性对照组SH-SY5Y细胞以1. 25 mg·L^(-1)的多柔比星处理,低、中、高剂量实验组SH-SY5Y细胞分别以1. 25 mg·L^(-1)的多柔比星+10-7、10-5、10-3mol·mL^(-1)Met-ENK处理,阴性对照组细胞以等量生理盐水处理。MTT法检测各组SH-SY5Y细胞存活率,流式细胞术和Hoeschest 33258细胞核染色检测各组SH-SY5Y细胞凋亡情况,Western Blot法检测各组SH-SY5Y细胞p-Tau蛋白表达情况。结果与阴性对照组比较,干预24、48、72 h后,阳性对照组和各实验组细胞存活率降低,且实验组低于阳性对照组,实验组细胞存活率随着Met-ENK浓度的增大逐渐降低(P <0. 05)。与阴性对照组比较,阳性对照组和各实验组细胞凋亡率、G0/G1期细胞比例显著升高,中、高剂量实验组高于阳性对照组(P <0. 05);阳性对照组和各实验组S期细胞比例显著降低,中、高剂量实验组低于阳性对照组(P <0. 05)。与阴性对照组比较,阳性对照组和各实验组细胞p-Tau蛋白相对表达量明显升高,中、高剂量实验组高于阳性对照组(P <0. 05)。结论多柔比星联合Met-ENK可抑制神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞生长,并促进其凋亡,这可能与上调Tau蛋白磷酸化水平有关。

反义bcl-2 mRNA对人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y生长和凋亡的作用

目的 研究反义bcl-2 mRNA对人神经母细胞瘤（NB）细胞株SH-SY5Y的生长和凋亡的作用。方法采用定向克隆构建携带反义bcl-2 cDNA片段的逆转录病毒载体PBabe-puro/Asbcl-2；应用脂质体Lipofectamine转染SH-SY5Y，经嘌呤霉素筛选，应用RT-PCR证实外源性反义bcl-2 mRNA的表达，建立细胞株SH-SY5Y/Asbcl-2；应用免疫组化和Western印迹分析Bcl-2蛋白的表达变化；MTT法做细胞的生长曲线观察细胞的生长情况；通过提取基因组DNA检测顺式氯铂（CP）诱导的细胞凋亡所形成的DNA 梯带。结果RT-PCR证实转染细胞SH-SY5Y/Asbcl-2中有外源性反义bcl-2 mRNA的表达；免疫组化及Western印迹分析显示SH-SY5Y/Asbcl-2细胞的Bcl-2蛋白表达明显降低；生长曲线显示SH-SY5Y/Asbcl-2细胞生长缓慢;加入CP相同时间后，SH-SY5Y/Asbcl-2细胞凋亡形成的DNA 梯带更明显。结论脂质体方法转染携带反义bcl-2 cDNA片段的逆转录病毒载体能够获得稳定转染和表达反义bcl-2 mRNA的细胞；反义bcl-2 mRNA可抑制内源性Bcl-2蛋白的表达，抑制SH-SY5Y细胞的生长，增加SH-SY5Y细胞对CP的敏感性，促进细胞凋亡。

细胞色素C1对神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y增殖作用的研究

目的 分析细胞色素C1（CYC1）在神经母细胞瘤（NB）增殖中的作用,探讨神经母细胞瘤增殖的分子机制。方法 首先采用在SH-SY5Y细胞系中慢病毒介导敲减CYC1基因方法,建立神经母细胞瘤CYC1敲减模型,并利用实时定量RT-PCR方法验证敲减效率;随后利用荧光显微镜观察及细胞分析系统连续检测慢病毒感染SH-SY5Y细胞后连续5 d细胞增殖数。结果 慢病毒介导的SH-SY5Y细胞中CYC1基因敲减效率达77.0%±4%,具极显著差异（P〈0.01）;通过细胞分析系统连续检测SH-SY5Y细胞慢病毒感染敲减CYC1后0～5 d细胞数发现细胞增殖速度明显降低,对照组/敲减CYC1组细胞数1～5 d比值分别为（1.00±0.11）、（1.61±0.16）、（1.58±0.17）、（1.97±0.13）、（1.44±0.13）,具极显著差异（P〈0.01）。结论 CYC1基因沉默可抑制神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y增殖,CYC1在调节神经母细胞瘤生长增殖方面发挥重要作用。

救脑益智方剂水提液对人神经母细胞瘤株SH-SY5Y细胞的保护作用

目的通过观察复方中药救脑益智方剂水提液对人神经母细胞瘤株SH-SY5Y细胞生长以及胰岛素信号通路的影响,探讨其对神经细胞保护作用的机制。方法体外培养SH-SY5Y细胞,分为对照组(C组)、救脑益智1号方组和3号方组,每组药物剂量分别为0.0625 mg/m L、0.125 mg/m L、0.25 mg/m L、0.5 mg/m L和1 mg/m L,测定各组细胞的噻唑蓝(MTT)代谢率,选定0.125 mg/m L进行细胞免疫荧光染色,观察细胞形态和胰岛素受体底物-1(IRS-1)、c AMP反应元件结合蛋白(CREB)表达的变化。结果与对照组相比,救脑益智组MTT代谢率升高(P<0.05),细胞形态好,表现为细胞胞体饱满、贴壁良好、突起延长,IRS-1和CREB表达增加。结论复方中药救脑益智水提液能促进神经细胞生长,提高神经元胰岛素信号通路相关因子IRS-1和CREB表达,推测其神经保护作用机制与胰岛素信号通路有关。

反义P38cDNA抑制胆红素诱导的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡

目的 :观察P3 8激酶特异性抑制剂SB2 0 3 580及反义P3 8激酶cDNA对胆红素诱导人神经母细胞瘤SH -SY 5Y细胞凋亡的影响 ,探讨P3 8激酶信号转导通路在胆红素诱导SH -SY5Y细胞凋亡中的作用及高胆红素血症损伤中枢神经细胞的分子机制及在听神经病发病中的作用。方法 :分别经SB2 0 3 580和二甲基亚砜预处理的SH -SY5Y细胞在胆红素作用 3h和 5h后 ,在倒置光显微镜下观察细胞形态的变化及存活情况 ;流式细胞仪检测凋亡细胞百分率。采用脂质体法将含人反义P3 8cDNA的真核表达载体 pcDNA 3 0 -antiP3 8导入SH -SY5Y细胞 ,建立稳定低表达P3 8蛋白的细胞株 ,经Westernblotting鉴定后命名为SH -SY5Y -antiP3 8,而转染空载体pcD NA3 0的SH -SY5Y细胞株则命名为SH -SY5Y -pcDNA3 0 ;SH -SY5Y -antiP3 8细胞和SH -SY5Y -pcD NA3 0细胞分别经胆红素作用 3h和 5h ,在倒置光显微镜下观察细胞形态的变化及存活情况 ;流式细胞仪检测凋亡细胞百分率。结果 :在 0 0 2 g/L胆红素作用下 ,流式细胞仪显示与对照相比SB2 0 3 580预处理的SH -SY5Y细胞在胆红素作用 3h后 ,其凋亡细胞由 19 4%下降到 12 1% ,5h后由 66 2 %降到 3 9 3 % ;与SH -SY5Y -pcDNA3 0细胞相比 ,SH -SY5Y -antiP3 8细胞在胆红素作用 3h后 。

MALAT1抑制Aβ_(25-35)诱导的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞增殖并促进细胞凋亡及其机制

目的探讨长链非编码RNA转移相关肺腺癌转录本1(MALAT1)对Aβ_(25-35)诱导的阿尔茨海默病(AD)神经细胞的细胞周期、细胞增殖凋亡的影响。方法利用β淀粉样肽25-35(Aβ_(25-35))处理人神经母细胞瘤细胞SHSY5Y建立AD细胞模型。将AD SH-SY5Y细胞随机分为对照组、p CDH空载体(p CDH-EV)组、MALAT1过表达(p CDH-MALAT1)组、抑制表达空载体(p SICOR-EV)组、抑制MALAT1表达(p SICOR-sh MALAT1)组。噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞增殖活性,流式细胞术检测转染48 h后的细胞周期和细胞凋亡率,Western blot法检测细胞BAX、Bcl2、胱天蛋白酶3(caspase-3)以及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、磷酸化的PI3K(p-PI3K)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)和磷酸化的mTOR(p-mTOR)、糖原合成酶激酶3β(GSK3β)、磷酸化的GSK3β(p-GSK3β)蛋白水平。结果成功构建AD细胞模型和过表达及敲低MALAT1的表达载体。敲低MALAT1水平后,显著抑制AD模型细胞的增殖、细胞阻滞于G1期、促进细胞凋亡。同时上调BAX、caspase-3蛋白水平,下调Bcl2、p-PI3K、p-mTOR、p-GSK3β蛋白水平。过表达MALAT1则可逆转以上作用。结论敲低MALAT1水平可阻断PI3K/mTOR/GSK3β通路抑制Aβ25-35诱导的SH-SY5Y细胞增殖,促进细胞凋亡。

李氏5号方对人神经母细胞瘤株SY5Y生长的影响

目的:观察李氏5号方在细胞水平上对神经细胞生长的影响,寻找最佳药物浓度.方法:不同浓度的李氏5号方作用于人神经母细胞瘤株SY5Y,利用MTT测定细胞的存活率,制定浓度-药效曲线得出最佳药物浓度.以MTT代谢率、LDH漏出率、细胞轴突长度、胞体面积为观察指标.结果:李氏5号方在0.125～0.75 g*L-1浓度范围内均可增加SY5Y细胞的存活率.与正常对照组相比,加药组SY5Y细胞轴突长度和胞体面积均增加,MTT代谢率升高、LDH漏出率降低. 结论:李氏5号方具有营养神经细胞、促进神经细胞存活的作用.