P66Shc分子在肿瘤发生发展中的作用及机制研究进展

P66Shc作为ShcA家族成员,具有家族特有的高度保守结构域,对细胞的增殖、分化和凋亡起重要的调控作用,因而在肿瘤发生发展中也起着关键性作用。在不同的肿瘤细胞中,p66Shc的表达表现出两面性:既可促进肿瘤生长和转移,也可以抑制肿瘤发展。异常水平表达的p66Shc通常与肿瘤细胞过度增殖、高转移风险和不良预后相关。P66Shc还可通过激活氧化应激通路来调节肿瘤细胞的代谢状态,参与协调肿瘤细胞凋亡、自噬和失巢凋亡等不同死亡方式。探究p66Shc在肿瘤发生发展中的作用及机制,可为肿瘤临床治疗中有效靶点的寻找带来更多新的突破。

SHC蛋白家族成员与恶性肿瘤的研究进展

原癌基因SHC家族包含ShcA、ShcB、ShcC和ShcD 4个成员,共编码7种衔接蛋白。SHC家族各成员主要参与酪氨酸激酶信号转导通路、Ras-促分裂原活化的蛋白激酶、磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶等生长因子信号通路,与氧化应激及多种生理功能的调控密切相关。SHC分布广泛,在肿瘤中高表达,参与肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭,可作为预测肿瘤患者预后及生存期的指标。因此,深入研究SHC蛋白家族成员与肿瘤的相关性,可以为肿瘤的早期诊断和免疫治疗提供新靶点。

衔接蛋白p66Shc在心肌缺血再灌注损伤中的作用研究进展

缺血性心脏病是全世界死亡率较高的疾病之一,长期危害着人类的健康,其首选治疗策略再灌注可导致心肌缺血恶化及加速损伤,即心肌缺血再灌注损伤(MIRI),严重影响临床疗效及患者预后。目前MIRI的预防和治疗仍是临床尚未解决的难题。大量研究表明,衔接蛋白p66Shc在包括MIRI对内的多种疾病的发生发展具有重要的调控作用。本文针对衔接蛋白p66Shc在MIRI氧化应激、炎症反应和血管内皮功能障碍中的调节作用机制,以及以p66Shc为靶点的相关治疗策略进行综述,以期为MIRI的预防和治疗提供进一步的参考。

慢肾康宁方对慢性肾衰大鼠肾组织氧化应激状态及Caspase-3,JNK,p66Shc蛋白表达影响

目的:观察中药慢肾康宁方对腺嘌呤诱发的慢性肾衰大鼠肾脏氧化应激状态及p66Shc,Caspase-3和JNK蛋白的影响。方法:60只wistar大鼠随机分成正常组,模型组,氯沙坦组,中药慢肾康宁方低、中、高质量分数组,除正常组给予生理盐水灌胃外,其余各组使用腺嘌呤灌胃复制慢性肾衰大鼠模型,时间是21d。检测模型建立成功后,正常组和模型组给予生理盐水灌胃,其余各组对应给予等量药物进行治疗,疗程为28d。实验结束后,检测各组大鼠血清尿肌酐(Scr)和尿素氮(BUN)的含量,采用化学比色法测定肾组织中超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的含量,提取肾组织蛋白,通过Western blotting进行p66Shc,Caspase-3和JNK蛋白的检测。结果:造模成功后,模型组Scr及BUN水平明显升高,显著高于正常组(P<0.01),SOD水平降低,MDA活性升高,与正常组相比差异具有统计学意义(P<0.05),肾脏组织内Caspase-3,JNK,p66Shc及其磷酸化位点p66Shc-ser36表达量明显上升(P<0.05)。经药物治疗后,中药低中高剂量组及氯沙坦组Scr和BUN均明显降低(P<0.01),SOD活性升高,中药高剂量组和氯沙坦组升高明显(P<0.05),其余治疗组具有升高趋势,MDA含量明显降低,氯沙坦组和中药高剂量降低趋势明显(P<0.05),其余各组存在降低趋势,Caspase-3,JNK,p66Shc及磷酸化蛋白p66Shc-ser36表达量较模型组相比均呈现出下降趋势(P<0.05)。结论:中药慢肾康宁方高剂量治疗组能够降低慢性肾衰大鼠血清Scr,BUN水平,改善肾间质纤维化程度,作用的机制可能与提高SOD水平,降低MDA表达,改善肾脏氧化应激状态及降低Caspase-3,p66Shc和JNK蛋白表达水平相关。

山茱萸纳米水提液对衰老小鼠脑组织p66^(shc)表达的影响

目的探讨山茱萸制剂对自然衰老小鼠脑组织的磷酸化酪氨酸信号适配蛋白(66kilodalton isoform of shcgene products,p66shc)表达的影响。方法人工饲养自然衰老小鼠11～12月龄36只、青年鼠8只,分6组:青年对照组、衰老对照组和给药组,给药组又分为山茱萸纳米水提液和醇提液的大剂量、小剂量组;各组给药30d,然后断头取小鼠肝组织做超氧化物岐化酶(SOD)、丙二醛(MDA)检测,RT-PCR法测定小鼠脑组织p66shc的表达。结果山茱萸纳米水提和醇提液给药组SOD活性与衰老对照组相比显著升高(P<0.01),而MDA含量和脑p66shc的表达显著降低(P<0.01);山茱萸纳米制剂水提液小剂量、大剂量组和醇提液比较上述作用均更显著(P<0.01)。结论山茱萸能够明显降低衰老小鼠脑p66shc活性亚基的表达,从而影响p66shc活性起到延缓衰老的作用。山茱萸纳米水提取液小剂量组的作用优于山茱萸纳米醇提液各组。

Shc1在肝癌组织中的表达及对肝癌SMMC-7721细胞增殖迁移能力的影响

目的探讨Shc1在肝癌组织中的表达情况及其对人肝癌SMMC-7721细胞增殖、迁移能力的影响。方法采用实时定量PCR、蛋白质印迹法、免疫组织化学法检测33例肝癌及其对应的癌旁组织中Shc1的表达情况,并分析Shc1蛋白表达量与临床特征间的关系;培养肝癌SMMC-7721细胞,以siRNA技术干扰Shc1的表达,采用MTT法和细胞划痕试验分别检测干扰Shc1对细胞增殖活力和迁移能力的影响。结果在33对样本中,肝癌组织中Shc1的表达高于癌旁组织(P<0.05);Shc1表达于肝癌细胞的胞质中。无肝硬化的患者Shc1阳性率(100%)高于伴肝硬化者(54.2%),术前Child-Pugh分级A级的患者Shc1阳性率(75.9%)高于B级或C级的患者(0%),术前血AFP阳性患者Shc1阳性率(79.2%)高于AFP阴性患者(33.3%),术后病理EdmondsonⅢ、Ⅳ级患者Shc1阳性率(84.2%)高于Ⅰ、Ⅱ级的患者(42.9%),差异均有统计学意义(P<0.05)。干扰Shc1表达后,随时间延长,SMMC-7721细胞增殖、迁移明显受到抑制(P<0.05)。结论 Shc1在肝癌组织中高表达,且Shc1的阳性率与有无肝硬化、Child-Pugh分级、术前AFP、病理Edmondson分级相关;干扰Shc1的表达可抑制肝癌SMMC-7721细胞的增殖、迁移能力。

结肠癌中雌激素受体和衔接蛋白p66Shc的表达和意义

背景:雌激素和雌激素受体(ER)在结肠癌的发生、发展中起重要作用,然而ER在其中的具体作用机制尚不完全清楚。在甾类激素敏感性肿瘤细胞中,甾类激素可显著上调衔接蛋白p66Shc表达并刺激细胞增殖。目的:探讨ER和p66Shc在结肠癌中的表达特点及其临床意义。方法:以免疫组化方法检测65例石蜡包埋结肠癌组织及其癌旁非癌组织中的ER和p66Shc蛋白表达,分析p66Shc蛋白表达与结肠癌临床病理特征的相关性。结果:ER和p66Shc蛋白表达分别定位于细胞核和细胞质,结肠癌组织中的ER和p66Shc蛋白表达阳性率显著高于癌旁非癌组织(ER:47.7%对0%,P<0.01;p66Shc:49.2%对0%,P<0.01),且两者呈正相关(r=0.43,P<0.05)。p66Shc蛋白表达与结肠癌患者的性别、年龄以及原发肿瘤部位、肿瘤大小、大体类型、浸润深度、淋巴结转移、AJCC分期均无相关性,而与肿瘤组织学分级相关(高分化:22.2%,中分化:47.7%,低分化:75.0%,P=0.046)。结论:结肠癌可能是一种雌激素敏感性肿瘤。雌激素及其受体可能与p66Shc共同参与了结肠癌的发生、发展。

急性心肌梗死患者外周血单个核细胞P66Shc mRNA的表达及其与氧化应激的关系

目的探讨急性心肌梗死患者外周血单个核细胞P66Shc mRNA的表达及其与氧化应激的关系。方法选择经冠状动脉造影检查及治疗的患者67例,根据临床表现和冠状动脉造影结果分成健康对照组23例,稳定型心绞痛组23例,急性心肌梗死组21例。通过检测血中超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)水平,对机体氧化应激状态进行全面分析,在此基础上运用RT-qPCR比较三组外周血单个核细胞中P66Shc mRNA的表达,并对P66Shc mRNA的表达与MDA及SOD进行相关性分析。结果急性心肌梗死组MDA明显高于稳定型心绞痛组和健康对照组(P<0.05),而SOD明显低于稳定型心绞痛组和健康对照组(P<0.01);急性心肌梗死组P66Shc mRNA的表达明显高于稳定型心绞痛组及健康对照组(P<0.01),而在稳定型心绞痛组与健康对照组之间无明显差别(P>0.05),且P66Shc mRNA的表达量与MDA水平呈正相关(r=0.49,P=0.024),与SOD水平相关性不明显。结论急性心肌梗死时P66Shc mRNA表达增高,P66Shc可能介导了斑块由稳定到不稳定性转化的机制。

过表达SHC3激活AKT/Nrf2/GSH通路保护帕金森病氧化应激损伤

目的 研究过表达含有Src同源结构域2的衔接蛋白(SHC)3对帕金森病(PD)氧化应激损伤的影响及其机制。方法 运用1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)处理PC12细胞构建PD模型,将PC12细胞分为正常组、模型组、模型+NC组、模型+SHC3组;用qRT-PCR法检测各组细胞中SHC3mRNA表达;Western印迹检测各组细胞中SHC3、B细胞淋巴瘤-2基因(Bcl-2)/Bcl-2关联X的蛋白(Bax)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(caspase)-3、磷酸化(p)-蛋白激酶B(AKT)、核因子NF-E2相关因子(Nrf)2的蛋白表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组细胞中活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、乳酸脱氢酶(LDH)的含量;流式细胞术检测各组细胞凋亡率。结果 与正常组相比,成功构建PC12细胞损伤模型,且MPP+损伤的PC12细胞可显著下调SHC3表达,上调ROS、MDA、LDH含量,下调GSH含量,显著降低细胞活性,促进细胞凋亡,显著下调p-AKT、Nrf2的蛋白表达,上调Bcl-2/Bax、caspase-3的蛋白表达。与模型+NC组相比,成功构建过表达SHC3的PC12细胞损伤模型,且过表达SHC3可降低ROS、MDA、LDH含量,升高GSH含量,显著升高细胞活性,显著抑制细胞凋亡,显著上调p-AKT、Nrf2的蛋白表达,下调Bcl-2/Bax、caspase-3的蛋白表达。结论 过表达SHC3可保护PD的氧化应激损伤,其机制可能与激活AKT/Nrf2/GSH通路有关。

p66Shc在绵羊卵母细胞中的表达及其与胞质氧化还原稳态的关系

[目的]研究p66Shc在绵羊卵母细胞中的表达特征及其与卵母细胞胞质氧化还原稳态的关系,为揭示p66Shc参与调控卵母细胞胞质氧化还原稳态分子机制提供理论依据。[方法]试验所用卵丘-卵母细胞复合体(cumulus-oocyte complexes, COCs)来源于屠宰场的绵羊卵巢。分别收集成熟前优质和劣质、常规成熟24 h及成熟30 h老化的卵母细胞,采用实时荧光定量PCR对成熟前后不同质量绵羊卵母细胞中p66Shc mRNA的表达量进行分析,利用细胞免疫荧光结合MitoTracker Red探针对p66Shc蛋白和线粒体进行共定位,同时利用荧光探针DCFH-DA和卵母细胞自发荧光分别对成熟前后不同质量卵母细胞内ROS水平和氧化还原稳态进行检测。此外,采用外源H2O2诱导的氧化应激处理成熟前优质卵母细胞,并对p66Shc蛋白的表达及定位进行了检测分析。[结果]实时荧光定量PCR结果显示,成熟前劣质和成熟后老化卵母细胞中p66Shc mRNA表达量分别显著(P<0.05)高于成熟前优质和常规24 h成熟的卵母细胞。然而优质卵母细胞成熟前后p66Shc mRNA表达量没有显著差异(P>0.05)。共定位结果表明,p66蛋白主要分布在线粒体分布活跃的区域。细胞免疫荧光结果显示,成熟前劣质和成熟后老化卵母细胞中p66Shc蛋白表达量也分别显著(P<0.05)高于成熟前优质和常规24 h成熟的卵母细胞。与成熟前优质和常规24 h成熟的卵母细胞相比,成熟前劣质和成熟后老化卵母细胞表现出线粒体分布紊乱和活性下降、ROS水平升高以及氧化还原稳态的失衡。此外,与未添加外源H2O2的对照组相比,外源H2O2处理成熟前优质卵母细胞诱导的氧化应激显著(P<0.05)上调p66Shc蛋白的表达并促使p66Shc由胞质向细胞核定位。[结论]p66Shc基因在劣质和老化的绵羊卵母细胞中呈现高水平的表达,H2O2诱导的氧化应激显著上调p66Shc蛋白的表达并影响其亚细胞定位。总之,绵羊卵母细胞中p66Shc表达上调影响了胞质的氧化还原稳态。

氧化应激下的p66^(Shc)调控作用

氧化应激产生的过量活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)可通过分子毒性作用或相关信号通路影响相关病理生理学过程.p66Shc是Shc蛋白家族的重要成员之一.氧化应激下p66Shc能被蛋白激酶Cβ(protein kinase Cβ,PKCβ)、Jun氨基末端激酶(Jun N-terminal kinase,JNK)和p53等激活,促进线粒体产生ROS.本文将对氧化应激下p66Shc的作用以及调控其作用的信号转导机制做一综述.

慢病毒载体靶向介导p66shc基因沉默

目的构建p66shc基因重组慢病毒表达载体,并将之转染至293T细胞,通过RNA干扰致使p66shc基因沉默,为进一步研究p66shc基因功能奠定基础。方法筛选3个RNA靶点,命名为p66shc-shc1、p66shc-shc2、p66shc-shc3,与双酶切后的pLenR-绿色荧光蛋白(GPH)(含有GFP表达)连接,转化入感受态的DH5α细胞,挑取阳性克隆测序正确后,与pRsv-REV、pMDlg-pRRE、pMD2G一起转染293T细胞,于倒置荧光显微镜下检测GFP的表达,证实病毒包装成功。使用荧光定量PCR及Western blot技术检测p66shc在基因及蛋白水平的表达,选取有效沉默p66shc基因的p66shc-shc1靶点,为后续试验做准备。结果成功构建表达p66shc的shRNA慢病毒载体并转染至真核生物细胞内,通过荧光定量PCR及Western blot技术检测其通过RNA干扰导致细胞内p66shc基因沉默。结论靶向表达p66shc的shRNA慢病毒载体,转染入真核生物细胞内可通过RNA干扰在分子及蛋白水平导致p66shc基因沉默。

Shc的研究进展

原癌基因Shc家族包含ShcA、ShcB、ShcC和ShcD 4个基因成员,可编码7种衔接分子。其表达分布和作用广泛。Shc可以通过磷脂酰肌醇3-激酶/苏氨酸激酶信号通路和Ras-Raf-膜受体酪氨酸蛋白激酶等信号通路,参与氧化应激及各种生理功能的调控。ShcA可参与早期心血管系统及神经系统形态发生,且参与心脏结构功能的维护。该文就近年来Shc的研究进展予以综述。

金色中仓鼠胚胎植入小鼠子宫后PTEN、FAK、Shc信号分子的异常表达(英文)

除了马属动物外,种间妊娠的胚胎总在妊娠的一定时期流产。以往的研究多集中在宏观结构和解剖学差别的研究上,对于这种现象产生的分子机制却少有报道。为了从信号分子角度阐明种间妊娠维持失败的可能原因,我们通过免疫组化和明胶酶谱法比较了科间和同种妊娠部位整合素αvβ3、FAK、p-ERK、IGFⅡ、IGFBP-1、Shc、PTEN和MMP-2、-9表达的差异。科间妊娠是将金色中仓鼠(Mesocricetus auratus)的胚胎移植入假孕小鼠(Mus musculus)子宫并取妊娠D4、D8、D12的子宫为实验材料,相应时间同种小鼠胚胎移植小鼠妊娠后的子宫和假孕小鼠子宫分别为阳性和阴性对照。免疫组化结果表明D8时,科间妊娠孕体integrinαvβ3、IGF-Ⅱ、IGFBP-1、PTEN、Shc、FAK的表达强度均与正常同种妊娠有差异。而妊娠D8时同种、科间妊娠子宫p-ERK的表达部位与表达量无明显差异。明胶酶谱显示,科间妊娠时MMP-2,-9的分泌模式与同种妊娠明显不同。这些结果表明,上述信号通路分子的差异表达有可能是造成科间妊娠时母胎界面异常的组织学表现的一个原因。

衔接蛋白p66Shc在糖尿病及其并发症中的作用

p66Shc是调控氧化应激和生命周期的关键蛋白。在氧化应激信号的刺激下,p66Shc在线粒体内氧化细胞色素C产生大量活性氧,造成细胞的氧化损伤。最新的研究表明,p66Shc可能在衰老及衰老相关的疾病如糖尿病中扮演关键的角色。本文简要综述p66Shc的结构、功能、相关的信号通路及其在糖尿病领域的最新研究进展。

膀胱癌中衔接蛋白p66Shc的表达及临床意义

目的观察p66Shc蛋白在膀胱癌中的表达,分析其表达与膀胱癌临床分期、病理类型、转移等的关系,以及p66Shc影响膀胱癌细胞增殖、凋亡的分子机制。方法 应用免疫组化法和Western blot技术检测32例膀胱癌中p66Shc蛋白的表达,分析p66Shc蛋白表达和临床病理特征的关系。Western blot技术检测T24细胞中PKCβ和p66Shc蛋白及其磷酸化水平,以及p53、Bax和BCL-2蛋白水平。结果 膀胱癌组织中p66Shc阳性率为65.6%(21/32),其在T3+T4期膀胱癌中的表达显著高于T1+T2期膀胱癌( P <0.05);p66Shc表达与患者年龄、性别、分化程度无关( P >0.05)。LY333531下调T24细胞中PKCβ和p66Shc蛋白及其磷酸化水平,以及下调p53、Bax和上调BCL-2的蛋白水平。结论 p66Shc蛋白在膀胱癌中的表达与膀胱癌临床分期相关,随着pTNM分期增加而表达增多。p66Shc磷酸化促进肿瘤细胞的增殖和凋亡。

p66shc基因表达与老年糖尿病患者早期肾损伤的相关性

目的研究p66shc基因在老年糖尿病患者外周血单核细胞中的表达及其与早期肾损伤指标的关系。方法采用实时PCR技术检测74例老年糖尿病患者和48例健康老年人(对照组)外周血单核细胞中p66shc基因表达水平,结合临床资料分析p66shc与早期肾损伤指标尿微量白蛋白(m Alb)、转铁蛋白(TRF)、免疫球蛋白(Ig G)、α1-微球蛋白(α1-MG)和N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)之间的相关性。结果 p66shc基因在老年糖尿病患者中的表达水平显著高于对照组(P<0.05);与对照组相比,老年糖尿病患者m Alb、TRF、Ig G、α1-MG、NAG均显著升高(均P<0.01),并均与p66shc基因的表达水平呈正相关。结论 p66shc与老年糖尿病患者早期肾损伤密切相关,可为老年糖尿病患者肾损伤的早期诊断提供新的依据。

p66^(Shc)基因调控早期胚胎发育阻滞的研究进展

在胚胎早期发育过程中,存在易停留在某个阶段的现象,称之为发育阻滞,如小鼠胚胎的2-细胞阻滞等。从分子结构及功能、调控活性氧水平和作用网络方面,综述了p66Shc基因调控早期胚胎发育阻滞的研究进展,以期对该领域的研究提供借鉴。

siRNA干扰技术沉默p66SHC对结直肠癌细胞生物学特性的影响

目的探讨干扰p66shc基因表达对结直肠癌HCT116细胞增殖、迁移、迁移的影响。方法实验分为对照组(不做任何处理)、NC-siRNA组和p66SHC-siRNA组,NC-siRNA组、p66SHC-siRNA组通过Lipofectamine 2000将特异性siRNA转染入结直肠癌HCT116细胞中。荧光定量PCR(RT-PCR)和免疫印迹试验(Western Blot)检测细胞中p66SHC的表达量;四甲基偶氮唑(MTT)法检测细胞的增殖能力;划痕实验和Transwell法观察细胞迁移、侵袭的变化;Western Blot检测细胞EMT相关蛋白钙黏蛋白E(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、钙黏蛋白N(N-cadherin)的水平。结果采用siRNA干扰HCT116细胞中p66SHC蛋白的表达后,细胞的增殖能力显著下降(P<0.05),明显抑制细胞侵袭、迁移能力(P<0.05),E-cadherin蛋白的水平明显上调(P<0.05),Vimentin、N-cadherin蛋白的表达水平显著下调(P<0.05)。结论干扰p66SHC基因的表达能阻碍EMT的发生,从而降低结直肠癌细胞的增殖、侵袭以及迁移能力。