肝癌细胞系中circAMOTL1的表达及对肝前体细胞增殖和恶性转化的影响

目的探讨环状RNA circAMOTL1在肝癌细胞系中的表达及其对肝前体细胞(HPCs)系WB-F344的增殖迁移及恶性转化的影响。方法通过实时荧光定量PCR检测circAMOTL1在5种肝癌细胞系和正常肝细胞系L-02以及HPCs系WB-F344中的表达;同时构建过表达和敲除circAMOTL1的WB-F344的细胞系;通过CCK-8实验检测过表达或敲除cAMOTL1后HPCs的增殖变化;细胞划痕实验验证细胞迁移的变化;通过蛋白免疫印迹实验验证过表达或敲除circAMOTL1后对肝癌干细胞(LCSCs)标志物CD133的表达影响。结果5种肝癌细胞系中circAMOTL1的表达水平均高于L-02(P<0.05);过表达circAMOTL1后HPCs的增殖能力显著提高(P<0.01),敲除circAMOTL1后细胞的增殖能力显著下降(P<0.001);过表达circAMOTL1后显著提升了细胞的迁移能力(P<0.01),敲除后细胞的迁移能力明显下降(P<0.01);过表达circAMOTL1后可以检测到CD133的表达。结论circAMOTL1在5种肝癌细胞系中高表达,过表达circAMOTL1可以促进HPCs的增殖和迁移能力,诱导其向LCSCs方向恶性转化。

裂果薯总皂苷对WB-F344恶性转化细胞上皮间质转化及迁移、侵袭的影响

目的:探讨裂果薯总皂苷(SSPHs)对WB-F344恶性转化细胞上皮间质转化(EMT)及迁移、侵袭的影响及其机制。方法:采用致癌剂1-甲基-3-硝基-1-亚硝基胍(MNNG)体外诱导大鼠肝卵圆细胞系WB-F344制备恶性转化细胞模型。实验分为对照组、MNNG组、MNNG+SSPHs组、MNNG+Wnt-1/β-catenin信号通路激活剂氯化锂(LiCl)+信号通路抑制剂(XAV-939)组、MNNG+LiCl组、MNNG+LiCl+SSPHs组。CCK-8法检测SSPHs对WB-F344恶性转化细胞活力;细胞划痕和Transwell侵袭实验分别检测WB-F344恶性转化细胞的迁移、侵袭能力;蛋白质免疫印迹(western blotting)法检测E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、Wnt-1、β-catenin蛋白表达。结果:SSPHs处理后,WB-F344恶性转化细胞活力受到抑制(P<0.05)。与对照组比较,MNNG组划痕愈合率升高,细胞穿膜数增多,N-cadherin、Vimentin、Wnt-1、β-catenin蛋白表达上调,E-cadherin蛋白表达下调(均P<0.05)。与MNNG组比较,MNNG+SSPHs组划痕愈合率降低,穿膜数减少,N-cadherin、Vimentin、Wnt-1、β-catenin蛋白表达下调,E-cadherin蛋白表达上调(均P<0.05)。与MNNG+LiCl组比较,MNNG+LiCl+SSPHs组N-cadherin、Vimentin、Wnt-1、β-catenin蛋白表达下调,E-cadherin蛋白表达上调(均P<0.05),与MNNG+LiCl+XAV-939组结果相同。结论:SSPHs可抑制WB-F344恶性转化细胞的EMT和迁移、侵袭,其机制可能与调控Wnt-1/β-catenin信号通路相关。

肿瘤相关巨噬细胞上调miR-221-3p可能参与了前列腺癌的恶性转移

目的探讨肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)上调miR-221-3p可能参与促进前列腺癌(PCa)恶性转移的作用机制。方法选择6例转移性PCa患者癌组织进行微小RNA(miRNAs)表达谱测序和差异表达miRNAs分析。分离上述转移性PCa患者癌组织中的原代TAMs。采用聚合酶链反应(qPCR)测定其中miR-221-3p的表达水平。向RAW264.7巨噬细胞转染miR-221-3p模拟物(mimic)或抑制物(inhibitor),然后与人PCa细胞系PC3细胞建立共培养体系。CCK-8法测定PC3细胞增殖能力,流式细胞术(FCM)测定细胞凋亡率,Transwell法测定细胞迁移和侵袭能力,Western blot法测定细胞上皮-间充质转化(EMT)相关蛋白因子的表达水平。结果在6例转移性PCa患者的癌组织中,与淋巴结转移阴性PCa组织来源TAMs相比,淋巴结转移阳性PCa组织来源TAMs中hsa-miR-221-3p显著上调(P<0.05)。在共培养体系中,与Mimic-NC组相比,miR-221-3p mimic组PC3细胞增殖能力明显增强;迁移能力和侵袭能力明显增强;EMT相关蛋白因子表达水平明显增强(除E-Cadherin)(P均<0.05)。与Inhibitor-NC组相比,miR-221-3p inhibitor组细胞增殖能力明显降低,凋亡率明显升高;迁移能力和侵袭能力明显被抑制;EMT相关蛋白因子表达水平明显被抑制(除E-Cadherin)(P均<0.05)。结论TAMs上调miR-221-3p可能参与促进了PCa恶性转移。

hucMSC-Exs缓解IBD恶性转化机制的研究进展(综述)

炎症性肠病(IBD)长期迁延不愈,易恶性转化导致结直肠癌(CRC)发生,目前临床上仍缺乏有效治疗IBD的方法。人脐带间充质干细胞(hucMSCs)及其来源的外泌体(Exs)能修复DSS诱导的小鼠IBD。人脐带间充质干细胞来源外泌体(hucMSC-Exs)抑制了由AOM/DSS诱导的小鼠IBD恶性转化,可能是通过下调小分子泛素样修饰体-1(SUMO1)的表达进而影响相关信号通路的调控,但确切的机制亟待阐明。该文试图通过相关文献综述,阐明hucMSC-Exs作用的结直肠黏膜组织靶细胞及靶细胞对hucMSC-Exs的应答,揭示hucMSC-Exs下调靶细胞中SUMO1表达的关键分子及相关信号通路,深入探讨hucMSC-Exs抑制IBD恶性转化的作用机制,为hucMSC-Exs治疗IBD及其恶性转化提供新的思路。

调节性B细胞在血液系统恶性肿瘤中的研究进展

调节性B细胞(regulatory B cells,Bregs)是近年来发现的一种特殊类型的B细胞,主要通过分泌白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)、转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)、IL-35等细胞因子及与细胞间直接接触而发挥免疫抑制作用。大量研究已表明,Bregs在自身免疫性疾病、感染、移植、肿瘤中具有重要的调节作用。近年来,Bregs及其相关因子在血液肿瘤发生、发展中的作用逐渐受到人们的关注。本文就Bregs的表型、诱导分化因素、免疫调节机制及其在血液系统恶性肿瘤中的研究进展进行综述。

应用脐带血单个核细胞修复小鼠皮肤缺损创伤的实验研究

目的 探讨创面局部应用脐带血单个核细胞(UCB-MNCs)治疗皮肤缺损的效果及相关机制。方法 选取45只C57小鼠建立创面损伤模型后分为3组。实验组:先将0.5 mL的UCB-MNCs(细胞数:1×10^(9) mL^(-1))皮下于8~10 mm均匀注射在每只小鼠伤口周围,再将0.5 mL的UCB-MNCs均匀注射在创面表面,共1次;阳性对照组:创口表面涂抹牛碱性成纤维细胞生长因子外用凝胶(商品名:贝复新);空白对照组:不做处理,伤口自然暴露。各组小鼠造模后第0、3、7及14天,采用Elisa技术检测血清内皮生长因子(VEGF)、转化生长因子-β(TGF-β)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF),HE和MASSON染色观察创面组织病理学情况。结果 所有小鼠均造模成功,与空白对照组和阳性对照组相比,实验组在造模后第3、7、14天血清VEGF、TGF-β和bFGF的表达水平显著升高(P<0.05)。术后第14天HE和MASSON染色结果显示实验组小鼠的创伤已全部愈合,且表皮修复状况良好,可以观察到部分炎症细胞的浸润;阳性对照组的小鼠部分表皮修复状况良好,但仍有一部分创伤没有完全愈合,肉芽组织的生长状况良好;空白对照组未完全愈合的创伤周围瘢痕组织增生明显,且出现明显的炎症细胞浸润以及部分创伤仍未愈合的现象。结论 UCB-MNCs修复小鼠的皮肤损失创伤,是通过促进细胞因子的分泌来促进皮肤缺损创伤的愈合。

亚砷酸钠诱导HaCaT细胞恶性转化实验

目的探讨低浓度亚砷酸钠(NaAsO2)对人永生化但无致癌性的皮肤角质细胞株(HaCaT)的影响。方法 (1)细胞培养:HaCaT细胞株常规培养,隔日换液,4 d传代;(2)细胞毒性实验:MTT法检测细胞毒性,确定最佳染毒剂量;(3)细胞转化实验:HaCaT细胞在含0.05 ppm NaAsO2培养液中连续传代培养40代(约160 d),细胞培养期间,倒置显微镜下观察每代细胞形态的变化并采集图片,MTT法检测细胞增殖能力,半固体琼脂实验检测细胞克隆形成率。结果 NaAsO2处理细胞形态学、增殖能力及非停泊依赖性能力均发生变化,主要表现为多核巨细胞,倍增时间缩短,在半固体琼脂培养基上形成集落及克隆形成率明显增加。结论 NaAsO2处理的细胞发生恶性转化,砷诱导体外细胞恶性转化模型建立成功。

大鼠肝卵圆细胞系WB-F344恶性转化模型的构建及NOD/SCID小鼠成瘤实验

目的通过N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)处理大鼠肝卵圆细胞系WB-F344,使其发生恶性转化,为研究肝癌的发生、发展提供有用的体外模型。方法以MNNG作用于WB-F344细胞系,使之发生恶性转化,并从形态学、遗传学、软琼脂克隆形成、NOD/SCID小鼠成瘤等方面加以验证。结果经MNNG诱导数代的WB-F344细胞出现恶性特征,表现为细胞形态改变,异倍体核型增多,肿瘤标志物表达增高,非锚定克隆能力增强,接种于NOD/SCID小鼠皮下可成瘤。结论肝卵圆细胞系WB-F344在MNNG的作用下可成为肝癌发生的有效体外模型。

人乳头状瘤病毒16型E6E7基因与MCA、TPA协同诱导细胞恶性转化的实验研究

目的探讨人乳头状瘤病毒(HPV)16型E6E7基因与化学致癌物MCA、TPA对Balb/c 3T3细胞恶性转化的协同作用。方法构建含HPV16 E6E7基因的重组质粒,用其转染Balb/c 3T3细胞。采用RT-PCR和Westernblot技术检测HPV16 E6E7基因和蛋白表达;应用细胞转化实验研究由MCA和TPA诱导的细胞恶性转化;并检验转化细胞在软琼脂上形成集落的能力及对SCID小鼠的致瘤能力。结果转染HPV16 E6E7基因的细胞比未转染细胞形成更多的转化灶,转化灶个数增加4～25倍,且实验时间明显缩短;其转化细胞在软琼脂上形成集落的能力及对SCID小鼠的致瘤能力更强。结论 HPV16 E6E7基因与MCA、TPA可协同诱导Balb/c 3T3细胞恶性转化。

真武汤加地龙联合顺铂对恶性胸腔积液模型小鼠血清白细胞介素7、血管内皮生长因子水平的影响

目的观察真武汤加地龙联合顺铂给药对恶性胸腔积液模型小鼠血清白细胞介素7(IL-7)、血管内皮生长因子(VEGF)的影响。方法选取8周龄的雌性C57BL/6小鼠40只,适应性喂养1周后随机均分为空白对照组、模型对照组、顺铂组、真武汤加地龙组、真武汤加地龙+顺铂组,每组8只。除空白对照组外,其余4组的32只均采用LLC小鼠肺癌细胞建立小鼠恶性胸腔积液模型。建模成功3天后,顺铂组予顺铂溶液6 mg/kg腹腔注射,隔3日1次,共3次;真武汤加地龙组予33.78 g/kg的真武汤加地龙溶液灌胃,每日1次,连续10天;真武汤加地龙+顺铂组予顺铂溶液6 mg/kg腹腔注射,隔3日1次,共3次,联合33.78 g/kg的真武汤加地龙溶液灌胃,每日1次,连续10天;空白对照组和模型对照组分别予等容积0.9%氯化钠注射液灌胃,每日1次,连续10天。给药结束后,常规麻醉小鼠,暴露胸腔,用注射器抽取胸水,精确到0.1 mL,记录胸水量。采用酶联免疫吸附法检测各组小鼠血清中IL-7、VEGF含量。结果与空白对照组比较,模型对照组和各药物治疗组胸水量均升高(P<0.05);与模型对照组比较,各药物治疗组胸水量均下降(P<0.05)。真武汤加地龙+顺铂组效果最佳,优于真武汤加地龙组和顺铂组(P<0.05)。与空白对照组比较,模型对照组和各药物治疗组血清VEGF水平均升高(P<0.05);与模型对照组比较,各药物治疗组血清VEGF水平均降低(P<0.05);真武汤加地龙+顺铂组血清VEGF水平低于真武汤加地龙组和顺铂组(P<0.05)。与空白对照组比较,模型对照组和各药物治疗组血清IL-7水平均降低(P<0.05);与模型对照组比较,真武汤加地龙组和真武汤加地龙+顺铂组血清IL-7水平均升高(P<0.05),顺铂组血清IL-7水平降低(P<0.05);真武汤加地龙组和真武汤加地龙+顺铂组血清IL-7水平高于顺铂组(P<0.05);真武汤加地龙组血清IL-7水平高于真武汤加地龙+顺铂组(P<0.05)。结论真武汤加地龙联合顺铂对小鼠恶性胸腔积液疗效良好,可以显著降低小鼠胸水量,这可能与下调血清VEGF、上调IL-7表达有关,且真武汤加地龙可以逆转顺铂引起的IL-7下降。

三氧化二镍诱导人肺成纤维细胞恶性转化的实验研究

在体外用不同浓度的Ni2 O3 多次处理人肺成纤维细胞 (HLF) ,并进行转化细胞的恶性鉴定———刀豆凝集素A(ConA)试验和软琼脂细胞培养试验。发现Ni2 O3 可诱导HLF细胞恶性转化 ,转化细胞生长速度加快 ,排列紊乱 ,失去接触抑制 ,呈交叉重叠生长 ,在实验浓度范围内 ,转化率呈剂量—反应关系。转化细胞可被低浓度ConA凝集 ,并在软琼脂内生长。提示Ni2 O3 有较强的诱导人肺成纤维细胞恶性转化的能力 。

人骨髓间充质干细胞体外长期传代培养及恶性转化趋势实验研究

目的探讨人骨髓间充质干细胞体外长期传代培养、扩增及其生物学特性，观察其恶性转化趋势的可能性。方法采用密度梯度离心差速贴壁法对人骨髓来源的间充质干细胞进行分离纯化，并进行体外长期传代，观察细胞形态及生长方式；鉴定细胞分化能力；相关癌标志P53、Ki67的表达与成瘤性检测。结果经过长期体外培养的人间充质干细胞，至36代时，细胞逐渐老化；成骨分化诱导能力丧失；相关癌标志表达阴性；无成瘤性。结论人骨髓间充质干细胞在体外可以有限传代，无显著恶性转化趋势。

辐射（α粒子）致大鼠气管上皮细胞生物效应及恶性转化作用的实验研究

辐射（α粒子）致大鼠气管上皮细胞生物效应及恶性转化作用的实验研究赵永良，金璀珍，吴德昌（北京军事医学科学院放射医学研究所１００８５０）流行病学资料证实，铀矿工人肺癌高发与高水平氡及子体辐射（α粒子）密切相关。为了探讨α粒子辐射致癌机理，我们以原代大鼠...

胡麻油烟冷凝物致人胚肺二倍体细胞恶性转化的实验研究

目的研究胡麻油烟冷凝物致人胚胎二倍体细胞恶性转化作用.方法以人胚肺二倍体细胞株为靶细胞,建立体外转化系统,以胡麻油烟冷凝物作为受试物染毒人胚肺二倍体细胞,观察细胞转化情况,并对转化细胞进行生物学性状检测和鉴定.结果实验剂量范围内的胡麻油烟冷凝物（25～400μg/mL）能够诱导人胚肺二倍体细胞发生失去接触抑制性、饱和密度增大、血清需求降低,ConA凝集能力增强、锚着依赖性丧失等多种与肿瘤形成相关的表型改变,并且剂量-反应关系明显（r=0.972,P＜0.01）.结论胡麻油烟冷凝物具有诱导人胚肺二倍体细胞转化的作用.

MNNG和佛波酯诱导建立结肠癌的恶性转化细胞模型

目的建立结肠癌的恶性转化细胞模型。方法以1-甲基-3-硝基-1-亚硝基胍(MNNG)为启动剂、佛波酯(PMA)为促癌剂,对永生化的正常人结肠上皮细胞(NCM460细胞)进行多代诱导处理。采用MTT实验、细胞克隆形成实验和细胞划痕实验鉴定NCM460细胞恶性转化的倾向性和恶性生物学特征,采用Western blot检测神经钙黏附蛋白(N-cadherin)、转化生长因子β1(TGF-β1)和表皮生长因子受体(EGFR)的蛋白表达水平。结果正常NCM460细胞形态为梭形,排列有序,呈单层生长;诱导后的第30代NCM460细胞形态发生显著变化,大小不一,排列紊乱,呈团块状生长。正常NCM460细胞、第17代NCM460细胞、第30代NCM460细胞的增殖能力依次升高,克隆形成数量依次增多,48 h迁移距离和迁移率依次增加或升高(P<0.05)。第30代NCM460细胞中N-cadherin、EGFR、TGF-β1的蛋白表达水平高于正常NCM460细胞(P<0.05)。结论经过MNNG和PMA连续多代诱导处理后,NCM460细胞的生物学功能(增殖、克隆形成和迁移能力)发生明显改变,具备恶性细胞的生物学特征。该模型可用于结肠癌的发病机制和治疗方法研究。

3~H—TdR掺入法测头颈恶性肿瘤患者外周血淋巴细胞转化率的实验研究

本文用 PHA 诱导的3~H—TdR 掺入法测55例头颈部恶性肿瘤患者外周血淋巴细胞转化率。55例患者分三组:初发疗前组、初发疗后组和复发组,同时以22例健康人为对照。结果表明:(1)全体患者及各组患者淋转均明显低于正常人;(2)复发组患者淋转低于初发组;(3)初发疗前组和初发疗后组间,两者淋转的差异无显著性。

跨膜蛋白Lgr5作为胃肠道恶性肿瘤干细胞分子表面标记物的研究进展

肿瘤干细胞具有持续自我更新和多向分化的特性,是导致肿瘤复发和耐药的主要原因。能否准确识别并靶向摧毁肿瘤干细胞,已经成为肿瘤学研究的新方向和热点问题。跨膜蛋白Lgr5广泛表达于消化道组织,具有极强的干细胞活性,并且在消化道恶性肿瘤细胞膜表面特异性高表达。深入了解Lgr5蛋白的分子特点有助于提高消化道肿瘤干细胞分选效率,对进一步研究消化道肿瘤的发生发展机制、探索新的治疗方法、提高总体预后具有重要意义。本文将以Lgr5蛋白结构特点为基础,结合信号转导通路和不同胃肠道肿瘤生物学活性特点,总结追踪近年来Lgr5蛋白作为干细胞标记物在胃肠道肿瘤基础领域的最新进展,为下一步研究提供理论储备。

α粒子照射诱发BEP2D细胞恶性转化模型的建立

目的:建立α粒子照射诱发BEP2D细胞恶性转化模型。方法:α粒子照射永生化BEP2D细胞,通过细胞传代培养,最终经裸鼠成瘤实验,病理切片鉴定,瘤组织培养获取肿瘤细胞系,角蛋白多克隆抗体免疫组化鉴定细胞上皮来源。结果:(1)α粒子照射BEP2D细胞后,培养35代,54代细胞接种裸鼠成瘤,照后20代BEP2D细胞及未照射永生化BEP2D细胞接种裸鼠不成瘤;(2)瘤体病理切片鉴定为鳞状上皮癌;(3)瘤组织培养得到肿瘤细胞系2个,角蛋白多抗免疫组化实验,细胞胞浆强阳性,证实为上皮来源。结论:1.5Gyα粒子照射诱发BEP2D细胞恶性转化,成功建立α粒子照射诱发肺癌的细胞研究模型。

在BEP2D细胞恶性转化过程中TGF-β1对Smad7表达的调节

背景与目的:细胞逃避转化生长因子-β(TGF-β)诱导的对细胞生长、增殖的抑制是许多肿瘤发生的一个重要机制。Smad7是TGF-β信号转导通路的抑制型Smads,它可阻断TGF-β信号在胞浆内的传导,其紊乱是TGF-β信号转导通路紊乱的机制之一。本研究旨在分析在细胞恶性转化过程中,Smad7基因表达是否发生紊乱,TGF-β1对Smad7基因的调控功能有无发生变化,以探索细胞发生恶性转化的原因。方法:培养BEP2D细胞及BERP35T-2细胞,于收获前60min和90min加入不同剂量的TGF-β1,提取细胞总RNA,分别以未加TGF-β1的细胞组作为对照,用Northernblot杂交比较两组细胞Smad7mRNA表达的差异以及细胞对TGF-β1细胞因子刺激的反应性。同时提取BEP2D及BERP35T-2细胞蛋白,用Westernblot方法比较两组细胞内源性TGF-β1表达的差异。结果:Smad7mRNA表达水平恶性转化细胞高于永生化细胞;加了TGF-β1细胞因子后,BEP2D细胞Smad7mRNA表达增高,BERP35T-2细胞表达水平改变不明显。而内源性TGF-β1的表达水平,BERP35T-2细胞稍高于BEP2D细胞。结论:Smad7在辐射致肺癌细胞系中的过表达及对TGF-β1应答的降低可能是辐射诱发肺癌发生的机制之一。

贫铀诱发人支气管上皮细胞恶性转化

背景与目的:实验研究和流行病学调查结果表明,铀可广泛地影响人体健康,但其远期效应,特别是致癌性,还缺乏明确的结论。本文模拟人吸入贫铀(depleteduranium,DU)气溶胶的情形,研究难溶性贫铀诱发人支气管上皮细胞恶性转化及肺癌相关基因表达谱。方法:用难溶性贫铀氧化物(dUO2)作用腺病毒-12/SV40病毒永生化的人支气管上皮细胞(BEAS-2B),通过观察不同代龄细胞的倍增时间、血清抗性、半固体琼脂克隆形成率及裸鼠成瘤性,鉴定细胞的恶性转化特性;用213个肺癌相关基因的芯片对贫铀诱发的转化BEAS-2B细胞的基因表达谱进行检测。结果:贫铀作用后的第5代BEAS-2B细胞倍增时间明显缩短,血清抗性显著增强;第10代细胞具有锚着独立性生长特性(半固体琼脂克隆形成);第15代裸鼠体内成瘤。二甲亚砜(DMSO)对贫铀诱发的BEAS-2B细胞恶性转化有明显保护效果。213个肺癌相关基因的芯片检测结果表明,转化细胞中有70多个基因的表达水平发生明显改变,其中10余个基因表达水平明显下降。结论:贫铀在体外具有致癌性。