反义封闭NGAL基因表达对SHEEC食管癌细胞微丝骨架的影响

为了研究反义封闭NGAL基因表达对SHEEC食管癌细胞微丝骨架以及肿瘤细胞生物学行为的影响 ,以不同长度NGAL基因片段反义表达载体和硫代修饰反义寡核苷酸单链片段转染SHEEC食管癌细胞 ,通过G4 18筛选 ,建立一系列旨在封闭SHEEC食管癌细胞NGAL基因表达的亚细胞克隆 .在细胞内F 肌动蛋白 (F actin)及DNA荧光双标记基础上 ,通过流式细胞术、激光共聚焦显微镜扫描术等技术手段检测封闭反义NGAL基因表达后 ,SHEEC食管癌细胞中F actin和DNA含量、F actin形态结构以及肿瘤细胞生物学行为的变化特征 .结果显示 ,反义封闭NGAL基因表达后 ,SHEEC食管癌细胞F actin的含量明显降低 ,与永生化食管上皮细胞SHEE相近 ,但细胞分裂增殖指数未见明显变化 .表明反义封闭NGAL基因表达对SHEEC食管癌细胞的微丝骨架有明显影响 ,而对SHEEC食管癌细胞的分裂增殖影响不明显 .激光共聚焦显微镜扫描观测显示 ,反义封闭NGAL基因表达可使SHEEC食管癌细胞F actin分布均匀 ,F actin小体减少 ,细胞间连接重新建立 ,结构较紧密 ,主要形态结构特征与SHEE细胞趋于一致 .提示反义封闭NGAL基因表达可对SHEEC食管癌细胞的微丝骨架F actin产生明显影响 ,推测癌细胞的微丝骨架F

Photofrin-Diomed 630-PDT对人永生化食管上皮细胞系SHEE及其癌变细胞系SHEEC的抑制研究

目的探讨肿瘤细胞对光动力的敏感度,同时为体外细胞培养的光动力实验研究选择最佳光剂量和最佳光密度提供实验依据。方法将人永生化食管上皮细胞系SHEE及其癌变细胞系SHEEC分别随机分成21组,接种24h贴壁后,在30μg/ml的光敏剂photofrin-Ⅱ溶液中孵育150min后,在15min内应用Diomed-630型激光仪给予25mW/cm2、50mW/cm2、100mW/cm23个功率密度分别照射10,20,30,50,100,150,200s,然后继续培养24h,应用缩胆囊胆素八肽(CCK-8)法检测两个细胞系的存活率。结果在photofrin-Ⅱ30μg/ml浓度条件下,相同功率密度的光动力疗法(PDT)对细胞系SHEE和SHEEC的抑制率无显著性差异;在photofrin-Ⅱ30μg/ml浓度条件下,随着光剂量的增加PDT对细胞系SHEE和SHEEC的抑制率呈增加趋势,达到2.5～3.0J/cm2后进入平台期。结论人永生化食管上皮细胞系SHEE及其癌变细胞系SHEEC对光动力的敏感度无显著性差异,提示肿瘤光动力治疗的靶向作用可能与肿瘤细胞对激光的敏感性无关。

人永生化食管上皮细胞系SHEE及其癌变细胞系SHEEC的Photofrin-Diomed630-PDT损伤机制

目的探讨单态氧与氧化物在Photofrin-Diomed 630-PDT中的细胞毒作用机制。方法将人永生化食管上皮细胞系SHEE及其癌变细胞系SHEEC分别随机分成20组,接种24 h贴壁后,更换M199完全培养液为不含血清的30μg/mL的Photofrin-Ⅱ溶液100μL,孵育150 min后,即时干预组迅速更换不同浓度叠氮化钠(NaN3)和超氧化物歧化酶(SOD)的M199液,在15 min内进行光照处理,光照处理后更换M199完全培养液,继续培养24 h;持续干预组光照处理后不再更换M199完全培养液,直至24 h检测,然后应用CCK-8法检测两个细胞系各组的存活率。结果 NaN3对细胞系SHEE和SHEEC的Photofrin-Diomed 630-PDT即时干预随NaN3浓度的增加其拮抗作用也增强;NaN3对细胞系SHEE和SHEEC的Photofrin-Diomed 630-PDT持续干预表现为细胞毒副作用;SOD对细胞系SHEE和SHEEC的Photofrin-Diomed 630-PDT干预无拮抗作用,仅表现细胞毒作用。结论 NaN3对人永生化食管上皮细胞系SHEE和SHEEC的Photofrin-Diomed 630-PDT的即时干预,提示肿瘤PDT细胞损伤的机制可能主要为单态氧的瞬间杀伤作用,而与其他氧化剂关系不明显。

光动力学疗法联合化疗药物对SHEEC细胞系抑制作用的研究

目的:通过光动力联合化疗药物对SHEEC细胞系抑制作用的研究,试图发现有效的联合治疗方案。方法:采用CCK-8检测单一方案(单用顺铂、5-FU、光动力)及联合方案化(先顺铂后光动力、先光动力后顺铂、先5-FU后光动力、先光动力后5-FU)对SHEEC细胞系的抑制率。结果:不同方案均有一定的抑制作用,其抑制率分别为:顺铂(23.61±0.93)%、5-FU(23.44±3.12)%、光动力(22.52±2.83)%、先顺铂后光动力(34.66±2.24)%、先光动力后顺铂(33.74±2.84)%、先5-FU后光动力(33.26±2.74)%、先光动力后5-FU(32.48±2.59)%。结论:单一方案均有一定的抑制作用。联合方案均较单一方案抑制作用强,有统计学差异。联合方案间的抑制作用无统计学差异。

冬凌草甲素对人类食管癌SHEEC细胞基因表达的影响及其靶基因筛选

目的检测冬凌草甲素（ORI）对人类食管癌SHEEC细胞基因表达的影响并筛选与细胞凋亡密切相关的靶基因。方法应用基因芯片技术检测32μg／ml ORI作用SHEEC细胞1h及8h前后的基因表达差异，分析筛选差异表达基因，并用荧光定量PCR进行验证。结果32恤g／ml ORI作用SHEEC细胞1h及8h后，表达上调≥2倍及表达下调≥2倍的基因共1011个，其中，1h有280个，8h有731个。在1011个差异表达基因中，最后筛选出17个重复检测表达上调或表达下调幅度大且与细胞凋亡、信号转导和转录调控相关的基因。荧光定量PCR对17个差异表达基因进行验证，其中12个基因具有统计学意义。结论在12个有统计学意义的差异表达基因中，可能有ORI经线粒体途径诱导肿瘤细胞凋亡的靶基因。

食管癌细胞系对光敏剂photofrin-Ⅱ的吸收和排出研究

背景与目的:肿瘤高选择性摄入光敏剂的原因,即靶向原理至今仍不清楚。本研究探讨肿瘤细胞对光敏剂的亲和力。方法:应用紫外分光光度仪测定各种细胞培养液的吸收光谱;应用荧光分光光度仪对光敏剂photofrin-Ⅱ进行荧光光谱分析,同时测定人永生化食管上皮细胞系SHEE及其癌变细胞系SHEEC在相同浓度和时间点对photofrin-Ⅱ的吸收和排泄。结果:photofrin-Ⅱ的最大荧光激发波长为(395.0±0.5)nm,最大荧光发射波长为(634.1±0.5)nm;光敏剂photofrin-Ⅱ所需要的630nm激发波长的光,可完全通过各种细胞培养液。相同浓度和时间下,SHEE细胞和SHEEC细胞对photofrin-Ⅱ的吸收和排泄差异无统计学意义(P>0.05);SHEE细胞和SHEEC细胞对光敏剂photofrin-Ⅱ的吸收量均随其浓度的增加而增加,30μg/mL后进入平台期;SHEE细胞和SHEEC细胞对光敏剂photofrin-Ⅱ的吸收量随着孵育时间的延长而增高,150min后进入平台期;photofrin-Ⅱ在SHEE细胞和SHEEC细胞内可保持较高水平15～30min,然后迅速排出。结论:光敏剂在肿瘤组织中浓集现象可能与肿瘤细胞亲和力无关系。

EZH2蛋白在食管上皮永生化细胞系和恶性转化细胞系中的表达

目的研究EZH2蛋白在食管上皮永生化细胞系(SHEE)和恶性转化细胞系(SHEEC)中的表达。方法采用免疫细胞化学染色、免疫印迹分析和流式细胞术检测两种细胞系EZH2蛋白的表达。结果两种细胞EZH2蛋白染色均呈阳性,阳性反应定位于细胞核,部分细胞胞浆也有阳性着色。免疫印迹分析表明SHEEC细胞和SHEE细胞的总蛋白、核蛋白在分子质量约90ku的位置均出现特异性印迹条带。SHEE细胞中EZH2蛋白的表达强于SHEEC细胞(P<0.05)。流式细胞术显示EZH2蛋白在两种细胞中均有表达,两者的平均荧光强度无明显差别;阳性细胞率均较高,其中SHEE细胞阳性率高于SHEEC细胞。结论EZH2蛋白在SHEE细胞和SHEEC细胞中高表达可能参与了它们的恶性改变;而EZH2蛋白在两种细胞系中的差异表达可能与细胞的分化程度及来源于胚胎食管上皮细胞相关。

RNA干扰人永生化食管上皮恶变细胞中核干细胞因子对PI3K/AKT表达的影响

目的:研究抑制人永生化食管上皮恶变细胞(SHEEC)中核干细胞因子(NS)对PI3K/AKT信号转导通路中相关分子表达的影响。方法:将干扰试剂(NS-RNAi)转染至SHEEC中以抑制NS的表达,以SHEEC组、阴性对照组(NC组)和MOCK组为对照,采用RT-PCR和Western blot方法检测干扰后PI3K/AKT通路中相关因子mRNA和蛋白表达水平的变化。结果:NS-RNAi成功转染至SHEEC中。抑制SHEEC中NS的表达后PI3K和AKT mRNA的相对表达量为(0.460±0.207)和(0.492±0.233),与SHEEC组、NC组和MOCK组比较,差异有统计学意义(P均<0.05);干扰NS表达后PI3K和AKT蛋白的相对表达量为(0.353±0.361)和(0.312±0.068),与SHEEC组、NC组和MOCK组比较,差异有统计学意义(P均<0.05)。结论:抑制SHEEC中NS表达后PI3K/AKT信号通路中相关因子的表达均明显下降,PI3K/AKT信号通路可能是NS发挥作用的一种非依赖P53作用的信号途径。