肾复康对大鼠实验性慢性肾炎的作用

为寻求可消除肾性蛋白尿及维护肾功能的有效制剂 ,观察了广州中医药大学第一附属医院的临床经验方肾复康 (由雷公藤、黄芪、三七、益母草等组成 )对大鼠实验性慢性肾炎的药理作用。结果表明 :高( 10 .8g kg )、中 ( 5 .4g kg )、低 ( 2 .7g kg )剂量肾复康治疗组对阿霉素肾炎和小牛血清白蛋白性肾炎引起的尿蛋白排出增加 ,血清总蛋白 ( ρ总昼白)、白蛋白 ( ρ白昼白)、ρ白昼白 ρ总昼白 的降低 ,血清胆固醇、肌酐、尿素氮的升高 ,均有明显的抑制作用。

朱砂对中枢神经系统某些药理作用的研究及其毒性观察

对朱砂在中枢神经系统的某些药理作用进行了研究，结果表明朱砂对中枢神经系统有一定的抑制作用，对正常小鼠自发活动基本无影响，而对注射苯丙胺后处于兴奋状态的小鼠有一定对抗的趋势，且有明显促进水合氯醛催眠作用及对抗戊四氮所致惊厥的作用，但对戊巴比妥钠睡眠时间及士的宁所致惊厥未见有明显影响。朱砂对小鼠无明显急性毒性，大鼠灌胃３ｗｋ，肝和肾有一定程度的病理学改变。

二烯丙基三硫通过Caspase-3途径诱导人胃癌MGC803细胞凋亡

背景与目的:大蒜及其烯丙基硫化物具有抗肿瘤作用,但其具体的作用机制尚不十分清楚。本研究探讨二烯丙基三硫(diallyltrisulfide,DATS)诱导人胃癌MGC803细胞凋亡及凋亡过程中Caspase-3的变化及其意义。方法:采用荧光显微镜和电子显微镜观察以及流式细胞术和Westernblot检测等方法,观察DATS诱导MGC803细胞凋亡的作用及对活化的Caspase-3的影响。结果:在荧光显微镜及电子显微镜下,DATS作用的胃癌细胞出现了典型的凋亡形态学改变;流式细胞术检测出现明显的亚G1峰;12mg/L的DATS处理MGC803细胞0、4、8、12、24h后,活化的Caspase-3的表达率分别为1.9%、3.0%、7.3%、14.4%、27.6%,提示DATS呈时间依赖性促进活化的Caspase-3的表达;用特异的Caspase-3抑制剂预处理细胞后,再用12mg/LDATS处理细胞24h,与单用DATS组相比,凋亡率从23.0%降低到5.1%(P<0.01),提示Caspase-3的抑制剂能抑制DATS诱导的胃癌MGC803细胞凋亡。Westernblot显示酶原形式的Caspase-3被水解活化。结论:DATS诱导人胃癌MGC803细胞凋亡可能与活化Caspase-3有关。

反义STAT3对肿瘤细胞增殖抑制和诱导凋亡的作用

背景与目的:研究表明STAT3蛋白在多种肿瘤组织或细胞中高表达,STAT3蛋白可能参与了肿瘤的形成和发生。本文拟研究STAT3蛋白在鼠黑色素瘤细胞B16、人肝癌细胞SMMC-7721、人肝癌细胞HepG-2、人肺癌细胞A549、人宫颈癌HeLa细胞株中表达和活化情况,研究反义STAT3寡核苷酸对B16细胞的增殖抑制和促凋亡作用,为进一步反义药物设计及应用于辐射领域作前期研究。方法:利用Westernblot检测所选几种肿瘤细胞的STAT3蛋白表达和磷酸化情况、反义干涉前后B16细胞中STAT3蛋白表达和磷酸化活化的变化情况,MTT法检测细胞增殖变化,利用Hoechst33258染色对细胞凋亡作形态学上的观察,用AnnexinⅤ/PI复染结合流式细胞仪检测细胞早期凋亡。结果:所研究的几种肿瘤细胞中均可检测到STAT3蛋白的高表达和磷酸化;反义STAT3转染后,B16细胞中STAT3蛋白的表达量及磷酸化水平均有下降;转染后48h,在0到200nmol/L范围内,反义核酸浓度越高,对B16细胞的增殖抑制效应越强,但是并不能够完全抑制肿瘤细胞的增殖(P<0.01)。寡核苷酸浓度超过250nmol/L时,正义对照也表现出一定的增殖抑制作用(P<0.05);转染后不同时间内检测,结果表明转染后24h反义核酸即开始表现出一定的增殖抑制效应,48h起表现出明显的抑制效应;反义转染后,检测各组细胞早期凋亡率:对照组早期凋亡率为5.52%,反义400、800、2000nmol/L组早期凋亡率分别为8.22%、9.99%,16.97%,正义对照400、800、2000nmol/L组早期凋亡率分别为5.87%、5.36%、13.31%。统计分析表明反义寡核苷酸与B16细胞作用后能够促进细胞的早期凋亡(P<0.01),正义低浓度转染组(400、800nmol/L组)与对照组无明显差别(P>0.05),而对照组与正义2000nmol/L组相比,细胞的早期凋亡率也有统计学差异(P<0.01)。结论:B16、SMMC-7721、HepG-2、A549、HeLa等恶性肿瘤细胞株中STAT3蛋白高表达并且可检测到磷酸化水平的增高;反义转染后B16细胞中STAT3蛋白的表达和磷酸化水平降低,细胞增殖受到明显抑制,细胞的凋亡增加,表明STAT3可能成为肿瘤治疗新的分子靶位。

二烯丙基二硫作用于HL-60细胞后凋亡相关基因的差异表达

背景与目的:二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)对多种肿瘤细胞有促凋亡作用,白血病是儿童最常见的恶性肿瘤,近期研究提示DADS能够在体外诱导人白血病细胞发生凋亡,但其具体作用机制尚不清楚。本实验旨在研究DADS诱导人白血病细胞HL-60凋亡的生物学效应,并探讨其分子机制。方法:运用DNA含量分析、AnnexinⅤ/PI双标记流式细胞仪、DNA琼脂糖凝胶电泳以及透射电子显微镜形态学观察等方法来证实细胞凋亡。通过基因芯片检测60μmol/L DADS作用于HL-60细胞4h后凋亡相关基因的表达谱,采用RT-PCR技术验证上调基因Fas-L和下调基因Bag-1。结果:15、30、60和120μmol/L DADS作用于HL-60细胞24h后,DNA含量分析出现了明显的亚二倍体峰;60μmol/LDADS作用4、8、12、24h后,Annexin Ⅴ/PI双标流式细胞仪检测表明早期凋亡细胞显著增加。60μmol/LDADS作用24h后,在DNA琼脂糖凝胶上可见特征性的梯形条带。电子显微镜观察到细胞体积缩小,核浓缩和凋亡小体形成等典型的形态学改变。通过基因芯片检测发现,60μmol/L DADS作用4h后有8个凋亡相关基因表达差异显著,选择其中Fas-L和Bag-1两个基因运用RT-PCR技术进行验证,其结果与基因芯片结果一致。结论:DADS能够诱导人白血病细胞HL-60凋亡,这可能是多个基因和多条信号转导通路共同作用的结果。

怀牛膝多糖抗凝血作用实验研究

为探索怀牛膝的活血机制 ,实验初步研究了怀牛膝多糖的抗凝血作用。发现怀牛膝多糖 ABP能延长小鼠凝血时间(CT)、大鼠血浆凝血酶原时间 (PT)、白陶土部分凝血活酶时间 (KPTT)。提示怀牛膝活血的功效可能与怀牛膝多糖 ABP的抗凝血作用有关。

血清药理法研究补肾化瘀解毒方对肺癌耐药细胞内药物浓度的作用

为了探讨补肾化瘀解毒方对肺癌耐药细胞内Rh123浓度的作用,选择人肺腺癌A549/DDP耐药细胞株为模型,采用荷瘤动物血清药理及流式细胞法,并与正常动物药物血清为对照,结果补肾化瘀解毒方荷瘤动物药物血清能显著提高肺癌A549/DDP耐药细胞内Rh123浓度(P<0.05),与正常动物药物血清无显著性差异(P>0.05),表明补肾化瘀解毒方药物血清能提高肺癌耐药细胞内药物浓度作用。

葛根汤、桂枝汤对家兔颈椎间盘组织白介素1β、诱导型一氧化氮合酶mRNA表达的调节作用

目的:观察葛根汤、桂枝汤对颈椎间盘组织白介素1β(IL-1β)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA表达的调节作用。方法:选择8月龄雄性新西兰白兔36只,随机平均分为正常对照组、风寒湿刺激组、低头位组、风寒湿加低头位组、葛根汤组和桂枝汤组。通过建立风寒湿痹证型、低头位、风寒湿加低头位颈椎间盘退变家兔模型,采用RT-PCR技术检测颈椎间盘细胞因子IL-1β、iNOS mRNA的表达情况。结果:各个模型组与对照组比较,IL-1β、iNOS mRNA的表达上调(P<0.01),葛根汤、桂枝汤组与风寒湿刺激组比较,IL-1β、iNOS mRNA表达均下调,有显著性差异(P<0.05或P<0.01)。结论:椎间盘退变中IL-1β、iNOS mRNA的表达上调,葛根汤下调IL-1β、iNOS mRNA表达,桂枝汤调节作用低于葛根汤。

丹参、心得安对门静脉高压症大鼠门静脉压力和胃肠激素的影响

目的:观察丹参、心得安对门脉高压症大鼠门静脉压力、胃肠激素的影响。方法:采用CCl4加酒精饮料制作大鼠门脉高压模型,造模4周后分别给大鼠服用丹参、心得安,造模结束后用Medlab-Ug4Cs生物信号采集处理系统检测正常组、模型组、丹参治疗组、心得安治疗组大鼠门静脉压力。处死大鼠后颈动脉取血,用放免法检测4组大鼠血浆胃肠激素(胃动素、胃泌素、胰高血糖素)的含量。结果:模型组大鼠门静脉压力较正常组明显升高(P<0.01),丹参治疗组、心得安治疗组大鼠门脉压力较模型组明显下降(P<0.01),丹参治疗组大鼠门脉压力与心得安治疗组比较差异无显著性意义(P>0.05)。心得安组大鼠与模型组比较胃动素含量无明显改善(P>0.05),而胃泌素、胰高血糖素明显下降(P<0.05)。丹参治疗组大鼠胃泌素、胃动素、胰高血糖素含量与模型组比较明显下降(P<0.01或P<0.05),与心得安治疗组比较,胃动素、胰高血糖素指标下降明显(P<0.05)。结论:丹参能有效降低门脉高压症大鼠门静脉压力,调节胃肠激素,疗效优于心得安治疗组。其作用机制可能与其良好的抗肝纤维化、阻止肝硬化形成、调节胃肠激素水平、改善肝功能等作用有关。

枸杞对大鼠脾脏细胞凋亡的调节

本文以氢化可的松诱导大鼠脾脏细胞凋亡为模型,研究中药枸杞对脾脏细胞凋亡的调节作用。结果表明枸杞可抑制氢化可的松诱导的大鼠脾脏细胞凋亡,其抑制作用具有剂量依赖性。

幽门螺杆菌vacA cagA基因亚型与抗生素耐药的关系

目的研究幽门螺杆菌(H.pylori)cagA vacA基因亚型及其与抗生素耐药的关系方法用琼脂稀释法测定50例 H.pylori临床分离株对克拉霉素,阿莫西林,替硝唑,甲硝唑的最低抑菌浓度(MIC),并计算MIC_(50)和MIC_(90)值。用多重PCR鉴定H.pylori菌株的vacA(sla,slb,s2,ml,m2)及cagA的型别.结果克拉霉素,阿莫西林,替硝唑,甲硝唑对H.pylori的MIC_(50)和MIC_(90)分别为:<0.016mg·L^(-1);0.016mg·L^(-1),0.047mg·L^(-1);16.000mg·L^(-1),52.000mg·L^(-1);25.140mg·L^(-1),76.800mg·L^(-1).H.pylori菌株对克拉霉素.阿莫西林,替硝唑,甲硝唑的耐药率分别为0％,0％,20％和38％.在对替硝唑敏感的H.pylori菌株中,vacA sla,slb和s2型分别占50.0％,42.5％和7.5％;vacA m1和m2型占60.0％和40.0％;vacA s1a/ml,s1b/ml,s1a/m2,s1b/m2和s2/m2型分别占32.5％,27.5％,17.5％,15.0％和12.5％;cagA^1和cagA型为87.5％和12.5％.在对替硝唑敏感的H.pylori菌株中,vacA s1a,s1b和s2型分别占50.0％,40.0％和10.0％;vacA m1和m2型占40.0％和60.0％;vacA s1a/ml, s1b/ml,s1a/m2,s1b/m2,和s2/m2型分别占20.0％,20.0％,30.0％,和10.0％;cagA和cagA^-型为80.0％和20.0％.结论 H.pylori菌株对中硝唑的耐药率明显高于H.pylori对克拉霉素,阿莫西林,替硝唑的耐药率,不同cagA vacA基因亚型的H.pylori菌株对替硝唑的耐药率无显著差异.

PI3K p55PIK调节亚单位N末端抑制胃癌细胞株MGC803生长及其机制

背景与目的:p55PIK是磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)的调节亚单位之一。p55PIK依赖于其N末端独特的24个氨基酸结合Rb,这24个氨基酸的表达能抑制细胞周期的进程。本研究目的在于观察p55PIKN末端24个氨基酸的表达对胃癌细胞增殖和生长的影响,并初步探讨其可能的作用机制。方法:通过Lipofectamine介导,用pEGFP-N24表达质粒转染MGC803细胞,用Westernblot鉴定融合蛋白GFP-N24在MGC803细胞中的瞬时表达;MTT法检测转染细胞的生长情况;克隆形成实验观察N24p55PIK过表达对细胞克隆形成能力的影响;动物实验观察表达N24p55PIK的细胞在裸鼠体内的成瘤能力;Westernblot法分析N24p55PIK表达对细胞周期蛋白CyclinD1表达的影响。结果:N24p55PIK在MGC803细胞中能够有效表达,但其表达量明显低于对照组。与对照组细胞相比,N24p55PIK的表达使细胞生长速度减慢,细胞倍增时间明显延长;表达N24p55PIK的细胞在克隆形成的数量上与对照组相比差异无显著性,但在克隆体积上明显小于对照组。表达N24p55PIK的MGC803细胞在裸鼠中的成瘤能力有所下降,其所形成肿瘤的重量和体积分别为(0.398±0.244)g和(408±268)mm3,而空载体对照组分别为(0.763±0.193)g和(829±271)mm3,两组相比差异有显著性(P<0.05)。N24p55PIK在MGC803细胞中的表达抑制CyclinD1的表达。结论:p55PIK调节亚单位N末端24个氨基酸的表达在体外和体内均能抑制肿瘤细胞的生长;减少CyclinD1的表达可能是其发挥作用的主要机制;来源于PI3K调节亚单位p55PIK的N24肽在肿瘤的治疗上可能具有潜在的应用前景。

太白楤木抗肝纤维化的实验研究

目的:探讨太白楤木对成纤维细胞增殖及超微结构的影响,研究太白楤木抗肝纤维化的作用机制。方法:采用体外培养的NIH3T3(小鼠胚胎成纤维细胞)作为肝星状细胞(HSC)的替代模型,常规培养,秋水仙碱、齐墩果酸及太白楤木中药血清作用于细胞,用MTT(四唑盐比色)法检测各组药物血清对NIH3T3细胞增殖的影响;用放射免疫法测定培养上清液中透明质酸(HA)的生成;电镜下观察药物血清对NIH3T3细胞超微结构的影响。结果:太白楤木、齐墩果酸、秋水仙碱血清组细胞均可抑制细胞增殖(P<0.05);显著抑制HA的合成,降低NIH3T3细胞培养上清中HA水平,与对照组比较差异有显著性意义(P<0.01),而3组之间差异无显著性意义(P>0.05)。结论:太白楤木中药血清可显著抑制NIH3T3细胞增殖和细胞外HA的合成,并可通过诱导HSC细胞凋亡来达到减少细胞数目、促进纤维化的逆转,从而达到抗肝纤维化的作用。

姜黄素对培养的人胚胎视网膜色素上皮细胞增殖活性的影响

目的:研究姜黄素(curcumin,CUR)对培养人胚胎视网膜色素上皮(human fetal retinal pigment epithelium,hfRPE)细胞增殖的影响.方法:用不同浓度CUR(2.5,5,10,20μg/ml)处理传代培养的hfRPF细胞24～48 h,采用MTT法和流式细胞术观察药物对hfRPE细胞增殖和细胞周期的影响.结果:CUR可明显抑制hfRPE细胞增殖,24、48 h的半数抑制浓度(IC50)分别为14.27μg/ml和12.7μg/ml;流式细胞仪分析表明姜黄素将hfRPE细胞阻滞在G2/M期.结论:在一定浓度范围内,姜黄素通过改变hfRPE细胞的周期分布来抑制其增殖.

枳黄方对酒精性肝损伤大鼠肝胃ADH_1 mRNA的影响

目的:探讨枳黄方对大鼠酒精性肝损伤的防护作用及其机理。方法:将30只SD大鼠随机分为3组:空白对照组、酒精攻击组、枳黄方防护组,每组10只。10天后,处死大鼠,取大鼠肝脏进行HE染色观察肝病理变化,RT-PCR法测定肝、胃组织ADH1mRNA的变化。结果:枳黄方能缩短大鼠醉酒时间(P<0.05),枳黄方防护组肝、胃病理表现较模型组明显改善,其肝、胃ADH1mRNA表达量高于模型组(P<0.01)。结论:枳黄方对大鼠酒精性肝损伤有较明显的防护作用,这可能与其能提高肝、胃ADH1mRNA的表达有关。

补肾益智方对阿尔茨海默病大鼠模型脑内胆碱能神经系统的保护作用

为探讨自制方补肾益智方 (由蛇床子、枸杞子、女贞子、人参、制首乌等组成 )治疗阿尔茨海默病(Alzheimerdisease ,AD)的可能神经生物学机制 ,应用乙酰胆碱酯酶组织化学染色方法 ,研究了该方对D -半乳糖合并鹅膏蕈氨酸损毁大脑Meynert基底核的实验性阿尔茨海默病大鼠模型脑内胆碱能神经系统的保护作用 ,结果显示 :补肾益智方灌胃组大鼠脑内广泛区域的乙酰胆碱酯酶阳性神经纤维密度较模型对照组增加 (P <0 .0 5或P <0 .0 1) ,提示该方对AD模型脑内胆碱能神经元具有一定的保护作用。

清肝活血方及其拆方对脂多糖介导库普弗细胞活化ERK表达调控的研究

目的:探讨清肝活血方及其拆方对脂多糖介导库普弗细胞(Kupffercell,KC)活化表达细胞外受体活性激酶(ERK)的影响。方法:原代分离KC,筛选LPS(脂多糖)合适剂量和作用时间;制备清肝活血方及其拆方含药血清,以ELISA、Western方法检测该方及其拆方含药血清对KC表达肿瘤坏死因子α、细胞外受体活性激酶1/2(ERK1/2)和激活蛋白1(AP-1)的影响。结果:选择LPS合适剂量为100μg/L,合适时间为2小时。清肝方通过抑制磷酸化的ERK(P-ERK)来调节核因子AP-1的表达。活血方可以下调P-ERK,抑制效应产物TNF-α的表达。清肝活血方调控磷酸化P-ERK,抑制核因子AP-1的表达。结论:清肝活血方及其拆方含药血清通过影响ERK信号通路,抑制TNF-α的产生,从而起到保护肝细胞的作用。

正肝方对黄曲霉毒素B_1诱发的肝癌前病变大鼠肝功能的影响

目的:观察正肝方对黄曲霉毒素(AFB1)诱发的肝癌前病变大鼠肝功能的影响。方法:Wistar大鼠100只随机分为4组:模型对照组30只,正肝方小剂量预防组30只、正肝方大剂量预防组30只、正常大鼠对照组10只。除正常对照组外,先后用AFB1和2-乙酰氨基芴(2-AAF)处理各组大鼠造模。正肝方大、小剂量预防组在造模期间,将不同浓度正肝方水剂(0.6g/ml,0.3g/ml)分别灌喂大鼠;模型对照组用无菌蒸馏水灌喂大鼠。8周后处死大鼠、采血,肝组织取材。采用酶动力学法测定大鼠血清ALT、AST、ALP、GGT活性,亚硝酸钠氧化法测定血清TBil,溴甲酚绿比色法测定Alb。结果:AFB1可导致大鼠血清ALT、AST、GGT、TBil水平显著升高,Alb水平下降。正肝方能有效降低AFB1导致的大鼠血清高ALT、AST、ALP、GGT、TBil水平。结论:AFB1可导致大鼠严重肝损伤,具有很强的肝毒性。正肝方具有抗AFB1导致的肝损伤,保护肝功能的作用。

加味桃核承气汤对四氯化碳所致肝纤维化模型大鼠TIMP-1蛋白表达的影响

目的:观察加味桃核承气汤对四氯化碳(CCl4)肝纤维化的治疗作用,从分子生物学水平探讨其对金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)的影响。方法:用CCl4诱导大鼠肝纤维化,将实验动物随机分为正常对照组、模型对照组、加味桃核承气汤高、中、低剂量治疗组和秋水仙碱对照组;采用灌胃给药,疗程8周;用苦味酸-天狼红胶原染色方法观察肝纤维化积分(SSS)的变化;用免疫组化技术半定量检测肝组织TIMP-1的蛋白表达水平。结果:模型对照组SSS显著高于正常对照组,经加味桃核承气汤治疗后SSS显著减轻;模型对照组大鼠肝组织TIMP-1的蛋白表达水平增加。各治疗组的TIMP-1的蛋白表达水平均显著下降。结论:①加味桃核承气汤对CCl4诱导的肝纤维化有治疗作用。②加味桃核承气汤抗实验性肝纤维化作用机制与抑制肝星状细胞(HSC)的活化,调控TIMP-1的蛋白表达水平有关。

蕲艾提取液对免疫性肝纤维化大鼠转化生长因子-β1表达的影响

目的:观察蕲艾提取液对肝纤维化大鼠血清和肝组织中转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响,探讨其对肝纤维化的作用及相关机制。方法:Wister大鼠72只随机分为正常对照组、肝纤维化模型组及小、中、大剂量蕲艾提取液处理组和丹参对照组,采用猪血清腹腔内注射法构建肝纤维化大鼠模型;病理切片HE染色评价各组大鼠肝组织纤维化程度;应用ELISA法检测大鼠血清中TGF-β1含量的变化;同时分别采用荧光定量PCR和Western blot检测大鼠肝脏组织TGF-β1mRNA和蛋白表达水平。结果:不同剂量蕲艾提取液处理组大鼠与肝纤维化模型组相比,肝纤维化程度显著减轻;血清TGF-β1水平、肝脏组织中TGF-β1mRNA和蛋白水平均明显降低,差异有显著性意义。结论:蕲艾提取液能有效抗大鼠肝纤维化,其作用机制可能与通过抑制TGF-β1表达和分泌有关。