人急性单核细胞白血病细胞系SHI-1在裸鼠体内的高致瘤性及其机制的初步研究

本研究确定人急性单核细胞白血病细胞系SHI-1在裸鼠体内的高致瘤性,并对其成瘤机制进行初步探讨。将SHI-1细胞接种至裸鼠皮下,观察肿瘤生长情况;取肿瘤组织行病理检测、R显带核型分析;RT-PCR检测MLL-AF6融合基因和VEGF基因的转录;明胶酶谱法检测培养上清中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和MMP-2的表达;体外穿膜实验观察迁移能力。结果表明:注射SHI-1细胞的16只裸小鼠均于皮下出现肿块;瘤体由白血病细胞组成;注射的裸鼠中有MLL/AF6融合基因和VEGF基因的转录;在无血清培养上清中MMP-9和MMP-2的表达明显高于对照细胞;SHI-1细胞有较强的迁移能力,MMP-2的阻断抗体可显著抑制其体外迁移能力。结论:SHI-1在裸鼠体内有极高的成瘤率,其机制可能与p53基因的异常、高水平VEGF基因的转录、金属蛋白酶的高表达和较强的体内浸润能力有关。

四嗪二甲酰胺对人白血病细胞系SHI-1细胞体外作用的研究

目的观察四嗪二甲酰胺(ZGDHu-1)体外抑制白血病细胞系 SHI-1细胞增殖,诱导细胞分化和凋亡作用,并初步探讨其作用机制。方法将不同浓度 ZGDHu-1与 SHI-1细胞在体外共培养,用细胞计数、锥虫蓝染色、MTT 法、5′-溴-2′脱氧尿苷(Brdu)-ELISA 法观察 ZGDHu-1对 SHI-1细胞增殖的抑制作用;用细胞形态学、DNA 含量测定及细胞周期分析、膜联蛋白Ⅴ/碘化丙锭(Annexin Ⅴ/P1)双标记和 Hoechst 33258荧光染色等分析细胞凋亡。通过 NBT 试验、细胞表面抗原 CD11b、CD14、CD64检测和细胞形态学观察分化情况。用流式细胞术检测 ZGDHu-1诱导 SHI-1细胞分化和凋亡过程中 P38MAPK 和 STAT3磷酸化表达的变化。结果 ZGDHu-1能抑制 SHI-1细胞增殖和活力,呈现作用时间和剂量的量效关系,48和72h/C_(50)值分别为250ng/ml,85 ng/ml。ZGDHu-1作用于 SHI-1细胞后大部分细胞阻滞于 G_2/M 期,200ng/ml ZGDHu-1作用48h,SH-1细胞 G_2/M 期比例为(48.4±2.1)%;出现典型的细胞凋亡形态改变,DNA 片断化,检出亚 G_1峰,AnnexinⅤ/PI 和 Hoechst 33258荧光染色显示凋亡细胞的特征性改变。SHI-1细胞经2～50ng/ml ZGDHu-1作用3 d 后,细胞发生部分分化,NBT 阳性率增加,细胞表面 CD11b、CD14、CD64表达上调。ZGDHu-1作用 SHI-1细胞后磷酸化P38MAPK 表达增强,而磷酸化 STAT3表达降低。结论 ZGDHu-1能抑制 SHI-1细胞增殖和细胞活力.诱导细胞分化,促进细胞凋亡,其机制可能与 P38MAPK 的活化增强和 STAT3的活化抑制有关。

人单核细胞白血病细胞系SHI-1的诱导分化和凋亡

目的对该实验室建立的一株新的人单核细胞白血病细胞系SHI-1进行诱导分化和凋亡的研究。方法以瑞特染色、四唑氮蓝还原试验(NBT)、流式细胞仪(FCM)检测AnnexinV以及CD11b和CD14表达的改变后和DNA凝胶电泳等方法观察三丁酸甘油酯(TB)作用后SHI-1细胞的改变;以瑞特染色、FCM检测AnnexinV以及CD11b和CD14表达的改变等方法观察三氧化二砷(As2O3)作用后SHI-1细胞的改变。结果SHI-1细胞经TB处理后,可出现典型的凋亡形态学改变,部分细胞出现部分分化,NBT实验显示还原率上升,FCM结果示CD11b的表达无改变,而CD14的表达上调,AnnexinV的检测结果显示SHI-1细胞经TB作用24h后凋亡率明显上升,可见典型的DNA梯带。SHI-1细胞经As2O3作用后可见典型的凋亡形态学改变,部分细胞可见部分分化的改变,SHI-1细胞CD14的表达上调,CD11b的表达无改变,FCM检测AnnexinV显示凋亡率明显上升。TPA作用24h后SHI-1细胞基本贴壁,形态不规则,有伪足形成。结论TB对SHI-1细胞具有诱导分化和凋亡的双向调节作用。TPA可诱导SHI-1细胞分化和贴壁。0.5μmol/L、1.0μmol/L和2.0μmol/LAs2O3可诱导SHI-1细胞发生凋亡和部分分化。

干扰CD147表达对SHI-1细胞体内外增殖及浸润能力的影响及可能机制

目的 探讨干扰CD147表达对白血病细胞系SHI-1细胞增殖、侵袭、转移能力的影响及其可能的机制.方法 用慢病毒干扰载体及阴性对照载体转染SHI-1细胞,半定量RT-PCR法检测CD147、MMP-2及MMP-9 mRNA表达,Western blot法检测CD147蛋白水平;MTT法检测细胞增殖能力,用Millicell小室法将SHI-1细胞与骨髓基质细胞共培养检测SHI-1细胞体外侵袭能力的改变,将不同处理的SHI-1细胞经皮下或经尾静脉接种于裸鼠,观察SHI-1细胞在裸鼠体内增殖及浸润情况.结果 慢病毒干扰载体转染的SHI-1细胞（SHI-1/CD147i细胞）CD147 mRNA表达水平较阴性对照病毒转染细胞（SHI-1/NC细胞）下调85％,CD147蛋白表达下降91％,SHI-1/CD147i细胞MMP-2及MMP-9mRNA表达较SHI-1/NC细胞分别下降72％及63％.SHI-1/CD 147i细胞体外增殖能力较SHI-1/NC及SHI-1细胞明显下降;与骨髓基质细胞共培养24 h后,SHI-1、SHI-1/NC、SHI-1/CD147i细胞移行至Millicell下层的细胞占接种细胞数的比例分别为（18.2±2.5）％、（16.5±2.7）％和（4.5±1.2）％,SHI-1/CD147i细胞移行能力显著低于SHI-1和SHI-1/NC细胞.接种于裸鼠皮下的SHI-1/CD147i细胞形成的肿瘤体积显著低于SHI-1及SHI-1/NC细胞.而经尾静脉接种SHI-1/CD147i细胞的裸鼠生存期较接种SHI-1、SHI-1/NC细胞的裸鼠显著延长,并且在脏器浸润能力下降.结论 干扰SHI-1细胞CD147表达可抑制SHI-1细胞体内外增殖及浸润能力,其途径可能是通过下调MMP表达实现的.

人单核细胞白血病细胞系在裸鼠体内的生长及浸润:中枢神经系统白血病模型的建立

目的用人单核细胞白血病细胞系建立一种可重复的裸鼠中枢神经系统白血病(CNSL)模型。方法对4和6周龄 BALB/c 裸鼠进行切脾,环磷酰胺腹腔注射及全身亚致死剂量照射等预处理(SCI 预处理),经尾静脉接种1×lO^7人单核细胞白血病细胞系 SHI-1细胞,应用 RT-PCR、组织病理切片、免疫组织化学及流式细胞术检测裸鼠各脏器中 SHI-1细胞浸润生长情况。结果裸鼠的生存期为33～46 d ,部分裸鼠于5周后出现双下肢截瘫 SHI-1细胞可浸润多种脏器,并可形成淡绿色肿块,病理示在肝、肺、肾、睾丸等多部位发现有 SHI-1细胞浸润,椎体及颅骨骨髓腔中有大量白血病细胞浸润,并可突破骨髓腔向椎管及颅内浸润,多位于硬膜及蛛网膜下腔,并可由脑皮层表面向深部脑组织浸润。结论 SHI-1细胞可于经 SCI 预处理的裸鼠中形成稳定的、可重复的 CNSL 模型,可用于对 CNSL 的实验研究。