鸡福氏志贺菌SHV-12型ESBLs基因的扩增、原核表达及酶特性研究

对5株鸡福氏志贺菌产SHV-12型ESBLs基因进行重组表达并优化表达条件,观察了表达蛋白的底物水解特性和抑制剂的抑酶特性。结果表明:构建的重组质粒经EcoRⅠ和XholⅠ双酶切后,可切下目的条带。重组质粒转化BL21后所表达的重组蛋白有超广谱β-内酰胺酶活性。SHV-12原核表达的最佳条件是IPTG浓度为0.5 mmol/L、温度37℃、诱导时间5 h;SHV-12型ESBLs亲和力最强的底物是头孢噻呋钠,Km值为1.29μmol,较难水解的底物是头孢曲松钠,Km值为24.13μmol;它唑巴坦、舒巴坦对头孢曲松钠的抑酶保护率分别为21.01%、25.51%,对头孢噻呋钠的抑酶保护率分别为34.99%、35.49%。

产超广谱β内酰胺酶大肠埃希菌中SHV型β内酰胺酶的分子生物学研究

目的 :了解复旦大学附属华山医院临床分离产超广谱 β内酰胺酶 (ESBLs)大肠埃希菌中SHV型 β内酰胺酶的分布、流行情况以及分子生物学特点。方法 :用SHV型 β内酰胺酶基因的通用引物进行聚合酶链反应 (PCR)检测 ;编码框以外设计引物、PCR扩增SHV型 β内酰胺酶全编码基因并进行克隆表达、序列分析 ;对产SHV型 β内酰胺酶的菌株进行脉冲场凝胶电泳 (PFGE)检测。结果 :5 8株产ESBLs大肠埃希菌中 ,只有 3株细菌产生SHV型 β内酰胺酶 (5 .2 % ) ,其中 1株产生SHV 1 1(非ESBLs) ,另 2株产生SHV 1 2 (ESBLs) ;3株产SHV型 β内酰胺酶菌株的PFGE谱型不同。 结论 :临床分离产ESBLs大肠埃希菌中 ,SHV型 β内酰胺酶的基因型为SHV 1 1和SHV 1 2 ,SHV型ESBLs不是主要的ESBLs型别。未发现产SHV型

同时产DHA-1型头孢菌素酶和SHV-12型超广谱β内酰胺酶的肺炎克雷伯菌

目的研究头孢菌素酶(AmpC)和超广谱β内酰胺酶(ESBLs)在临床分离肺炎克雷伯菌中的流行、表型及其基因特性。方法先后用标准纸片扩散法、三维试验、等电聚焦、酶抑制试验以及微量稀释法等进行表型检测。然后用接合试验、多重聚合酶链反应(PCR)以及基因测序等方法进行分子生物学研究。结果受试的86株细菌中有4株三维试验阳性,等电聚焦以及酶抑制试验表明这些菌株都产一种等电点(PI)为7·8并具有AmpC性质的β内酰胺酶,基因测序表明和DHA-1型AmpC酶一致;它们同时伴随产生一种PI为8·2的ESBLs,基因测序表明其来源为SHV-12。微量稀释法检测表明上述菌株不但对多种三代头孢菌素耐药,而且出现了对头孢吡肟耐药,但对碳青霉烯类抗生素仍敏感。结论本研究发现同时产DHA-1型高产AmpC酶和SHV-12型ESBLs的肺炎克雷伯菌及其耐药表型。此类菌株的出现,将为临床抗感染治疗带来新的困难。

杭州地区1998—2008年产ESBL的志贺菌基因型及分子流行病学研究

1999年Ahamed和Kundu在印度首次发现了志贺菌中存在SHV-11型ESBL。ESBL通常由质粒介导，对三代头孢和单环类抗生素有很高的活性，此后，世界各地均有志贺菌中ESBL的报道。法国发现福氏志贺菌中存在SHV-2型ESBL；日本发现了TOHO-1型ESBL；阿根延发现福氏志贺菌中存在PER-2型ESBL，从TEM型ESBL中还发现了较多亚型（TEM-17、TEM-19、TEM-20、TEM-15、TEM-52等）。

浙江省产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的基因分型

目的了解浙江省产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的ESBLs基因型分布。方法对119株实验室保存的1998年9月至1999年6月浙江省各个地区临床分离的产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌,采用接合试验,聚合酶链反应(PCR),PCR产物克隆测序等方法明确ESBLs基因型。结果119株菌株中有115株产CT-X-M型ESBLs,阳性率为93.28%,包括88株CTXM14,12株CT-X-M24,6株CTXM22,5株CT-X-M3,2株CT-X-M9及CTXM27,CTXM28、CTX-M-29各1株;9株产SHV型ESBLs,阳性率为7.56%,包括8株SHV12,1株SHV5;未分离到TEM型ESBLs。有9株产2种及2种以上ESBLs,有4株未能确定ESBLs基因型。结论浙江地区产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的基因型以CT-X-M14型为主;CTX-M-29是一种新基因型ESBLs,基因库登录号为AY267213。

志贺菌同源性和超广谱β-内酰胺酶基因型分析

志贺菌是具有高度传染性的肠道致病菌，每年均散发或小规模暴发流行。近年临床上分离的志贺菌对常用抗菌药物逐渐耐药，有的菌株甚至出现多重耐药。自1999年Ahamed等在印度首次发现志贺菌中存在SHV-11型广谱β-内酰胺酶以来，世界各地均有志贺菌中超广谱β-内酰胺酶（ESBL）的报道，且有逐步增加的趋势。我们对浙江省部分地区临床分离的24株志贺菌通过脉冲场凝胶电泳（PFGE）进行同源性分析。用头孢噻肟、头孢噻肟＋克拉维酸、头孢他啶、头孢他啶＋克拉维酸双纸片确证试验筛选到10株产ESBL菌株，