丝状真菌SIIA-F1108产生抗真菌物质的分离纯化和结构鉴定

目的研究丝状真菌SIIA-F1108发酵液中抗真菌的活性成分。方法利用大孔吸附树脂吸附、正相硅胶色谱层析和高压液相制备等技术,结合白念珠菌抑菌实验进行跟踪检测,分离丝状真菌SIIA-F1108的发酵液中的活性组分;通过紫外光谱、红外光谱、高分辨质谱、核磁共振进行分析,确定活性组分的结构。结果分离纯化得到SIIA-C1108A和SIIA-C1108B活性组分,分子式均为C_(50)H_(80)N_8O_(17),与文献报道的纽莫康定(pneumocandin)B_0和C_0同质。结论从丝状真菌SIIA-F1108的发酵液中分离得到的两个具有抗真菌活性物质分别为纽莫康定B_0和C_0,其中纽莫康定B_0作为合成醋酸卡泊芬净的前体物质,具备重要的经济价值。

RAPAMYCIN产生菌SIIA9268的分类与鉴定

从我国湖北省武汉东湖土壤中分离到一株链霉菌，编号ＳＩＩＡ９２６８，其代谢产物具有免疫抑制作用，经鉴别活性物质与Ｒａｐａｍｙｃｉｎ为同一物质。该菌株在形态培养特征和生理生化特征上与已知的吸水链霉菌相似，但又有一定的差别，故定名为吸水链霉菌东湖变种（Ｓｔｒｅｐｔｏ－ｍｙｃｅｓｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓｄｏｎｇｈｕｅｎｓｉｓＳＩＩＡ９２６８）。

NH_4^+对多黏菌素4E产生菌Paenibacillus polymyxa SIIA-1408代谢过程的影响

目的研究NH_4^+对多黏菌素E产生菌Paenibacillus polymyxa SIIA-1408代谢过程的影响方法通过向Paenibacillus polymyxa SIIA-1408的初始发酵培养基中添加不同浓度的NH_4^+,分析其代谢产物及其产量的变化,对于多黏菌素E以外的目标产物进行分离纯化确定其结构,通过前体的添加和中间代谢产物的验证,确定其可能的代谢途径。结果初始培养基中不添加NH_4^+或添加低浓度的NH_4^+主要产物为(S)-2-羟基-3-苯基丙酸,当NH_4^+的浓度超过一定浓度后主要产物为多黏菌素E。结论在一定浓度范围内,NH_4^+促进Paenibacillus polymyxa SIIA-1408生物合成多黏菌素E,抑制其将苯丙氨酸转化(S)-2-羟基-3-苯基丙酸。

湖泊放线菌SIIA-A16124的分类鉴定及基因组挖掘

目的对湖泊放线菌SIIA-A16124进行分类鉴定和基因组挖掘。方法采用多相分类法对菌株的形态学、生理生化、细胞壁化学组分、16S r RNA基因序列进行测定和分类鉴定,采用基因组挖掘分析生物合成基因簇,经发酵培养、抗菌活性检测及活性产物质谱分析,推测其活性产物的化合物结构类别。结果菌株SIIA-A16124的16S r RNA基因与菌株Actinokineospora inagensis NRRL B-24050T同源性最高为99%;菌株SIIA-A16124在ISP3培养基上中等产孢和水解淀粉的特性与模式菌株存在明显差异;鉴定菌株SIIA-A16124为动孢菌Actinokineospora sp.,具有羊毛硫肽生物合成基因簇,其活性次级代谢产物属于羊毛硫肽类抗生素。结论首次发现动孢菌属放线菌具有生物合成羊毛硫肽类抗生素的能力。

内生真菌SIIA-F13642产生的抗真菌次级代谢产物研究

目的研究植物内生真菌SIIA-F13642产生的抗真菌次级代谢产物。方法基于r DNA-ITS序列对菌株进行分子分类学鉴定;采用乙酸乙酯萃取、C_(18)硅胶柱层析和制备型HPLC分离目标化合物;采用波谱学数据解析其结构。结果鉴定SIIA-F13642为地杨梅粘鞭霉(Gliomastix luzulae(Fuckel)E.W.Mason ex S.Hughes),产生3个主要的已知抗真菌化合物virescenoside A,virescenoside B和[Thr^2,Leu^5,Ala^(10)]Cyclosporin,抗新型隐球菌SIA1017的MIC值分别为0.2、0.78和0.78mg/m L。结论地杨梅粘鞭霉SIIA-F13642产生3个主要次级代谢产物virescenoside B(1)、virescenoside A(2)和[Thr^2,Leu^5,Ala^(10)]Cyclosporin(3),具有抗新型隐球菌的活性。

SILA-C2191-A和B，黄灰链霉菌产生的多环San酮类新抗生素 Ⅰ．菌种分类，发酵，分离纯化和生物学活性

在筛选具有生物活性的放线菌新代谢产物的过程中，从放线菌SIIA-A02191的发酵产物中发现了新的多环San酮类抗生素SIIA-C2191A及其溴代类似物SIIA-C2191B。基于形态学、化学分类和16SrDNA等数据，将分离自渤海湾沙地土壤的产生菌鉴定为灰黄链霉菌。活性化合物采用减压快速层析法和制备型高效液相进行分离纯化。化合物SIIA-C2191A和SIIA-C2191B均对革兰氏阳性菌显示强抗菌活性，但对革兰氏阴性菌的抗菌活性较弱。

N-羟基琥珀酰亚胺-3-吲哚乙酸酯柱前衍生高效液相色谱分离及荧光测定肽及其水解物

本文首次报道了一种新的羧酸活性酯试剂，N-羟基琥珀酰亚胺-3-吲哚乙酸酯作为柱前荧光衍生试剂，流动相为10mmol／L柠檬酸-Na2HPO4－pH3．6的甲醇／水（20／80，V／V）溶液，C18柱，于λcx／λcm＝278nm／355nm处进行荧光检测，高效液相色谱分离测定了谷胱甘肽、二甘肽、谷氨酸、胱氨酸、甘氨酸．当S／N＝3时，检出限为0．2至2．5Pmol．

微生物来源的黑色素生物合成抑制剂H7264的研究

通过建立的用链霉菌 X5 9为鉴定菌的黑色素生物合成抑制剂筛选模型 ,从 4 0 0 0余个微生物代谢产物中找到一株活性化合物产生菌。该菌从四川省宜宾地区土壤中分离 ,编号 SIIA- H72 6 4。该菌种经鉴定为链霉菌 ,其代谢产物 H72 6 4 A和 H72 6 4 B结构论证与化合物 Enopeptin A,B同质 ,但 Enopeptin尚未发现其有抑制黑色素生物合成活性。

长效重组人胰岛素原类似物的高密度细胞培养的研究

本文以长效重组人胰岛素原类似物(SIIA-0801)的大肠埃希菌工程菌为研究对象,针对采用高细胞密度培养技术表达包涵体重组融合蛋白的关键参数,重点研究了诱导培养基成份(包括碳源、氮源、无机盐、微量元素)、种子细胞密度、IPTG诱导剂的加入量及诱导时间,诱导温度等因素与包涵体表达产量的相关性。结果发现其融合蛋白的最佳表达培养基:1.5%蛋白胨,1%酵母粉,0.5%NaCl,0.8%葡萄糖和0.2%磷酸盐缓冲液(22mmol/LKH2PO4,40mmol/LK2HPO4)。最佳诱导表达条件为:25%接种量,诱导温度37℃,接种培养1h后添加0.5mmol/L IPTG,继续诱导培养5h,发酵培养的总周期为6h。优化后的培养条件比传统的LB培养基及培养方法,其产量提高了6倍多。该结果为长效重组人胰岛素原类似物(SIIA-0801)后续的生产工艺研究提供了重要的参考依据。