SIRT-3表达水平与食管癌患者预后关系

目的探讨去乙酰化酶(sirtuin-3,SIRT-3)在食管癌组织中的表达水平及与食管癌患者预后的关系。方法取80例食管癌肿瘤组织,采用免疫组织化学方法检测肿瘤组织SIRT-3蛋白的表达水平。结果食管癌患者中SIRT-3高表达组生存率低,SIRT-3低表达组生存率高,差异有统计学意义(P<0.01)。结论食管癌组织中SIRT-3表达水平与食管癌术后患者生存时间呈负相关,SIRT-3表达在食管癌患者的预后中具有重要作用。

合作猪SIRT 3基因克隆、生物信息学分析及组织表达研究

【目的】克隆合作猪沉默信息调节因子3(silence information regulator 3,SIRT3)基因CDS区序列,并对其进行生物信息学分析,探究SIRT 3基因在合作猪不同组织中的表达水平,为研究SIRT 3基因功能奠定基础。【方法】试验选择3月龄合作猪公猪3头,采集心脏、睾丸、肺脏等组织,采用PCR扩增、Sanger测序等方法获取SIRT 3基因CDS区序列,并通过Mega 7.0软件构建系统进化树;通过生物信息学在线软件分析SIRT3蛋白结构和功能;采用实时荧光定量PCR检测SIRT 3基因在合作猪不同组织中的表达量。【结果】合作猪SIRT 3基因CDS区长774 bp,共编码257个氨基酸。系统进化树结果显示,合作猪与家猪亲缘关系最近,与斑马鱼亲缘关系最远。SIRT3蛋白的分子质量为28.68 ku,理论等电点为5.81,不稳定系数为37.92,为稳定性亲水蛋白;该蛋白不存在跨膜区域,无信号肽,但存在2个低复杂度结构域,主要分布于内质网中;SIRT3蛋白的二级结构主要由α-螺旋和无规则卷曲构成,三级结构模型预测结果与二级结构基本一致。实时荧光定量PCR结果显示,SIRT 3基因在合作猪不同组织中均有表达,在心脏中表达量最高,极显著高于其他组织(P<0.01),其次是睾丸、肺脏、肝脏组织。【结论】本研究成功克隆合作猪SIRT 3基因CDS区序列,探究了SIRT 3基因在合作猪不同组织中的表达水平并初步分析了其编码蛋白的生物学功能,为进一步研究合作猪SIRT 3基因功能提供了参考。

羟基红花黄色素调节Sirt 3改善心脏缺血再灌注损伤中线粒体功能障碍

目的探讨羟基红花黄色素对脂多糖诱导的H9c2心肌细胞损伤线粒体功能保护作用及其对Sirt3的调节作用。方法H9c2心肌细胞株培养24 h后随机分为对照组、脂多糖造模组、脂多糖造模+Sirt3抑制剂组,羟基红花黄色素给药+模型组,羟基红花黄色素给药+Sirt 3抑制剂+模型组,给予脂多糖建立氧化应激损伤心肌细胞模型。采用乳酸脱氢酶检测试剂盒测定细胞培养液中乳酸脱氢酶含量;测定细胞中ATP含量,测定细胞中细胞色素C含量及线粒体呼吸链复合物含量;Western blot法检测Sirt 3及Bax表达量。结果与对照组比较,脂多糖模型组细胞色素C含量升高,细胞中谷氨酸脱氢酶,ATP及呼吸链复合物含量降低,Sirt3表达量略升高,Bax表达上升(P<0.05)与模型组比较,脂多糖造模+Sirt3抑制组线粒体各项损失指标明显加剧,而羟基红花黄色素给药+模型组中线粒体损伤指标明显恢复(P<0.05),而羟基红花黄色素+Sirt 3抑制剂组中线粒体损伤程度低于脂多糖造模+Sirt3抑制剂组(P<0.05),Sirt3蛋白表达较抑制组明显上升(P<0.05)。结论羟基红花黄色素降低脂多糖诱导的H9c2心肌细胞线粒体氧化损伤,该作用可能与羟基红花黄色素提高受损心肌细胞内Sirt3的表达量有关。

SIRT3表达水平与肝癌患者预后关系

目的探讨去乙酰化酶(sirtuin 3,SIRT3)在肝癌组织中的表达与肝癌患者预后的关系。方法取原发性肝癌肿瘤组织80例,用免疫组织化学方法检测肿瘤组织SIRT3的表达水平,生存曲线分析采用Kaplan-Meier方法 ,组间生存率比较采用Log-rank检验,差异有统计学意义(P<0.05)。结果研究发现肝癌患者中SIRT3高表达组术后生存率低,相反,SIRT3低表达组术后生存率高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论原发性肝癌组织中SIRT3表达水平与患者生存率呈负相关,SIRT3表达在原发性肝癌的预后中具有重要作用。

针灸调节阿尔茨海默病患者线粒体SIRT3机制初探

AD发病机制非常复杂,可严重威胁人类的健康,给家庭和社会带来沉重的负担。线粒体功能障碍与AD的发病有密切关系。沉默信息调节因子3(SIRT3)作为一种依赖NAD+的去乙酰化酶,与线粒体多种生物学功能密切相关。已有的证据表明,SIRT3可以通过其去乙酰化作用在AD的发生和发展中具有重要作用。本文对SIRT3的线粒体定位,调节作用等进行阐述,以进一步探讨其在AD中的保护作用及可能的机制,为针刺更好地防治AD提供理论依据。

运动对骨骼肌线粒体去乙酰化酶3(SIRT3)的影响

Sirtuins(SIRT)是NAD依赖的组蛋白去乙酰化酶,属于沉默信息调节因子家族,参与物质代谢及应激反应,与细胞寿命密切相关。Sirtuin 3(SIRT3)是哺乳动物线粒体中重要的去乙酰化酶,在骨骼肌中高表达,参与能量代谢并影响机体的衰老、细胞死亡和肿瘤发生。研究表明,适度运动会增加骨骼肌中的SIRT3含量并进一步影响脂肪代谢。目前,骨骼肌线粒体中SIRT3在运动中的变化引起学者的普遍关注。主要介绍了SIRT3的生理功能及运动对骨骼肌SIRT3的影响,深入研究运动中骨骼肌SIRT3的变化机制对运动抗衰老及运动防肥减肥具有重要的意义。

牦牛SIRT3基因的克隆及其在各组织和睾丸不同发育阶段的表达

旨在克隆牦牛沉默蛋白调节因子3(sirtuin 3,SIRT 3)基因,并检测其在牦牛不同组织及不同年龄睾丸中的表达水平,从而为研究SIRT 3在牦牛睾丸发育过程中的作用机制提供试验依据。本研究选取胎牛期(5~6个月)、幼年期(1~2岁)、性成熟期(3~5岁)及老年期(7~9岁)健康雄性牦牛共12头(每组各3头),其中来源于同一年龄阶段的3个组织样本视为生物学重复。采集性成熟期牦牛肝、心、肺、脾、脑、肾、肌肉、小肠、睾丸和大肠以及4个时期的睾丸组织。分别提取各组织的总RNA,并利用反转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)技术克隆获得牦牛SIRT 3基因序列,使用相关生物信息学软件预测其编码蛋白质的结构和功能;通过实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测SIRT 3 mRNA在牦牛各组织及睾丸4个发育阶段的表达水平。结果表明,SIRT 3基因的ORF(open reading frame,开放阅读框)为1002 bp,编码333个氨基酸,与黄牛和绵羊的同源性分别达到99.9%和96.7%,该基因的mRNA在牦牛的各个组织中广泛表达,在脾、睾丸、肺和肌肉中的表达量较高。随年龄增长SIRT 3 mRNA在牦牛睾丸中表达呈现先上升后下降的趋势,其中在性成熟期的表达量最高。本研究为揭示SIRT 3在牦牛生长发育,尤其是睾丸发育过程中的调控提供了一定的基础数据。

黄芪甲苷通过激活Sirt3抑制血管紧张素Ⅱ诱导的心肌肥大及氧化应激

目的研究Sirt3在黄芪甲苷抑制血管紧张素Ⅱ诱导的心肌肥大和氧化应激中的作用。方法α-actinin染色检测心肌细胞大小;MitoSOX染色检测ROS;Real time PCR检测心肌肥大标记物ANP、BNP和β-MHC的mRNA水平;Western blot法检测心肌细胞肥大信号通路蛋白水平。结果100nmol·L-1血管紧张素Ⅱ处理心肌细胞48 h,心肌细胞面积与ANP、BNP、β-MHC mRNA水平显著增加,ROS水平及NOX-2、NOX-4表达显著增加,Sirt3表达显著降低;黄芪甲苷预处理心肌细胞1 h显著抑制血管紧张素Ⅱ诱导的上述效应。Sirt3-siRNA干预Sirt3蛋白水平,显著抑制黄芪甲苷的心肌肥厚抑制作用以及抗氧化作用,上调ROS水平,促进心肌肥大。结论黄芪甲苷通过激活Sirt3抑制血管紧张素Ⅱ诱导的心肌肥大以及氧化应激。

不同强度运动调控AMPK-SIRT 3通路对自发性高血压大鼠血管功能的影响

目的:研究不同强度运动对自发性高血压大鼠(spontaneous hypertensive rats,SHR)主动脉血管功能的影响及其可能的机制。方法:12只京都Wistar大鼠(Wistar-Kyoto Rats,WKY)为安静对照组(WKY-C,n=12),48只SHR随机分为安静对照组(SHR-S,n=12),低强度运动组(SHR-L,n=12),中强度运动组(SHR-M,n=12)和高强度运动组(SHR-H,n=12)。运动组进行14周,每周5次,每次60mins的跑台运动训练。14周运动训练结束后取出胸主动脉,进行血管反应性实验检测主动脉血管功能,Western Blot检测主动脉蛋白水平表达量。结果:SHR-S组与WKY-C组比较血管功能受损,内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)、磷酸化一氧化氮合成酶(p-eNOS)表达下调,血管组织氧化应激水平升高,AMPK-SIRT 3表达下调。运动训练后,SHR-L组和SHR-M组血管功能与血管组织氧化应激水平相比较SHR-S组有明显改善(P<0.05)。SHR-H组与SHR-S组比较血管功能与血管组织氧化应激水平没有改善,乙酰胆碱依赖的血管舒张功能与内皮型一氧化氮合酶的功能降低。与SHR-S组比较,SHR-L组和SHR-M组AMPK-SIRT 3表达水平明显上调(P<0.05),而SHR-H与SHR-S组比较没有明显改变。结论:低、中强度运动可以有效减轻SHR的主动脉氧化应激并改善血管功能,而高强度运动不能改善SHR的血管功能,其机制可能与AMPK-SIRT 3通路有关。

甲状腺激素受体β基因对β淀粉样蛋白42诱导的小胶质细胞炎症和细胞凋亡作用机制

目的:探究甲状腺激素受体β基因(Thrb)对β淀粉样蛋白42(Aβ_(42))诱导的小胶质细胞BV_(2)炎症反应、氧化应激和凋亡的作用及作用机制。方法:RT-PCR和Western blot实验检测不同浓度的Aβ_(42)对Thrb表达的影响;CCK-8实验检测Thrb对小胶质细胞BV_(2)增殖的影响;V-FITC/PI检测Thrb对BV_(2)细胞凋亡的影响;Western blot实验检测凋亡相关蛋白caspase-3和caspase-9的蛋白表达水平;活性氧指示剂DCFH-DA检测活性氧(ROS)的水平。结果:Aβ_(42)显著抑制Thrb表达且具有剂量依赖性(P<0.05);过表达Thrb显著降低Aβ_(42)诱导的小胶质细胞BV_(2)的细胞凋亡率和炎症因子的水平(均P<0.05);过表达Thrb显著缓解Aβ_(42)诱导的小胶质细胞BV_(2)的氧化应激(P<0.05);Thrb显著促进Sirt 3和FOX3a的表达,相反,sh-Thrb显著抑制Sirt 3和FOX3a的表达(均P<0.05);Sirt 3/FOX3a通路参与Thrb对Aβ_(42)诱导的细胞损伤的保护机制。结论:Thrb能够缓解Aβ_(42)诱导的BV_(2)细胞的氧化应激和凋亡,降低细胞损伤,其作用是通过调控Sirt 3/FOX3a信号通路来实现的,这一结果能够为老年痴呆症的诊断和临床治疗提供分子基础。

川陈皮素对急性肾损伤大鼠的改善作用及机制研究

目的探究川陈皮素(NOB)通过调节沉默信息调节因子1(SIRT-1)/叉头框转录因子O3a(FOXO3a)通路介导的自噬对急性肾损伤(AKI)大鼠的改善作用及其机制。方法采用一次性腹腔注射顺铂(20 mg/kg)的方法构建AKI大鼠模型。将60只SPF级SD雄性大鼠采用随机数字表法分为对照组(Control组)、AKI模型组(Model组)、低剂量NOB组(NOB-L组,200 mg/kg)、高剂量NOB组(NOB-H组,400 mg/kg)和高剂量NOB+SIRT-1抑制剂EX527组(NOB-H+EX527组,400 mg/kg NOB+5 mg/kg EX527),每组12只。末次给药后收集大鼠24 h尿液,检测24 h尿微量白蛋白含量、尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖甘酶(NAG)含量和尿β2微球蛋白(β2-MG)含量;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠血清中尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)和肾脏中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平;HE染色观察大鼠肾小管组织病理变化;TUNEL染色法检测肾小管细胞凋亡;实时荧光定量PCR(qPCR)法检测大鼠肾脏组织中SIRT1和FOXO3a mRNA表达;Western blot检测大鼠肾脏组织中SIRT1/FOXO3a通路和自噬相关蛋白的表达。结果与Control组相比,Model组大鼠肾脏组织病理损伤严重,24 h尿微量白蛋白、尿NAG、尿β2-MG、血BUN、血Scr、肾小管损伤评分、肾脏MDA水平、细胞凋亡率升高,肾脏SOD水平、SIRT1/FOXO3a通路和自噬相关蛋白表达降低(P<0.05);与Model组相比,NOB-L组和NOB-H组大鼠肾脏组织病理损伤减轻,24 h尿微量白蛋白、尿NAG、尿β2-MG、血BUN、血Scr、肾小管损伤评分、肾脏MDA水平、细胞凋亡率降低,肾脏SOD水平、SIRT1/FOXO3a通路和自噬相关蛋白表达升高(P<0.05)。结论NOB可能通过激活SIRT-1/FOXO3a通路,促进自噬,进而改善大鼠的AKI。