扶正解毒方对病毒性心肌炎大鼠氧化应激及Sirt1/FoxO3a通路的影响

目的 基于沉默信息调节因子2相关酶1(Sirt1)/叉头蛋白O3a(FoxO3a)通路探究扶正解毒方对病毒性心肌炎(VMC)大鼠的影响。方法 大鼠腹腔注射柯萨奇B3病毒(CVB3)法建立VMC模型,随机分为模型组、扶正解毒方低剂量组(28 g/kg)、扶正解毒方高剂量组(112 g/kg)、EX527组(Sirt1抑制剂,1μg/kg)、扶正解毒方(28 g/kg)+EX527(1μg/kg)组,每组15只,另取未造模的正常大鼠15只为正常组,连续给药10 d。检测大鼠超声心动图Tie指数,HE染色观察心肌组织病理损伤情况,ELISA法检测血清心肌损伤标志物、氧化应激水平,TUNEL法检测心肌组织细胞凋亡率,免疫组化法检测心肌组织Sirt1表达,Western blot法检测心肌组织FoxO3a、磷酸化FoxO3a(p-FoxO3a)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)、过氧化氢酶(CAT)、细胞周期抑制蛋白p27、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3(caspase3)表达。结果 与正常组比较,模型组大鼠心肌细胞坏死加重,大鼠出现死亡,Tie指数、血清心肌损伤标志物、氧化应激指标水平均升高(P<0.05),Sirt1/FoxO3通路蛋白及其介导的抗氧化应激、抗凋亡相关蛋白表达降低(P<0.05);与模型组比较,扶正解毒方各剂量组大鼠无死亡,心肌组织损伤得以缓解,Tie指数、血清心肌损伤标志物、氧化应激指标水平均降低(P<0.05),Sirt1/FoxO3通路蛋白及其介导的抗氧化应激、抗凋亡相关蛋白表达升高(P<0.05);EX527可加重VMC大鼠的死亡及心肌细胞氧化损伤等症状,并逆转扶正解毒方对抗病毒性心肌炎的作用(P<0.05)。结论 扶正解毒方可通过激活Sirt1/FoxO3a通路缓解VMC大鼠心肌氧化应激损伤。

川陈皮素通过FOXO3a/SIRT1通路减轻脂多糖诱导的肺损伤

目的 观察川陈皮素在脓毒症肺损伤中的作用,并探究其潜在机制。方法 采用随机数字表法将48只8~10周的雄性C57 BL/6小鼠分为4组,即对照组、肺损伤组、治疗组(5mg/kg)和治疗组(10mg/kg),每组各12只。对照组不做任何处理;肺损伤组小鼠腹腔注射脂多糖(10mg/kg);治疗组(5mg/kg)小鼠接受腹腔注射脂多糖(10mg/kg)的同时予以川陈皮素(5mg/kg)灌胃;治疗组(10mg/kg)小鼠接受腹腔注射脂多糖(10mg/kg),同时予以川陈皮素(10mg/kg)灌胃。脂多糖腹腔注射12h后,检测各组小鼠肺功能及动脉血气,同时留取肺组织,分别从病理学和分子生物学层面评估小鼠肺损伤状况及可能靶点。结果 与对照组比较,肺损伤组小鼠气道压力、PaCO_(2)、肺损伤评分明显增高,PaO_(2)明显降低(P<0.05);与肺损伤组比较,治疗组(5mg/kg)和治疗组(10mg/kg)小鼠气道压力、PaCO_(2)、肺损伤评分明显降低,PaO_(2)明显升高(P<0.05)。Western blot法检测结果显示,与对照组比较,肺损伤组小鼠肺组织中IL-1β、TNF-α、TXNIP和4-HNE的蛋白表达水平明显升高(P<0.05);与肺损伤组比较,治疗组(5mg/kg)和治疗组(10mg/kg)小鼠肺组织上述蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。此外,肺损伤组小鼠肺组织中FOXO3a和SIRT1的蛋白表达水平较对照组明显降低(P<0.05);与肺损伤组比较,治疗组(5mg/kg)和治疗组(10mg/kg)小鼠肺组织中FOXO3a和SIRT1蛋白表达水平明显上调(P<0.05)。结论 川陈皮素可抑制小鼠脓毒症肺损伤并减轻氧化应激和炎性反应,其机制可能与川陈皮素对FOXO3a/SIRT1通路激活有关。

CD38抑制剂通过Sirt3/FoxO1途径抑制心肌缺血/再灌注损伤的研究

目的探讨CD38抑制剂减轻心肌缺血/再灌注损伤的作用及机制研究。方法雄性SD大鼠20只给予适应性喂养7 d后,随机分为四组,分别为假手术(A)组、心肌缺血/再灌注(B)组、心肌缺血/再灌注+CD38抑制剂(C)组和心肌缺血/再灌注+CD38抑制剂+Sirt3抑制剂(3-TYP)(D)组。B、C、D组建立心肌缺血/再灌注模型。C组和D组用木犀草素(特异性CD38抑制剂)[100 mg/(kg·d)]连续灌胃2周,D组造模前30 min尾静脉注射3-TYP。记录心电图,检测血清肌钙蛋白T水平、ROS水平,测定心肌病变,检测心肌组织中Sirt3、FoxO1、Bax、Bcl-2蛋白表达水平。结果与A组相比,B组心电图ST段明显抬高;与B组相比,C组ST段回落;与C组相比,D组ST段抬高。与A组相比,B组肌钙蛋白T、ROS水平显著增高(P<0.01);与B组相比,C组肌钙蛋白T、ROS水平则显著降低(P<0.01);与C组相比,D组肌钙蛋白T、ROS水平明显增高(P<0.01和P<0.05)。HE染色显示A组心肌排列整齐,无明显炎症浸润,B组结构紊乱,可见炎症细胞浸润,C组和D组较B组排列明显整齐。TUNEL染色结果显示,与A组相比,B组TUNEL阳性细胞比例显著增加(P<0.01);与B组相比,C组的TUNEL阳性细胞比例明显降低(P<0.01);与C组相比,D组的TUNEL阳性细胞比例则显著增加(P<0.01)。与A组相比,B组Sirt3蛋白表达水平显著降低(P<0.01);与B组相比,C组Sirt3蛋白表达水平显著升高(P<0.01);与C组相比,D组Sirt3蛋白表达水平则明显降低(P<0.05)。与A组相比,B组FoxO1蛋白和Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P<0.01);与B组相比,C组FoxO1蛋白和Bcl-2蛋白表达水平则显著升高(P<0.01);与C组相比,D组则显著降低(P<0.01和P<0.05)。与A组相比,B组Bax蛋白表达显著升高(P<0.01);与B组相比,C组则显著降低(P<0.01);与C组相比,D组Bax水平则显著升高(P<0.01)。结论CD38抑制剂可能通过Sirt3/FoxO1途径抑制心肌缺血/再灌注引起的心肌损伤。

沉默SIRT1降低胆管癌细胞对5-氟尿嘧啶的耐药:基于抑制FOXO1/Rab7自噬通路

目的探讨SIRT1靶向FOXO1/Rab7自噬通路调节胆管癌细胞5-氟尿嘧啶(5-FU)耐药的机制。方法不同浓度(50、100、150、200μg/mL)的5-FU处理HCCC-9810细胞构建HCCC-9810/5-FU耐药细胞模型,免疫荧光检测细胞中SIRT1表达情况,Western blot和q-PCR检测SIRT1、FOXO1、Rab7表达水平,Western blot检测自噬相关蛋白Beclin1、LC3、p62表达水平。SIRT1 siRNA和NC siRNA转染HCCC-9810/5-FU耐药细胞,CCK-8检测细胞耐药性,划痕实验检测细胞迁移能力,RT-qPCR检测FOXO1、Rab7 mRNA水平,Western blot检测SIRT1、FOXO1、Rab7、Beclin1、LC3、p62蛋白表达水平。结果不同浓度(50、100、150、200μg/mL)的5-FU均能抑制HCCC-9810细胞增殖。与对照组相比,HCCC-9810/5-FU耐药细胞中SIRT1荧光强度略有增强;SIRT1、Rab7、p62、FOXO1和Beclin 1蛋白表达上调(P<0.01),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值增加(P<0.001);SIRT1、Rab7和FOXO1 mRNA水平上调(P<0.05)。沉默SIRT1表达后,HCCC-9810细胞的5-FU耐药性降低,细胞迁移能力降低,SIRT1(P<0.01)、Rab7(P<0.05)、p62(P<0.05)、FOXO1(P<0.01)和Beclin1(P<0.001)蛋白表达降低,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值降低(P<0.001);FOXO1和Rab7 mRNA水平降低(P<0.05)。结论沉默SIRT1的表达抑制FOXO1/Rab7自噬通路激活。

香芹酚通过SIRT1/FOXO1通路减轻糖尿病肾病大鼠氧化应激损伤

目的:研究香芹酚通过SIRT1/FOXO1通路减轻糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)大鼠氧化损伤的机制。方法:采用高脂饮食和腹腔注射链脲佐菌素建立DN大鼠模型,将DN大鼠分为对照组、模型组、L-XQF组(5 mg/kg)、M-XQF组(10 mg/kg)和L-XQF组(20 mg/kg)。检测大鼠空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)、尿素氮(urea nitrogen,BUN)、血肌酐(serum creatinine,SCr)、尿微量蛋白(urine microprotein,U-mAlb)的含量;之后处死大鼠,采集肾脏组织,HE染色和Masson染色分别观察大鼠肾脏组织病理变化和纤维化情况;ELISA法检测肾脏组织丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)水平;Western blot检测肾脏组织中SIRT1/FOXO1通路相关蛋白水平。结果:香芹酚能够降低DN大鼠FBG、BUN、SCr、U-mAlb和MDA水平,改善大鼠肾脏组织病理损伤及纤维化,增加SOD、GSH-Px含量及SIRT1、FOXO1蛋白水平。结论:香芹酚可能通过SIRT1/FOXO1通路抑制DN大鼠肾脏组织的氧化应激,从而减轻肾脏损伤及改善肾脏纤维化。

miR-125a-3p对骨关节炎大鼠软骨细胞活性、氧化应激反应及SIRT1/Foxo1蛋白表达的影响

目的 探讨miR-125a-3p对骨关节炎大鼠软骨细胞活性、氧化应激反应及细胞沉默信息调节因子1/叉头框转录因子o1(SIRT1/Foxo1)蛋白表达的影响。方法 将40只大鼠随机分为对照组(健康大鼠)、模型组(骨关节炎大鼠,造模后不做其他处理及干预)、miR-125a-3p组(骨关节炎大鼠,造模成功7 d后于大鼠左膝关节关节腔内注射miR-125a-3p抑制剂)、阿利吉仑组(骨关节炎大鼠,造模成功7 d后给予大鼠50 mg/kg阿利吉仑灌胃),每组10只。通过氧化应激反应检测超氧物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、乳酸脱氢酶(LDH),HE、番红O、Masson染色检查大鼠软骨损伤情况,TUNEL检测软骨细胞凋亡,RT-PCR与免疫印迹检测SIRT1、Foxo1基因及蛋白水平。结果 软骨细胞凋亡率模型组高于miR-125a-3p组与阿利吉仑组(P<0.05),miR-125a-3p组与阿利吉仑组比较差异无统计学意义(P>0.05)。HE、番红O、Masson染色显示,模型组大鼠关节软骨面骨裂隙形成;miR-125a-3p组与阿利吉仑组大鼠关节软骨表面变得光滑,无明显裂隙。RT-PCR与免疫印迹检测显示,与模型组相比,miR-125a-3p组与阿利吉仑组SOD、GSH、SIRT1水平均升高(P<0.05), MDA、LDH、Foxo1水平均降低(P<0.05)。结论 miR-125a-3p通过调控SIRT1/Foxo1信号通路,可降低氧化应激反应,抑制软骨细胞凋亡,改善骨关节炎病情。

隐丹参酮调节Sirt1/FoxO1信号通路对高糖诱导的肾小球内皮细胞损伤的影响

目的:探讨隐丹参酮(CT)调节沉默信息调节因子1(Sirt1)/叉头框蛋白O1(FoxO1)信号通路对高糖诱导的肾小球内皮细胞(GEC)损伤的影响。方法:将GEC分为对照组(NR组,5mmoL/L D-葡萄糖)、高糖组(HG组,30mmoL/L D-葡萄糖)、L-CT组(1μmoL/L CT+30mmoL/L D-葡萄糖处理GEC)、M-CT组(5μmoL/L CT+30mmoL/L D-葡萄糖处理GEC)、H-CT组(10μmoL/L CT+30mmoL/L D-葡萄糖处理GEC)和SIRT1-IN-1组(10μmoL/L CT+30mmoL/L D-葡萄糖+0.05moL/L Sirt1/FoxO1信号通路抑制剂SIRT1-IN-1处理GEC);MTT法检测CT对GEC细胞毒性和细胞活力的影响;ELISA法检测GEC炎症因子水平和氧化应激指标水平;流式细胞术检测GEC凋亡;Western blot法检测细胞中自噬、凋亡、纤维化因子和Sirt1/FoxO1通路相关蛋白表达。结果:0~40μmoL/L CT对GEC无明显毒性影响。与NR组相比,HG组OD 570值、SOD含量、Bcl-2、Beclin1、LC3-Ⅱ/Ⅰ、p-Sirt1/Sirt1、p-FoxO1/FoxO1蛋白水平显著下降(P<0.05),GEC凋亡率、Bax、cleaved-Caspase-3、Col-I、TGF-β1蛋白水平、IL-6、IL-8、TNF-α、MDA含量显著上调(P<0.05);与HG组相比,L-CT组、M-CT组、H-CT组增殖活性、自噬蛋白、通路蛋白水平显著升高(P<0.05),炎性反应、氧化应激、纤维化因子蛋白水平、凋亡率显著下降(P<0.05);SIRT1-IN-1消除了CT对GEC的有利影响。结论:CT可能通过上调Sirt1/FoxO1信号通路改善高糖诱导的GEC损伤。

SIRT1/FOXO1通路与骨质疏松关系的研究进展

骨质疏松症是一种以机体内骨量降低,骨结构被破坏,发生骨头易脆,甚至骨折的疾病。近年来随着对骨质疏松疾病研究地不断深入,发现多种蛋白以及通路发挥重要的作用。本文总结近年来SIRT1/FOXO1通路对骨质疏松症的影响,从氧化应激的角度阐述其通路发挥作用的机制,深层次揭示骨质疏松症的发病机制,为临床骨质疏松症的治疗及防治提供更多的思路。

三七总皂苷调控SIRT1/FOXO3a/p27通路抑制大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖

目的探讨三七总皂苷(PNS)通过SIRT1/FOXO3a/p27通路抑制大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖的作用。方法首先将PASMCs随机分为正常(Control)组和三七总皂苷(PNS)组、野百合碱(MCT)组和野百合碱+三七总皂苷(MCT+PNS)组,CCK8检测PNS对正常细胞的安全浓度,进一步检测PNS抑制增殖的最适浓度;为研究作用机制将PASMCs分为Control组、溶剂(DMSO组)组、MCT组、MCT+PNS组、MCT+PNS+SIRT1抑制剂(MCT+PNS+EX-527)组。造模结束,Edu检测细胞增殖;免疫荧光检测SIRT1、FOXO3a表达;qPCR检测细胞SIRT1、FOXO3a、p27、PCNA的表达。结果CCK8显示:0~400 mg·L^(-1)的PNS对正常细胞无毒(P>0.05),100 mg·L^(-1)的PNS可显著抑制MCT诱导的细胞增殖(P<0.01);Edu显示:MCT组较Control组增殖增多;MCT+PNS组较MCT组增殖减少;MCT+PNS+EX-527组较MCT+PNS组增殖增多。免疫荧光和qPCR显示:MCT组较Control组,SIRT1、FOXO3a、p27表达降低,PCNA表达增高;较MCT组,MCT+PNS组SIRT1、FOXO3a、p27表达增多,PCNA表达降低;较MCT+PNS组,MCT+PNS+EX-527组SIRT1、FOXO3a、p27表达降低,PCNA表达增高。结论PNS可通过SIRT1/FOXO3a/p27通路抑制大鼠PASMCs增殖。

芪白平肺胶囊通过调节SIRT1/FoxO3a通路改善COPD气虚痰瘀证大鼠炎症及氧化应激状态

目的探讨慢性阻塞性肺疾病(COPD)气虚痰瘀证大鼠的氧化应激及炎症反应与沉默信息调节因子1/叉头框转录因子O3a(SIRT1/FoxO3a)通路的调节及芪白平肺胶囊对其影响。方法雄性SD大鼠80只,随机分组为正常组、模型组、芪白平肺胶囊组及金水宝对照组,每组20只;采用复合因素建立COPD气虚痰瘀证病证结合大鼠模型,药物处理后,使用ELISA测定各组大鼠血清中超氧化物气化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、白细胞介素1β(IL-1β)、 IL-2的水平,荧光定量PCR检测大鼠肺组织SIRT1 mRNA及FoxO3a mRNA水平,采用Western blot法测量各组大鼠肺组织SIRT1及FoxO3a蛋白。结果与正常组比较,模型组的MDA、 IL-1β、 IL-2的水平显著升高、 SOD水平显著降低, SIRT1的mRNA和蛋白水平降低, FoxO3a的mRNA和蛋白水平升高;与金水宝对照组比较,芪白平肺胶囊组MDA、 IL-1β、 IL-2水平降低, SOD水平升高, SIRT1的mRNA和蛋白表达升高, FoxO3a的mRNA和蛋白表达降低。结论芪白平肺胶囊能够通过调节SIRT1/FoxO3a通路改善COPD气虚痰瘀证炎症及氧化应激状态。

SIRT1通过调节FOXO1/RAB7信号通路促进低氧诱导的胰腺癌细胞自噬

目的:探讨SIRT1对低氧诱导的胰腺癌细胞自噬的影响及FOXO1/RAB7信号通路在其中的作用。方法:利用Western blot和免疫荧光法检测SIRT1在低氧诱导的自噬胰腺癌细胞核内的表达情况。将下调 SIRT1 基因的小干扰RNA和过表达 SIRT1 的质粒转染到胰腺癌Panc-1细胞中,敲减和过表达 SIRT1 基因;激光共聚焦显微镜追踪双色LC3荧光蛋白表达,Western blot实验检测自噬相关蛋白LC3、p62及FOXO1/RAB7信号通路的蛋白表达情况。通过生物信息学GEPIA网站关联性分析预测SIRT1与FOXO1的相互作用,并进一步利用免疫共沉淀技术检测 SIRT1与FOXO1蛋白的相互作用。结果: SIRT1在低氧诱导的胰腺癌细胞核内表达增加。敲减SIRT1 的表达可以引起胰腺癌细胞自噬受抑制。过表达 SIRT1 能够增强Panc-1细胞中FOXO1和RAB7的蛋白表达水平( P <0.05),而当 SIRT1 表达下调时,FOXO1和RAB7表达受到抑制( P <0.05)。SIRT1与FOXO1蛋白存在相互作用。结论: SIRT1可能参与胰腺癌细胞自噬的调控,其机制可能与 FOXO1/RAB7信号通路有关。

豨莶草调控sirt1/FOXO1通路对膝骨关节炎大鼠软骨损伤的影响

目的:探讨豨莶草调控sirt1/FOXO1通路对膝骨关节炎大鼠软骨损伤的影响。方法:SD大鼠随机分组为对照组、模型组、豨莶草(2 g/kg)组、尼克酰胺(NA,sirt1抑制剂,剂量:100 mg/kg)组、豨莶草+尼克酰胺组(豨莶草为2 g/kg,NA为100 mg/kg)。除对照组外,其余各组以改良伸直位固定法建立膝骨关节炎大鼠模型,按组别分别以药物处理后,测量各组大鼠膝关节宽度、被动活动度;检测各组大鼠压痛阈值、热痛阈值;以苏木精-伊红染色(HE)观察各组大鼠膝关节软骨病理损伤情况,进行Mankin′s评分;以酶联免疫吸附(ELISA)试剂盒检测各组大鼠血清中IL-1β、肿瘤坏死因子(TNF-α)、软骨寡聚基质蛋白(COMP)水平;以蛋白免疫印迹法检测各组大鼠膝关节软骨组织sirt1、FOXO1、acely-FOXO1蛋白表达。结果:与对照组相比,模型组大鼠膝关节宽度、Mankin′s评分、血清中IL-1β、TNF-α及COMP水平、膝关节软骨组织中acely-FOXO1升高(P<0.05),膝关节被动活动度、压痛阈值、热痛阈值、膝关节软骨组织中sirt1蛋白表达降低(P<0.05)。与模型组相比,豨莶草组大鼠膝关节宽度、Mankin′s评分、血清中IL-1β、TNF-α及COMP水平、膝关节软骨组织中acely-FOXO1降低(P<0.05),膝关节被动活动度、压痛阈值、热痛阈值、膝关节软骨组织中sirt1蛋白表达升高(P<0.05);NA组大鼠膝关节宽度、Mankin′s评分、血清中IL-1β、TNF-α及COMP水平、膝关节软骨组织中acely-FOXO1升高(P<0.05),膝关节被动活动度、压痛阈值、热痛阈值、膝关节软骨组织中sirt1蛋白表达降低(P<0.05)。与豨莶草组相比,豨莶草+NA组大鼠膝关节宽度、Mankin′s评分、血清中IL-1β、TNF-α及COMP水平、膝关节软骨组织中acely-FOXO1升高(P<0.05),膝关节被动活动度、压痛阈值、热痛阈值、膝关节软骨组织中sirt1蛋白表达降低(P<0.05)。与NA组相比,豨莶草+NA组大鼠膝关节宽度、Mankin′s评分、血清中IL-1β、TNF-α及COMP水平、膝关节软骨组织中acely-FOXO1降低(P<0.05),膝关节被动活动度、压痛阈值、热痛阈值、膝关节软骨组织中sirt1蛋白表达升高(P<0.05)。结论:豨莶草可通过上调sirt1表达,下调FOXO1乙酰化水平,减轻膝骨关节炎大鼠软骨损伤。

葛根芩连汤对高脂诱导肝脏胰岛素抵抗小鼠SIRT1/FoxO1信号通路的影响

目的研究葛根芩连汤对高脂诱导胰岛素抵抗小鼠SIRT1/FoxO1信号通路的影响,探讨其在改善肝脏胰岛素抵抗的效果和作用机制。方法雄性C57BL/6J小鼠成模后,分为正常组,高脂模型组,葛根芩连汤高、低剂量组,吡格列酮组及联合用药组。正常组和高脂模型组予等体积的灭菌水,其余各组予对应药物,连续灌胃8周。期间观察小鼠体质量、血糖、甘油三酯,并计算HOMA-IR变化情况;肝脏组织HE染色,评估脂质沉积情况;Western blot检测SIRT1/FoxO1信号通路中各蛋白表达程度;qPCR检测肝脏组织SIRT1、FoxO1的mRNA的表达。结果同高脂模型组相比,葛根芩连汤各剂量组小鼠的体质量、甘油三酯、胰岛素水平及HOMA-IR均显著降低(P<0.01);肝脏病理切片显示,葛根芩连汤各剂量组和吡格列酮组肝脏空泡变性明显降低;葛根芩连汤各剂量组及吡格列酮组SIRT1mRNA表达较高脂模型组明显增加(P<0.05);与正常对照组相比,高脂模型组SIRT1、PPARγ蛋白表达水平明显降低(P<0.05~0.01),acely-FoxO1、FABP4蛋白表达水平升高(P<0.01),药物干预后,各组SIRT1、PPARγ蛋白表达水平明显升高(P<0.05~0.01),acely-FoxO1、FABP4蛋白表达降低(P<0.05~0.01)。结论葛根芩连汤可以通过上调SIRT1表达,减少FoxO1乙酰化水平,改善肝脏胰岛素抵抗。

SIRT1-FoxO-自噬通路研究进展

FoxO是一类重要自噬调控因子,其活性主要受SIRT1的去乙酰化调节。SIRT1-FoxO-自噬通路可能为糖尿病、衰老、肥胖、肿瘤、心血管疾病、肌肉萎缩等多种疾病提供新的防治策略。该文旨在分析FoxO的转录调节机制,综述SIRT1-FoxO-自噬通路的研究进展。

通络醒脑泡腾片经Nampt/SIRT1/FOXO3途径改善SAMP8小鼠的学习记忆

目的考察通络醒脑泡腾片(川芎、当归和黄芩)对SAMP8小鼠学习记忆的影响,探究其改善认知功能作用机制。方法将SAMP8小鼠药物干预60 d,采用Morris水迷宫评价其认知变化,随后采用ELISA法和免疫组化法分别测定脑组织超氧化物歧化酶(SOD)、羰基化蛋白、NAD^+/NADH和海马尼克酰胺磷酸核糖转移酶(Nampt)、沉默调节蛋白1(SIRT1)和叉头蛋白3(FOXO3)的表达。结果通络醒脑泡腾片能够缩短SAMP8小鼠在隐藏平台实验中第5天的逃避潜伏期和显著增加平台象限所占时间百分比,明显增加SAMP8小鼠在空间探索实验中进入目标象限次数;能够明显提升SAMP8小鼠脑组织SOD活力和NAD^+/NADH比值及降低羰基化蛋白浓度;能够显著上调SAMP8小鼠海马Nampt和SIRT1的表达,下调FOXO3的蛋白表达。结论通络醒脑泡腾片提高SAMP8小鼠认知功能与其调节海马Nampt/SIRT1/FOXO3途径有关。

白藜芦醇-Sirt1-Foxo1调控通路对缺氧心肌细胞的保护作用

目的研究白藜芦醇-Sirt1-Foxo1调控通路对缺氧心肌细胞的保护作用。方法将大鼠心肌细胞株H9C2培养48h后,随机分为5组,即20μmol/L白藜芦醇(resveratro,lRes)干预组、二甲基亚砜(dimethylsulfoxide,DMSO)对照组、40mmol/L尼克酰胺(nicotinamide,Nam)干预组、Nam空白对照组及正常对照组。培养24h后终止培养,用RT-PCR法和免疫细胞化学染色法检测Sirt1、Foxo1、p27、BimmRNA及其蛋白表达水平的变化;用TUNEL法及流式细胞仪(flowcytometer,FCM)分析细胞凋亡和细胞周期。结果20μmol/LRes干预组可使Sirt1mRNA及SIRT1蛋白表达的水平增加。Sirt1可通过抑制Foxo1mRNA的转录活性而调节其下游基因p27及Bim的表达。SIRT1的高表达可使细胞周期延长,细胞凋亡减少。结论Res干预可使SIRT1表达增加。Sirt1可能通过对Foxo1及其下游基因Bim、p27的调控,延长心肌细胞的细胞周期,减少其凋亡。

丙泊酚基于SIRT1/Foxo1信号缓解脑缺血再灌注造成血脑屏障损伤

目的:探究丙泊酚是否通过激活SIRT1/Foxo1信号通路对脑缺血再灌注损伤诱导血脑屏障破坏发挥保护作用。方法:48只大鼠随机分为假手术组(Sham组),脑缺血再灌注组(I/R组),脑缺血再灌注+丙泊酚组(I/R+Propofol组),脑缺血再灌注+丙泊酚+SIRT1抑制剂EX527组(I/R+Propofol+EX527组),每组各12只。通过大鼠脑缺血120min,再灌注24h建立脑缺血再灌注模型。EX527(5mg/kg)于手术前通过蛛网膜下腔注射。丙泊酚(10mg/kg)于脑缺血过程中,尾静脉注射。再灌注24h后评估神经功能、检测脑梗死体积、血脑屏障通透性、炎性细胞因子含量、紧密连接蛋白和SIRT1/Foxo1信号相关蛋白表达情况,并比较各组间的差异。结果:与Sham组相比,I/R组神经功能障碍评分升高,脑梗死体积增加,脑组织中伊文思蓝透过率增加。与I/R组相比,I/R+Propofol组神经功能障碍评分降低,脑梗死体积减少,伊文思蓝透过率降低,脑脊液中IL-1β、IL-6含量明显减少,缺血区基底层组织中SIRT1表达增加,Ac-Foxo1、NLRP3表达减少,紧密连接蛋白Claudin-1,Occludin与ZO-1表达增加(均P<0.05)。而I/R+Propofol+EX527组上述丙泊酚脑保护作用均减弱(P<0.05)。结论:丙泊酚对脑缺血再灌注过程中血脑屏障的完整性具有保护作用,其机制可能是其能激活SIRT1/Foxo1信号通路,抑制炎症反应,增加紧密连接蛋白表达。

右美托咪定调控Sirt1/FOXO1介导的自噬通路对抑郁症大鼠认知功能的影响

目的:探究右美托咪定(DEX)调控沉默信息调节因子1(Sirt1)/叉头框蛋白O1(FOXO1)介导的自噬通路对抑郁症大鼠认知功能的影响。方法:将50只SD大鼠随机分为对照组、模型组、低剂量(2.5μg/kg)DEX(DEX-L)组、高剂量(10μg/kg)DEX(DEX-H)组及DEX-H+EX-527组(10μg/kg DEX+50μg/kg SIRT1抑制剂EX527),每组10只;通过连续56 d对大鼠进行慢性不可预知温和刺激构建抑郁症模型,DEX-L组、DEX-H组及DEX-H+EX-527组大鼠于第29天起进行腹腔注射相应药物,对照组及模型组腹腔注射等体积生理盐水,每天1次,共28 d;采用糖水偏好实验、强迫游泳实验、旷场实验及Morris水迷宫实验评估大鼠抑郁行为和认知功能;苏木精-伊红(HE)染色和尼氏(Nissl)染色观察海马神经元损伤情况;Western blot检测海马组织中Sirt1/FOXO1通路相关蛋白、LC3和beclin-1表达情况;免疫组化法检测Sirt1/FOXO1通路相关蛋白表达情况。结果:相较于对照组,模型组大鼠糖水偏爱度、水平运动得分、垂直运动得分、穿越平台次数、神经元数目、LC3-II/LC3-I比值及beclin-1、Sirt1和FOXO1表达水平显著降低,不动时间(FSIT)、逃避潜伏期和海马病理损伤程度显著增加(P<0.05);相较于模型组,DEX-L组及DEX-H组糖水偏爱度、水平运动得分、垂直运动得分、穿越平台次数、神经元数目及LC3-II/LC3-I比值及beclin-1、Sirt1和FOXO1表达水平显著增加,FSIT、逃避潜伏期和海马病理损伤程度显著降低(P<0.05);相较于DEX-H组,DEX-H+EX-527组糖水偏爱度、水平运动得分、垂直运动得分、穿越平台次数、神经元数目LC3-II/LC3-I比值及beclin-1、Sirt1和FOXO1表达水平显著降低,FSIT、逃避潜伏期和海马病理损伤程度显著增加(P<0.05)。结论:DEX通过激活Sirt1/FOXO1通路来促进抑郁症大鼠海马神经元自噬,改善认知功能。

CTRP3通过激活SIRT1/FOXO3a途径减轻OGD/R诱导的心肌细胞损伤

目的:探究CTRP3在糖氧剥夺/再灌注(OGD/R)诱导的心肌细胞损伤中的作用及其可能的作用机制。方法:体外培养大鼠心肌细胞H9c2,OGD/R诱导H9c2细胞损伤。qRT-PCR法检测细胞CTRP3、SIRT1和FOXO3a mRNA表达;Western blot检测细胞CTRP3、SIRT1、FOXO3a、Bax、Bcl-2和cleaved caspase-3蛋白表达,CCK-8检测细胞存活,流式细胞术检测细胞凋亡,检测细胞CK-MB、cTnI、SOD和MDA活性、GSH-Px含量及ROS的产生。结果:与Control组相比,OGD/R组细胞中CTRP3、SIRT1和FOXO3a mRNA以及蛋白表达,细胞存活率、Bcl-2蛋白表达、SOD和GSH-Px活性明显降低,细胞凋亡率、Bax和cleaved caspase-3蛋白表达、CK-MB、cTnI和MDA含量、ROS荧光强度明显升高(P<0.05)。OGD/R组与oe-NC组细胞各指标比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与oe-NC组相比,oe-CTRP3组细胞中CTRP3、SIRT1和FOXO3a mRNA以及蛋白表达,细胞存活率、Bcl-2蛋白表达、SOD和GSH-Px活性明显升高(P<0.05),细胞凋亡率、Bax和cleaved caspase-3蛋白表达、CKMB、cTnI和MDA含量、ROS荧光强度明显降低(P<0.05)。与oe-CTRP3组相比,oe-CTRP3+EX527组细胞中SIRT1、FOXO3a和Bcl-2蛋白表达、细胞存活率、SOD和GSH-Px活性明显降低,细胞凋亡率、Bax和cleaved caspase-3蛋白表达、CK-MB、cTnI和MDA含量、ROS荧光强度明显升高(P<0.05)。与oe-CTRP3+EX527组相比,oe-CTRP3+EX527+oe-FOXO3a组细胞中FOXO3a和Bcl-2蛋白表达,细胞存活率、SOD和GSH-Px活性明显升高,细胞凋亡率、Bax和cleaved caspase-3蛋白表达、CKMB、cTnI和MDA含量、ROS荧光强度明显降低(P<0.05)。结论:CTRP3通过激活SIRT1/FOXO3a途径促进OGD/R诱导的心肌细胞存活,抑制细胞凋亡和氧化应激。

SIRT1/FOXO3a/p27信号通路在白藜芦醇抑制肺动脉平滑肌细胞增殖中的作用

目的探讨白藜芦醇(RES)是否通过影响沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)/叉头蛋白O3a(FOXO3a)/p27信号通路抑制肺动脉平滑肌细胞(PASMC)增殖,为肺动脉高压新药研发提供一定的理论和实验依据。方法体外培养大鼠PASMC并随机分为三组,对照组不处理,5-HT刺激组加1μmol/L 5-HT,不同浓度RES干预组在加入5-HT前用10、30、100、300μmol/L RES预处理1 h,作用24 h后采用BrdU掺入法检测各组细胞增殖情况并筛选RES作用浓度;为研究机制进一步将PASMCs分为六组,对照组、5-HT刺激组、RES干预组(筛选出的RES作用浓度)处理同前,RES+SIRT1抑制剂干预组、RES+FOXO3a抑制剂干预组在加入1μmol/L 5-HT前用RES分别联合1μmol/L EX527、AS1842856预处理1 h,RES+p27 siRNA转染组在加入1μmol/L 5-HT前预先转染p27 siRNA 24 h后联合RES;作用24 h后采用BrdU掺入法检测各组细胞增殖情况,采用Western blotting法检测对照组、5-HT刺激组、RES干预组、RES+SIRT1抑制剂干预组的FOXO3a、p27蛋白及RES+FOXO3a抑制剂干预组的p27蛋白。结果PASMC增殖率5-HT刺激组高于对照组,100、300μmol/L RES干预组均低于5-HT刺激组(P均<0.05),故以100μmol/L作为后续实验中RES干预的作用浓度。PASMC增殖率5-HT刺激组高于对照组,RES干预组低于5-HT刺激组;RES+SIRT1抑制剂干预组、RES+FOXO3a抑制剂干预组、RES+p27 siRNA转染组均高于RES干预组(P均<0.05),三组间差异无统计学意义。PASMC中FOXO3a、p27蛋白表达量5-HT刺激组均低于对照组,RES干预组均高于5-HT刺激组,RES+SIRT1抑制剂干预组均低于RES干预组(P均<0.05);RES+FOXO3a抑制剂干预组p27蛋白表达量低于RES干预组(P<0.05)。结论RES可通过激活SIRT1上调FOXO3a,进而上调细胞周期抑制蛋白p27,最终抑制PASMC增殖。