补阳还五汤通过SIRT1/NF-κB p65信号通路减轻大鼠脑缺血/再灌注损伤

目的:探讨补阳还五汤(BYHWD)通过调控沉默信息调节因子1(SIRT1)/核因子κB p65(NF-κB p65)炎症信号通路减轻大鼠脑缺血/再灌注损伤(CIRI)的作用机制。方法:SD大鼠随机分为假手术(sham)组、模型组(MCAO/R组)、BYHWD组、SIRT1抑制剂组(EX527组)和BYHWD+EX527组,每组15只。除sham组外,其余各组均构建大脑中动脉栓塞(MCAO)模型缺血2 h再灌注3 d并给予药物干预。采用ZeaLonga评分标准进行神经功能缺损评分;TTC染色检测脑梗死体积百分比;HE染色观察脑组织病理学变化;Westernblot检测SIRT1、乙酰化核因子κB p65(AcNF-κB p65)、NF-κB p65、和白细胞介素6(IL-6)蛋白的相对表达量;免疫荧光检测NF-κB p65入核表达水平;免疫组化染色检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达水平。结果:与sham组相比,MCAO/R组神经功能学评分升高(P<0.05);脑梗死体积百分比增加(P<0.05);缺血侧脑组织皮质区病理损伤严重,神经细胞排列紊乱、细胞核固缩、碎裂;SIRT1蛋白表达减少,AcNF-κB p65/NF-κB p65和IL-6蛋白表达升高(P<0.05);免疫荧光显示细胞核内NF-κB p65表达增多(P<0.05);免疫组化显示TNF-α阳性表达升高(P<0.05)。与MCAO/R组相比,BYHWD组神经功能学评分降低(P<0.05);脑梗死体积百分比减小(P<0.05);缺血侧脑组织皮质区病理损伤减轻,神经细胞形态有所恢复;SIRT1蛋白表达增加,AcNF-κB p65/NF-κB p65和IL-6蛋白表达减少(P<0.05);免疫荧光显示细胞核内NF-κB p65表达减少(P<0.05);免疫组化显示TNF-α阳性表达减少(P<0.05)。SIRT1抑制剂EX527能降低SIRT1的表达,抑制脱乙酰酶活性,削弱了BYHWD通过激活SIRT1后对CIRI产生的上述作用。结论:BYHWD可有效减轻大鼠CIRI,激活SIRT1/NF-κB p65信号通路进而抑制炎症反应是其发挥作用的机制之一。

风咳汤通过SIRT1/NF-κB/NLRP3信号通路减轻咳嗽变异性哮喘大鼠气道炎症

目的探讨风咳汤对咳嗽变异性哮喘(CVA)大鼠气道炎症及肺功能的改善作用及机制。方法采用卵蛋白(OVA)和氢氧化铝混合物1 mL皮下注射致敏后再以雾化的OVA激发哮喘建立CVA大鼠模型,分别给予风咳汤低剂量、高剂量和地塞米松进行治疗,正常对照组与模型组灌胃相应体积生理盐水。Diff-Quick法进行肺泡灌洗液(BALF)中炎症细胞计数,ELISA法检测各组大鼠BALF上清液中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)、白细胞介素-17(IL-17)、白细胞介素-22(IL-22)含量;观察大鼠肺组织病理学变化;检测大鼠肺组织中SIRT1/NF-κB/NLRP3信号通路中的相关蛋白和基因表达水平;检测肝组织中Caspase-1的活性。结果与正常组比较,模型组大鼠炎症细胞数量、炎症因子含量和HE染色显示的病理改变都显著升高,SIRT1表达水平下降,NF-κB、NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β和IL-18的蛋白水平和mRNA水平显著升高(P<0.05)。与模型组相比,风咳汤高剂量可以显著降低炎症细胞数和炎症因子含量,改善肺组织的病理改变,升高SIRT1的表达水平同时降低NF-κB、NLRP3、ASC和IL-1β的蛋白水平及mRNA水平,其作用与地塞米松相当。此外,风咳汤还可以降低Caspase-1的活性。结论风咳汤可以通过SIRT1/NF-κB/NLRP3信号通路有效改善CVA大鼠气道炎症,改善肺功能。

栀子苷调节AMPK/SIRT1/NF-κB信号通路对急性呼吸窘迫综合征大鼠肺损伤的影响

目的:探讨栀子苷(GE)通过调节AMP活化蛋白激酶(AMPK)/沉默信息调节因子1(SIRT1)/核因子κB(NF-κB)信号通路对急性呼吸窘迫综合征(ARDS)大鼠肺损伤的影响。方法:通过气管滴注脂多糖(LPS)方法建立ARDS大鼠模型。将建模后的50只大鼠随机分为ARDS组、GE低剂量(GE-L,12.5 mg/kg GE)组、GE中剂量(GE-M,25 mg/kg GE)组、GE高剂量(GE-H,50 mg/kg GE)组、GE-H+Compound C(AMPK抑制剂,50 mg/kg GE+250μg/kg Compound C)组,另取10只正常大鼠为对照组。干预后,分别取出各组大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)及肺组织,检测肺湿干重比(W/D);ELISA法检测BALF中炎症因子IL-6、干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;免疫组化法检测肺组织中血管细胞黏附因子(VCAM-1)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)阳性表达;HE染色观察肺组织病理变化;Western blot检测肺组织中AMPK/SIRT1/NF-κB通路蛋白表达水平。结果:ARDS组W/D、IFN-γ、IL-6、TNF-α水平、p-NF-κB p65/NF-κB p65、VCAM-1表达较对照组显著升高,p-AMPK/AMPK、SIRT1、VEGF表达显著降低(P<0.05);经不同剂量GE治疗后,W/D、IFN-γ、IL-6、TNF-α水平、p-NF-κB p65/NF-κB p65、VCAM-1表达较ARDS组逐渐降低;p-AMPK/AMPK、SIRT1、VEGF表达逐渐升高(P<0.05);Compound C逆转了GE-H组对ARDS大鼠的保护作用(P<0.05)。结论:GE可以改善ARDS大鼠肺损伤状况,降低炎症因子水平,可能与激活AMPK/SIRT1/NF-κB信号通路有关。

辣椒素调节SIRT1/HMGB1/NF-κB信号通路对LPS诱导的小胶质细胞炎症反应的影响

目的:探究辣椒素调节沉默交配型信息调节因子2同源蛋白1(SIRT1)/高迁移率族蛋白(HMGB1)/核因子κB(NF-κB)信号通路对脂多糖(LPS)诱导的小胶质细胞炎症反应的影响。方法:体外培养BV2小鼠小胶质细胞,分别用辣椒素(10μmol/L)、SIRT1抑制剂EX527(100μmol/L)、辣椒素+EX527(10μmol/L辣椒素+100μmol/L EX527)预处理3 h,然后用LPS(1μg/mL)处理24 h,对应分组为LPS组、LPS+辣椒素组、LPS+EX527组、LPS+辣椒素+EX527组,另设置正常培养的对照组(Control),显微镜下观察各组BV2细胞形态变化;CCK-8法检测各组BV2细胞活力;免疫荧光染色检测各组BV2细胞离子钙接头蛋白(Iba-1)阳性表达情况及M1(CD16/32染色阳性)/M2(CD206染色阳性)亚型极化情况;ELISA检测各组BV2细胞炎症因子水平;Western blot、免疫共沉淀检测各组SIRT1/HMGB1/NF-κB信号通路相关蛋白表达。结果:与Control组比较,LPS组BV2细胞胞体萎缩,突起变短,细胞活力及IL-1β、TNF-α、IL-6水平升高,Iba-1阳性表达BV2细胞、M1型BV2细胞增加,SIRT1蛋白表达减少,乙酰化(ace)-HMGB1蛋白、胞浆HMGB1蛋白、核NF-κB蛋白表达增加(P<0.05);经辣椒素预处理,上述情况均改善,同时M2型BV2细胞增加;在辣椒素预处理的基础上增加EX527预处理,上述情况均加重。结论:辣椒素能够抑制LPS诱导的BV2细胞活化引发的炎症反应,其可能通过调节SIRT1/HMGB1/NF-κB信号通路实现。

黄芩苷对干酵母致热大鼠的解热作用及血清TNF-α、IL-1β、IL-6、PGE_(2)、cAMP和脑组织NF-κB表达的影响

目的:观察黄芩苷对干酵母致热大鼠的解热作用并探讨其作用机制。方法:采用背部皮下注射干酵母构建大鼠发热模型,SD雄性大鼠随机分为正常对照,模型组,阳性组(阿司匹林,0.1 g/kg),黄芩苷高、中、低剂量组(160、80、40 mg/kg),连续给药3 d,测定各组大鼠肛温的变化;酶联免疫法(ELISA)检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、前列腺素E_(2)(PGE_(2))与环磷酸腺苷(cAMP)水平;Western Blot检测各组大鼠脑组织NF-κB p65(核转录因子-κB p65)蛋白表达。结果:黄芩苷高剂量组有显著解热效果(P<0.01),黄芩苷各剂量组均可不同程度降低大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6、PGE 2和cAMP含量;与正常组比较,模型组脑组织NF-κB p65蛋白表达增多,黄芩苷高剂量组可明显降低大鼠脑组织NF-κB p65表达(P<0.05)。结论:黄芩苷可显著性降低干酵母引起的体温升高,解热机制可能与抑制TNF-α、IL-1β、IL-6、PGE_(2)与cAMP的分泌和减少脑组织NF-κB p65蛋白表达有关。

NF-κB p65通过miR-150/TRPC6信号通路改善肾缺血再灌注损伤

目的 探究NF-κB(nuclear transcription factor-κB, NF-κB)p65通过miR-150/瞬时受体电位阳离子通道6(transient receptor potential cation channel 6, TRPC6)信号通路促进肾缺血再灌注损伤的作用。方法 选取2022年8月—2023年8月由齐齐哈尔医学院医药科学研究院购买的60只雄性大鼠作为研究对象,将体质量相似的大鼠按照随机数字表法随机分为3组:假手术实验组(Sham组,n=10)、缺血/再灌注(ischemic/reperfusion, I/R)I/R实验组(n=10)、慢病毒实验组(n=40),其中慢病毒实验组分为miR-150-mimic组(n=10)、I/R+miR-150-mimic组(n=10)、NF-κB p65-si组(n=10)、I/R+NF-κB p65-si组(n=10)。评估各组大鼠肾组织中血清肌酐(creatinine, Cr)和血尿素氮(blood urea nitrogen, BUN)、炎性因子、miR-150、NF-κB p65、TRPC6的水平。结果 I/R实验组与Sham组比较,NF-κB p65、miR-150蛋白水平降低(0.26±0.02 vs 0.79±0.03、0.34±0.08vs 1.46±0.12),TRPC6蛋白水平下降(0.35±0.04 vs. 1.08±0.15),差异有统计学意义(t=46.484、24.558、8.603,P均<0.05)。与I/R实验组相比,I/R+miR-150-mimic组TRPC6水平升高,而炎症因子水平更低,I/R+NF-κB p65-si组miR-150水平更高,炎症因子水平升高,差异有统计学意义(P均<0.05)。结论 NF-κB p65通过调节miR-150/TRPC6信号通路影响肾功能及炎症,改善肾缺血再灌注损伤。

珍宝丸介导NF-κB/p65通路对脊髓损伤大鼠的神经保护作用

目的探讨珍宝丸对脊髓损伤大鼠的神经保护作用及相关机制。方法60只SD大鼠随机均分为对照组、模型组和珍宝丸组,对照组大鼠仅暴露脊髓,模型组和珍宝丸组大鼠均构建脊髓损伤模型。造模成功后,珍宝丸组大鼠给予口服0.6 g/kg珍宝丸干预治疗,间隔24 h给药1次,持续给药28 d,对照组和模型组大鼠则给予相同剂量的生理盐水灌胃。采用巴索·比蒂·布雷斯纳汉(BBB)评分法评估干预治疗前和治疗后4周各组大鼠运动行为学变化;实验结束取大鼠脊髓组织标本,通过HE染色和TUNEL染色法观察评估大鼠脊髓组织病理学变化及神经细胞凋亡情况;通过qRT-PCR法检测炎症因子TNF-α、IL-6和IL-10的表达情况;采用Western blot法检测核因子κB(NF-κB)/p65通路相关蛋白的表达情况。结果干预治疗后4周,模型组大鼠BBB评分低于对照组,珍宝丸组大鼠BBB评分高于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05)。对照组大鼠脊髓组织结构、形态正常;模型组大鼠脊髓组织结构紊乱,有明显出血、坏死、水肿,大量炎性细胞浸润;珍宝丸组大鼠脊髓组织病变程度较模型组明显减轻。珍宝丸组脊髓组织细胞凋亡数较模型组减少,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,模型组脊髓组织中TNF-α和IL-6表达升高,IL-10表达下降,差异均有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,珍宝丸组脊髓组织中TNF-α和IL-6表达显著降低,IL-10表达显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。模型组大鼠脊髓组织中NF-κB/p65和p-NF-κB/p65蛋白表达均较对照组上调,差异有统计学意义(P<0.05);珍宝丸组大鼠脊髓组织中NF-κB/p65和p-NF-κB/p65蛋白表达均较模型组下调,差异有统计学意义(P<0.05)。结论珍宝丸治疗能够有效改善脊髓损伤大鼠行为学症状,减轻其病理变化,具有神经保护作用,其作用机制可能与阻断NF-κB/p65通路、抑制炎症因子表达有关。

白术内酯Ⅲ调节AMPK/SIRT1/NF-κB信号通路对脓毒症大鼠肝损伤的影响

目的探究白术内酯Ⅲ(AtractylideneⅢ,Atr-Ⅲ)对脓毒症大鼠肝损伤的影响以及对腺苷酸激活蛋白激酶(AMPK)/去乙酰化酶1(SIRT1)/核因子-κB(NF-κB)信号通路的调节作用。方法将60只SPF级SD雄性大鼠分为假手术组、模型组、阳性组、Atr-Ⅲ低、高剂量组、Atr-Ⅲ高剂量+AMPK抑制剂组。检测大鼠血清中谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)水平;苏木素-伊红(HE)染色观察肝组织的病理变化;TUNEL染色检测肝细胞凋亡情况;ELISA检测血清白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;检测肝组织超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)的活性;Western blot检测通路相关蛋白表达情况。结果与假手术组相比,模型组大鼠肝细胞损伤严重,AST、ALT、IL-1β、IL-6、TNF-α水平、细胞凋亡率、p65 NF-κB磷酸化表达均升高,SOD、CAT活性、AMPK磷酸化、SIRT1蛋白表达均降低(P<0.05);与模型组相比,阳性组和Atr-Ⅲ组大鼠肝细胞形态恢复,AST、ALT、IL-1β、IL-6、TNF-α水平、细胞凋亡率、p65 NF-κB磷酸化表达均降低,SOD、CAT水平、AMPK磷酸化、SIRT1蛋白表达均升高(P<0.05)。AMPK抑制剂BML-275消除了高剂量ATL-Ⅲ对脓毒症大鼠肝损伤的缓解作用。结论Atr-Ⅲ可以激活AMPK/SIRT1信号通路,抑制p65 NF-κB活化,减轻脓毒症大鼠的肝损伤。

青蒿鳖甲汤加减治疗癌性发热疗效及对NF-κB p65蛋白、IL-6、IL-10、TNF-α的影响

目的 探讨青蒿鳖甲汤加减治疗癌性发热疗效及对核因子κB p65(Nuclear factor-kappaBp65,NF-kappaB p65)蛋白、白细胞介素-10(Interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-6(interleukin-10,IL-10)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α,TNF-α)的影响。方法 选取诊治的癌性发热患者100例,随机分为对照组与观察组,每组50例,对照组常规西药治疗,观察组采用青蒿鳖甲汤加减治疗,治疗时间7 d,观察退热效果、治疗前血清总NF-κB p65蛋白及活性NF-κB p65蛋白、IL-6、IL-10、TNF-α变化。结果 观察组体温开始下降时间、体温恢复正常时间短于对照组,每次退热持续时间长于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);两组治疗前血清总NF-κB p65蛋白及活性NF-κB p65蛋白水平比较差异无统计学意义(P>0.05),治疗均下降,且观察组下降幅度大于对照组,比较差异有统计学意义(P<0.05);两组治疗前血清IL-6、IL-10、TNF-α水平比较差异无统计学意义(P>0.05),治疗均下降,且观察组下降幅度大于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组不良反应发生率为18.00%(9/50)、对照组为14.00%(7/50),差异无统计学意义(P>0.05);观察组治疗疗效整体优于对照组(P<0.05),治疗总有效率为96.00%(48/50),高于对照组的80.00%(40/50)(P<0.05)。结论 青蒿鳖甲汤加减治疗癌性发热退热效果显著,能够缩短患者体温恢复正常的时间,改善NF-κB p65蛋白、IL-6、IL-10、TNF-α水平。

TPPU通过抑制p38 MAPK/NF-κB p65信号通路对阿尔茨海默病细胞模型的抗神经炎症作用

目的在Aβ25-35诱导的阿尔茨海默病(AD)小胶质细胞(BV2细胞)模型中,采用对BV2细胞进行干预,探讨1-三氟甲氧基苯基-3-(1-丙酰哌啶-4-基)脲(TPPU),TPPU是否具有抗神经炎症作用及其可能的抗炎机制。方法利用Aβ25-35作用BV2细胞构建AD细胞模型,CCK8法分别检测不同浓度Aβ25-35和TPPU处理对BV2细胞活性的影响,最终选择20μM Aβ25-35诱导BV2细胞48 h作为造模组,0.1μM TPPU预处理BV2细胞3h,20μM Aβ25-35诱导BV2细胞48 h作为治疗组进行后续实验。利用ELISA法检测丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性,倒置荧光显微镜检测活性氧(ROS)产生,real-time PCR检测小胶质细胞M1表型促炎因子肿瘤坏死因子(TNF)、白细胞介素-1β(IL-1β)基因mRNA表达水平和检测M2表型抗炎因子IL-10及标志物Arg1基因mRNA表达水平。通过Western blot法检测细胞中炎症因子TNF-α蛋白及p38 MAPK/NF-κB p65信号通路相关蛋白表达水平。结果与对照组相比,模型组BV2细胞活力降低(P<0.05),ROS显著升高(P<0.05),MDA含量显著增多(P<0.05),SOD活性显著下降(P<0.05),TNF mRNA、IL-1βmRNA表达水平明显上调(P<0.05),IL-10 mRNA、Arg1 mRNA表达水平明显下调(P<0.05),TNF-α蛋白及p-p38 MAPK、p-NF-κB p65蛋白表达明显上调(P<0.05)。与模型组相比,经TPPU预处理后,BV2细胞活力明显升高(P<0.05),ROS显著降低(P<0.05),MDA含量显著下降(P<0.05),SOD活性显著提高(P<0.05),TNF mRNA、IL-1βmRNA表达水平明显下调(P<0.05),IL-10 mRNA、Arg1 mRNA表达水平明显上调(P<0.05),TNF-α蛋白及p-p38 MAPK、p-NF-κB p65蛋白表达明显下调(P<0.05)。结论TPPU抑制Aβ25-35诱导的BV2细胞炎症反应,促进BV2细胞由M1表型向M2表型极化,其机制可能与抑制p38MAPK/NF-κB p65信号通路激活有关。

藤黄健骨胶囊通过SIRT1/NF-κB/NLRP3信号通路调节绝经后骨质疏松大鼠破骨细胞分化

目的:探讨藤黄健骨胶囊(TJC)对绝经后骨质疏松大鼠沉默信息调节因子1(SIRT1)/核因子κB(NF-κB)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)信号通路关键蛋白表达的影响及分子机制。方法:采用随机数字表法将SD雌性大鼠分为假手术组,模型组[卵巢切除术(OVX)组],SIRT1抑制剂组(EX-527+OVX组),阳性药物戊酸雌二醇(ESV)对照组(ESV+OVX组),以及高、中、低剂量TJC处理组(TJC-H+OVX、TJC-M+OVX和TJCL+OVX组),每组10只。OVX建模,建模成功后给予TJC或ESV干预,并根据实验设计给予EX-527干预,8周后取材。ELISA法检测相关炎症因子水平;双重免疫荧光染色分别检测SIRT1、NF-κB p65和NLRP3蛋白;RT-qPCR和Western blot分别检测SIRT1/NF-κB/NLRP3信号通路相关分子和破骨分化标志分子的mRNA和蛋白水平。结果:与假手术组相比,OVX组和EX-527+OVX组大鼠血清中白细胞介素1β(IL-1β)、IL-18和肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量显著升高(P<0.01),破骨细胞NF-κB p65及NLRP3表达荧光面积显著增大(P<0.01),股骨组织NF-κB p65、NLRP3和活化T细胞核因子胞浆1型(NFATc1)mRNA及蛋白水平显著升高(P<0.01),而破骨细胞SIRT1表达荧光面积显著减小(P<0.01);与OVX组相比,高剂量TJC处理组大鼠血清IL-1β含量和股骨组织NLRP3蛋白表达水平均显著降低,中、高剂量TJC处理组大鼠血清IL-18含量及股骨组织NF-κB p65和NFATc1蛋白表达水平均显著降低,低、中、高剂量TJC处理组大鼠血清TNF-α含量、破骨细胞NF-κB p65和NLRP3表达荧光面积、股骨组织NF-κB p65、NLRP3及NFATc1 mRNA水平均显著降低,而破骨细胞SIRT1表达荧光面积显著增大(P<0.05);与EX-527+OVX组相比,高剂量TJC处理组大鼠股骨组织NLRP3蛋白表达水平显著降低,中、高剂量TJC处理组大鼠血清IL-1β及IL-18含量、股骨组织NF-κB p65和NFATc1蛋白表达水平均显著降低,低、中、高剂量TJC处理组血清TNF-α含量、破骨细胞NF-κB p65和NLRP3表达荧光面积、股骨组织NF-κB p65、NLRP3及NFATc1 mRNA水平均显著降低,而破骨细胞SIRT1表达荧光面积显著增大(P<0.05)。结论:TJC能够抑制绝经后骨质疏松模型大鼠破骨细胞分化,其作用机制可能与抑制SIRT1/NF-κB/NLRP3信号通路激活、减轻炎症反应有关。

抗奥合剂通过p38 MAPK/NF-κB信号通路和ACE2/Ang1-7/Mas轴缓解急性肺损伤研究

目的探讨抗奥合剂(KAHJ)治疗小鼠急性肺损伤(ALI)的作用及机制,为其可能作为缓解新型冠状病毒(COVID-19)感染后症状的药物提供依据。方法采用网络药理学方法预测KAHJ治疗ALI的主要活性成分、潜在靶点和相关信号通路。将C57BL/6J小鼠随机分为对照组、LPS组和LPS+KAHJ组。LPS+KAHJ组小鼠灌胃KAHJ(4.76 g·kg^(-1)·d^(-1),8.8 mL·kg^(-1)·d^(-1)),其余组小鼠灌胃生理盐水(8.8 mL·kg^(-1)·d^(-1))。14 d后,腹腔注射LPS(5 mg·kg^(-1))诱导ALI模型。收集小鼠血清和肺组织,通过组织病理学观察肺组织的病理变化。采用Western blot、qPCR、ELISA和IHC等方法评估KAHJ对ALI的改善作用。结果通过网络药理学筛选出疾病和药物共同的70个核心靶基因,并显示与多个信号通路密切相关,如MAPK、NF-κB、Apoptosis、COVID-19和肾素-血管紧张素系统(Ras)信号通路等。此外,通过实验验证发现KAHJ能改善小鼠ALI后的炎症和细胞凋亡,减少肺损伤和肺水肿,抑制肺纤维化。同时,KAHJ的作用机制与p38 MAPK和NF-κB的磷酸化以及ACE2/Ang1-7/Mas轴的调控也有着密切关系。结论KAHJ可能通过抑制p38 MAPK/NF-κB信号通路和调控ACE2/Ang1-7/Mas轴缓解ALI,为缓解COVID-19感染后症状提供了补充和替代药物。

调脾安肠方对裸鼠结肠癌肝转移灶miR-34a-5p、Notch1/NF-κB表达的影响

目的探讨调脾安肠方对裸鼠结肠癌肝转移(colorectal cancer liver metastasis,CLM)灶组织中MicroRNA-34a-5p(miR-34a-5p)及其靶基因Notch1/核转录因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)通路表达的影响。方法选取30只雄性Balb/c裸鼠随机分为空白组、模型组、中药组,每组10只。脾脏原位注射HCT-116人结肠癌细胞(细胞数约为1×107个/mL)法构建CLM模型。中药组在CLM造模完成2周后开始调脾安肠方(2 g/mL,每日0.2 mL)灌胃2周,空白组和模型组同期予等体积0.9%生理盐水灌胃。苏木素—伊红染色观察肝转移灶病理组织形态;蛋白免疫印迹法测定肝转移灶Notch1、NF-κB p65蛋白水平;实时荧光定量PCR测定肝转移灶miR-34a-5p及Notch1、NF-κB p65 mRNA水平。结果与模型组比较,中药组裸鼠镜下病理转移灶面积明显减小,核分裂像减少,提示调脾安肠方抑制了结直肠癌细胞在肝脏的定植和迁移。与空白组比较,模型组肝转移灶中miR-34a-5p含量显著降低(P<0.01),Notch1、NF-κB p65蛋白表达升高(均P<0.05),Notch1、NF-κB p65的mRNA表达显著升高(均P<0.01)。与模型组比较,中药组Notch1蛋白及mRNA表达降低(P<0.05),NF-κB p65的mRNA表达显著降低(P<0.01)。miR-34a-5p与Notch1 mRNA在结肠癌肝转移灶组织中表达水平呈负相关(r^(2)=0.8845,P<0.05),Notch1与NF-κB p65在结肠癌肝转移灶组织中mRNA表达水平呈显著正相关(r^(2)=0.9291,P<0.01)。结论中药复方调脾安肠方能抑制裸鼠结肠癌肝转移灶形成,其机制可能与通过抑癌基因miR-34a-5p靶向负性调节Notch1/NF-κB通路表达有关。

归原疏筋合剂治疗腰椎间盘突出症的临床疗效及对血清NF-κB p65表达水平的影响

【目的】探究归原疏筋合剂治疗腰椎间盘突出症(LDH)患者的临床疗效及其可能的作用机制。【方法】将68例气滞血瘀证LDH患者随机分为试验组和对照组,每组各34例。对照组给予塞来昔布及甲钴胺片内服治疗,试验组在对照组的基础上加用归原疏筋合剂内服治疗,疗程为4周。观察2组患者治疗前后腰痛和下肢痛视觉模拟量表(VAS)评分、Oswestry功能障碍指数(ODI)评分、改良日本骨科协会(JOA)评分以及血清炎症因子[肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素1β(IL-1β)]和血清核因子κB p65(NF-κB p65)水平的变化情况,并评价2组患者的临床疗效和用药安全性。【结果】(1)脱落情况方面,研究过程中,试验组脱落1例,对照组脱落3例,最终试验组33例、对照组31例纳入疗效统计。(2)疗效方面,治疗4周后,试验组的总有效率为96.97%(32/33),对照组为87.10%(27/31);组间比较(秩和检验),试验组的疗效明显优于对照组(P<0.05)。(3)量表评分方面,治疗后,2组患者的腰痛及下肢痛VAS评分、ODI评分均较治疗前降低(P<0.05或P<0.01),改良JOA评分均较治疗前升高(P<0.01),且试验组对腰痛及下肢痛VAS评分、ODI评分的降低幅度及对改良JOA评分的升高幅度均明显优于对照组(P<0.05或P<0.01)。(4)血清炎症相关指标方面,治疗后,2组患者血清TNF-α、IL-6、IL-1β、NF-κB p65水平均较治疗前降低(P<0.01),且试验组的降低幅度均明显优于对照组(P<0.01)。(5)安全性方面,治疗过程中,试验组的不良事件发生率为2.94%(1/34),对照组为8.82%(3/34),组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。【结论】归原疏筋合剂治疗气滞血瘀证LDH患者疗效确切,可有效缓解患者疼痛症状,改善患者腰椎功能,降低血清炎症因子及NF-κB p65表达水平,其作用机制可能与降低炎症因子水平,抑制NF-κB信号通路的活化有关。

Liu-Jun-Zi decoction alleviates chemotherapy-induced anorexia by regulating gut microbiota and TLR4/MyD88/NF-κB p65 signaling pathway

Background:Liu-Jun-Zi decoction(LJZD),a classical nourishing formula in China,has been proven to be effective in treating chemotherapy-induced anorexia.In this study,the mechanism of LJZD in alleviating chemotherapy-induced anorexia was discussed from the aspects of regulating gut microbiota,repairing intestinal barrier injury and inhibiting inflammatory pathways.Methods:A rat model of chemotherapy-induced anorexia was established using cisplatin.The study evaluated the therapeutic effects of LJZD by observing the weight,food intake,and intestinal pathology of rats.The impact of LJZD on gut microbiota and metabolites,specifically short-chain fatty acids,was investigated through gut microbiota analysis and targeted metabolomics.The anti-inflammatory and intestinal protective effects of LJZD were assessed by examining the expression of intestinal tight junction proteins associated with the inflammatory pathway.Results:LJZD alleviated cisplatin-induced inflammation and intestinal barrier disruption,as evidenced by upregulated expression of tight junction protein 1(TJ-1)and occludin,along with reduced serum levels of interleukin 6(IL-6),interleukin-1β(IL-1β),tumor necrosis factor-α(TNF-α),and lipopolysaccharide.Additionally,LJZD alleviated microbiota imbalance and regulated the levels of short-chain fatty acids,especially increased the relative abundance of Coriobacteriales Incertae Sedis,Lactabacillus johnsonii F19785,Parasutterella,and reduced the Tyzzerella.In the hypothalamus,LJZD exerts suppressive effects on the toll-like receptor 4(TLR4)/myeloid differentiation factor 88(MyD88)/nuclear factor-κB(NF-κB)p65 signaling pathway,leading to a downregulation in the transcriptional activity of IL-6 and IL-1β,as well as Interleukin 6 receptors(IL-6R)and Interleukin-1βreceptors(IL-1R1)mRNA expression levels.Conclusion:In summary,LJZD alleviate chemotherapy-induced anorexia by modulating the gut microbiota,repairing the intestinal mechanical barriers,and suppressing the TLR4/MyD88/NF-κB p65 signaling pathway.

隔三七饼灸调节AMPK/SIRT1/NF-κB信号通路对创伤性骨关节炎大鼠软骨损伤的影响

目的探究隔三七饼灸调节AMPK/SIRT1/NF-κB信号通路对创伤性骨关节炎(TOA)大鼠软骨损伤的影响。方法随机把SD大鼠分为假手术(sham)组、TOA组、隔三七饼灸组、扶他林组、隔三七饼灸+AMPK抑制剂(Compound C)组,采用经典Hulth方法复制TOA模型,HE染色和番红-固绿染色观察软骨组织病理改变,并进行Mankin’s评分;免疫组化检测软骨组织中Ⅱ型胶原蛋白(CollagenⅡ)阳性表达情况;利用试剂盒检测软骨组织中炎性介质[(一氧化氮(NO),白介素-1β(IL-1β),肿瘤坏死因子α(TNF-α);基质金属蛋白酶-1、3(MMP-1.3)]水平;Western Blot、免疫共沉淀检测软骨组织中AMPK/SIRT1/NF-κB信号通路相关蛋白表达情况。结果与Sham组比较,TOA组软骨组织发生明显病变,软骨层变薄,表面出现裂隙样破坏,软骨细胞大量减少、排列紊乱,蛋白多糖明显丢失,Mankin’s评分增高;CollagenⅡ阳性表达下降,NO、IL-1β、TNF-α、MMP-1、MMP-3水平增高(P<0.05);经隔三七饼灸、扶他林干预后,上述情况均得到改善,且隔三七饼灸干预改善更明显;在隔三七饼灸干预的同时给予AMPK抑制剂干预,隔三七饼灸的改善作用被削弱。与Sham组比较,TOA组软骨组织中AMPK磷酸化蛋白、SIRT1蛋白表达下降,NF-κB乙酰化蛋白、核NF-κB蛋白表达增高(P<0.05);经隔三七饼灸干预后,上述蛋白表达情况明显改善;在隔三七饼灸干预的同时给予AMPK抑制剂干预,隔三七饼灸的改善作用被削弱。结论隔三七饼灸能够减轻TOA大鼠软骨损伤,可能与调节AMPK/SIRT1/NF-κB信号通路有关。

葛根素减轻LPS诱导的小鼠急性肾损伤:基于调节SIRT1/NF-κB信号通路

目的探讨SIRT1/NF-κB信号通路在葛根素抗脂多糖(LPS)所致急性肾损伤(AKI)中的作用及机制。方法将15只BALB/C小鼠随机分为3组:对照组,LPS组,葛根素组。对照组小鼠腹腔注射生理盐水4 d;LPS组小鼠第1天注射LPS(5 mg/kg),随后注射生理盐水3 d,葛根素组小鼠第1天注射LPS(5 mg/kg)1 h后注射葛根素(25 mg/kg),继续注射葛根素3 d,第5天收集标本,观察小鼠肾组织形态变化,细胞凋亡情况;测定肾功能指标尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)和肾损伤分子1(KIM-1)以及炎症因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素1β(IL-1β);检测肾组织SIRT1和NF-κB-p65(acetyl K310)的表达。结果与对照组相比,LPS组小鼠肾小球毛细血管扩张、充血,肾间质水肿,肾小管上皮细胞肿胀,变形脱落,肾小管损伤评分增加(P<0.01),肾组织细胞凋亡率增加(P<0.01),血清中BUN、Scr、KIM-1、TNF-α和IL-1β升高(P<0.01),肾组织TNF-α、IL-1βmRNA和NF-κB p65(acetyl K310)表达增加(P<0.01),而SIRT1表达降低了17%(P<0.05)。与LPS组相比,葛根素处理后肾间质水肿减轻,肾小管上皮细胞脱落不明显,肾小管损伤评分、肾组织细胞凋亡率降低(P<0.01),血清中BUN、Scr、KIM-1、TNF-α和IL-1β降低(P<0.01),肾组织TNF-α和IL-1βmRNA以及NF-κB p65(acetyl K310)表达降低了(P<0.05),SIRT1表达增加了17%(P<0.05)。结论葛根素能够减轻LPS所致AKI,其机制可能与SIRT1/NF-κB信号通路有关。

QRICH1介导NF-κB p65调控Bcl-2、Bax在砷致肝癌细胞凋亡中的作用研究

目的:探讨砷(AS)诱导肝癌细胞凋亡过程中QRICH1通过调控NF-κB p65表达水平调控Bcl-2、Bax的作用机制。方法:体外培养人的肝癌细胞(HepG2细胞),采用慢病毒转染的方式,构建过表达/敲低QRICH1稳定表达HepG2细胞株。分为对照组、加砷组、砷+QRICH1过表达阴性对照组、砷+QRICH1过表达组、砷+QRICH1敲低阴性对照组、砷+QRICH1敲低组。在细胞对数生长期时,加入40μmol/L亚砷酸钠(NaAsO_(2))作为终浓度处理24 h。对照组加入与NaAsO_(2)同等体积的磷酸缓冲盐溶液(PBS)处理。采用细胞计数(CCK-8)检测细胞增殖情况;流式细胞术检测各组细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组细胞QRICH1、NF-κB p65及Bcl-2、Bax蛋白表达水平。结果:CCK-8结果显示与对照组比较,砷处理组增殖率比例明显降低(P<0.05);与砷+QRICH1过表达阴性对照组比较,砷+QRICH1过表达组细胞增殖率明显上升(P<0.05),与砷+QRICH1敲低阴性对照组比较,砷+QRICH1敲低组细胞增殖率明显下降(P<0.05),差异具有统计学意义。流式细胞术结果显示与对照组比较,砷处理组总凋亡率比例明显升高(P<0.05);与砷+QRICH1过表达阴性对照组比较,砷+QRICH1过表达组细胞总凋亡率比例明显下降(P<0.05),与砷+QRICH1敲低阴性对照组比较,砷+QRICH1敲低组细胞总凋亡率比例明显上升(P<0.05)。蛋白免疫印迹法结果显示与对照组比较,砷处理组QRICH1、NF-κB p65及Bcl-2蛋白表达水平较低,Bax的蛋白表达水平较高(P<0.05)。与砷+QRICH1过表达阴性对照组比较,砷+QRICH1过表达组QRICH1、NF-κB p65及Bcl-2蛋白表达水平较高,Bax的蛋白表达水平较低(P<0.05)。与砷+QRICH1敲低阴性对照组比较,砷+QRICH1敲低组QRICH1、NF-κB p65及Bcl-2蛋白表达水平较低,Bax的蛋白表达水平较高(P<0.05),差异具有统计学意义。结论:砷致HepG2凋亡过程中,QRICH1通过调节NF-κB p65的表达,进而影响了Bcl-2、Bax的表达。提示QRICH1可能是促进肝癌细胞凋亡的潜在作用靶点。

miR-9-5p通过SIRT1/NF-κB通路促进胰腺癌细胞凋亡的实验研究

目的探讨miR-9-5p通过调控SIRT1及NF-κB表达对胰腺癌细胞(PANC-1)凋亡相关基因Caspase-3表达的影响。方法使用miR-9-5p mimic慢病毒转染人胰腺癌PANC-1细胞建立稳转株(mimic组),空载体转染作为阴性对照组(NC组),以未处理的PANC-1细胞作为空白对照组(空白组)。采用qRT-PCR检测PANC-1细胞中miR-9-5p、SIRT1及Caspase-3 mRNA的表达水平;Western Blot检测SIRT1、NF-κB通路相关蛋白及Caspase-3蛋白表达量;ELISA检测细胞裂解液中SIRT1及Caspase-3蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验明确miR-9-5p和SIRT1的靶向关系;Pearson相关分析确定miR-9-5p、SIRT1及Caspase-3 mRNA表达的相互关系。结果mimic组miR-9-5p mRNA表达较对照组明显升高,结果有统计学意义,提示转染成功。与空白组及NC组相比,mimic组SIRT1 mRNA及蛋白表达水平下调(P<0.01),p-NF-κB p65与NF-κB p65上调(P<0.01),Caspase-3 mRNA及蛋白表达水平上调(P<0.01)。双荧光素酶报告基因显示miR-9-5p可抑制野生型SIRT1细胞的荧光活性,miR-9-5p可靶向调控SIRT1的表达;Pearson相关分析发现miR-9-5p和SIRT1的表达水平呈负相关(r=-0.849,P<0.05);miR-9-5p和Caspase-3的表达水平呈正相关(r=0.796,P<0.05)。结论过表达miR-9-5p可促进PANC-1细胞凋亡相关基因Caspase-3的表达,其机制可能与靶向调控SIRT1继而调节NF-κB通路有关,这将为胰腺癌的诊断及治疗提供新的思路。

茶黄素调节AMPK/SIRT1/NF-κB信号通路对膝骨关节炎大鼠的治疗作用

目的:探讨茶黄素调节腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/沉默信息调节因子1(SIRT1)/核因子-κB(NF-κB)信号通路对膝骨关节炎(KOA)大鼠的治疗作用。方法:向63只SD大鼠右膝关节注射50μL的碘乙酸钠(MIA)0.01mg/μL制备KOA大鼠模型,另取13只大鼠仅膝关节注射生理盐水作为空白组,两周后随机从造模和空白组挑选3只大鼠,进行HE染色、Mankin和lequesne MG评分,以鉴定KOA模型是否制备成功。剩余造模成功大鼠随机分为模型组、茶黄素低剂量组(20mg/kg茶黄素)、茶黄素中剂量组(40mg/kg茶黄素)、茶黄素高剂量组(80mg/kg茶黄素)、塞来昔布组(18mg/kg阳性药塞来昔布)、抑制剂组(80mg/kg茶黄素+0.2mg/kg AMPK抑制剂Compound C)。茶黄素低、中、高剂量组以及塞来昔布组灌胃相应剂量药物,空白组和模型组灌胃等体积的蒸馏水,抑制剂组除灌胃相应剂量茶黄素外还需尾静脉注射相应剂量Compound C,每天1次,连续给药4周。在第15天(造模后1天),第29天(给药第14天)和第43天(给药第28天)检测大鼠机械疼痛阈值和大鼠关节宽度;观察大鼠行为学变化,进行lequesne MG评分;HE染色观察软骨组织病理变化并进行Mankin评分;试剂盒测定血清炎症因子(IL-1β、TNF-α和COMP)以及氧化应激标志物(SOD和MDA)水平;Western Blot检测AMPK/SIRT1/NF-κB信号通路相关蛋白表达。结果:与空白组相比,造模大鼠膝关节细胞排列紊乱,表面粗糙,排列不均匀,软骨细胞数量减少,潮痕不明显,并且Mankin和lequesne MG评分显著升高表明KOA大鼠造模成功。与空白组相比,第15天时,模型组、茶黄素低、中、高剂量组、塞来昔布组和抑制剂组大鼠疼痛阈值显著降低,关节宽度显著增加(P<0.05);与空白组相比,模型组大鼠软骨层较薄,大鼠足底肿胀,HE染色不均匀,细胞排列紊乱,表面粗糙,裂隙均匀,排列不均匀,软骨细胞数量减少,潮痕不明显,Mankin和lequesne MG评分、血清IL-1β、TNF-α、COMP和MDA水平以及软骨组织p-NF-κB p65/NF-κB p65水平显著升高(P<0.05),血清SOD水平和软骨组织p-AMPKα/AMPKα、SIRT1表达水平均显著降低(P<0.05);与模型组相比,茶黄素低、中、高剂量组以及塞来昔布组大鼠疼痛阈值显著升高,关节宽度减少,大鼠足底肿胀减轻,软骨表面损伤轻微,染色更均匀,软骨细胞可见,Mankin和lequesne MG评分、血清IL-1β、TNF-α、COMP和MDA水平以及软骨组织p-NF-κB p65/NF-κB p65水平显著降低(P<0.05),血清SOD水平和软骨组织p-AMPKα/AMPKα、SIRT1表达水平均显著升高(P<0.05);AMPK抑制剂减弱了茶黄素对KOA大鼠的治疗作用。结论:茶黄素通过调节AMPK/SIRT1/NF-κB信号通路对KOA大鼠起治疗作用。