SRT2104对小鼠糖尿病肾病发病机制及SIRT1/P53/NRF2通路的影响

目的研究SRT2104对糖尿病肾病(DN)小鼠肾功能、肾纤维化、肾炎症及肾氧化应激的影响,并探讨其影响机制。方法将36只雄性BABL/c小鼠随机均分为3组:对照组、DN组和DN+S组,后两组小鼠通过连续5 d腹腔注射50 mg/kg的链脲佐菌素建立DN小鼠模型,之后DN+S组小鼠给予含有SRT2104的饮食喂养24周。最后检测各组小鼠的血糖及肾功能指标,以及肾皮质中肾纤维化、肾炎症及肾氧化应激相关指标和SIRT1/P53/NRF2通路分子的水平。结果DN组和DN+S组的血糖均高于对照组(P<0.05),但DN组和DN+S组组间对比无显著差异。DN组小鼠的尿白蛋白和尿肌酐的比率(UACR)、肾重量/胫骨长度、尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)和血β2-微球蛋白(β2-MG)的数值均显著高于对照组(P<0.05),DN+S组显著低于DN组(P<0.05)。DN组小鼠肾皮质中纤维化指标转化生长因子β1(TGF-β1)和结缔组织生长因子(CTGF)的表达、炎症指标纤溶酶原激活剂抑制剂-1(PAI-1)和VCAM-1的表达和氧化应激指标诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、活性氧(ROS)和丙二醛(MDA)的水平均显著高于对照组(P<0.05),DN+S组显著低于DN组(P<0.05)。DN+S小鼠肾皮质中SIRT1和NRF2的表达均显著高于DN组(P<0.05),P53乙酰化程度低于DN组(P<0.05)。结论SRT2104可降低DN小鼠肾纤维化、肾炎症及肾氧化应激,改善肾损伤,其机制与SIRT1/P53/NRF-2通路的激活有关。

金合欢素通过调节Sirt1介导的AMPK/Nrf2信号通路改善肺炎链球菌感染引起的肺泡上皮细胞损伤

目的:探讨金合欢素通过调节沉默信息调节因子相关酶1(Sirt1)介导的5'-磷酸腺苷激活的蛋白激酶(AMPK)/核因子E2相关因子2(Nrf2)信号通路对肺炎链球菌(SP)感染引起的肺泡上皮细胞损伤的影响。方法:SP感染体外培养的肺泡上皮细胞A549建立细胞损伤模型,采用终浓度分别为0、5、25、50、100、150、200μmol/L的金合欢素处理,CCK-8检测各处理组细胞活力并筛选金合欢素最佳作用浓度。体外培养的A549细胞随机分为5组:对照组、模型组、金合欢素(150μmol/L)组、EX527(Sirt1抑制剂,40μmol/L)组、金合欢素(150μmol/L)+EX527组(40μmol/L),对照组不进行处理,其余各组以SP感染建立细胞损伤模型,150μmol/L金合欢素和40μmol/L EX527分别处理,CCK-8、流式细胞术分别检测各组细胞活力与凋亡率;试剂盒检测各组细胞活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)水平及IL-10、IL-1β、TNF-α水平;免疫印迹法检测各组细胞增殖相关蛋白Ki-67、增殖细胞核抗原(PCNA)、凋亡相关蛋白caspase-9、Bax表达、Sirt1与AMPK/Nrf2信号通路蛋白p-AMPK/AMPK、Nrf2表达。结果:与对照组比较,模型组A549细胞活力、SOD、IL-10水平、p-AMPK/AMPK、Sirt1、Nrf2、Ki-67与PCNA蛋白表达降低(P<0.05),凋亡率、MDA、LDH、ROS水平、IL-1β、TNF-α水平升高(P<0.05)。与模型组、金合欢素+EX527组分别比较,金合欢素组A549细胞活力、SOD、IL-10水平、p-AMPK/AMPK、Sirt1、Nrf2、Ki-67与PCNA蛋白表达均升高(P<0.05),凋亡率、MDA、LDH、ROS、IL-1β、TNF-α水平均降低(P<0.05);EX527组A549细胞活力、SOD、IL-10水平、p-AMPK/AMPK、Sirt1、Nrf2、Ki-67与PCNA蛋白表达均降低(P<0.05),凋亡率、MDA、LDH、ROS、IL-1β、TNF-α水平均升高(P<0.05)。结论:金合欢素可通过上调Sirt1表达激活AMPK/Nrf2信号,进而促进抗炎因子分泌,减少ROS和促炎因子产生,减轻炎症与氧化应激,最终缓解神经元损伤。

藤黄健骨胶囊通过SIRT1/PGC-1α/Nrf2信号通路抑制绝经后骨质疏松大鼠成骨细胞凋亡

藤黄健骨胶囊可以提高绝经后骨质疏松模型鼠的骨密度来改善其骨微结构损害,但具体机制尚未阐明。本文主要研究藤黄健骨胶囊抑制绝经后骨质疏松症大鼠成骨细胞凋亡与SIRT1/PGC-1α/Nrf2信号通路的关系,旨在探讨藤黄健骨胶囊对绝经后骨质疏松症的作用机制。采用去卵巢法建立绝经后骨质疏松大鼠模型,分别给予藤黄健骨胶囊(0.09、0.18、0.36 g/kg)灌胃,连续干预8周后进行指标检测。采用TUNEL染色观察股骨组织凋亡情况,结果发现,藤黄健骨胶囊各剂量组股骨组织凋亡阳性细胞和凋亡率均减少(P<0.01)。采用双重免疫荧光染色观察股骨组织成骨细胞中SIRT1、PGC-1α和Nrf2表达水平表达情况,结果发现,藤黄健骨胶囊中、高剂量组成骨细胞PGC-1α表达荧光面积明显升高,各剂量组成骨细胞SIRT1和Nrf2表达荧光面积也明显升高(P<0.01)。qPCR和Western印迹检测股骨组织SIRT1、PGC-1α、Nrf2、Runx2、Bcl-2、Caspase-3和Caspase-9的mRNA表达水平和翻译水平变化,结果显示,藤黄健骨胶囊中、高剂量组股骨组织Runx2 mRNA水平和蛋白质水平、Nrf2蛋白质水平均明显升高,Caspase-9蛋白质水平明显下降,各剂量组股骨组织SIRT1、PGC-1α、Bcl-2 mRNA水平和蛋白质水平、Nrf2 mRNA水平也均明显升高,而其各剂量组股骨组织Caspase-3mRNA水平、蛋白质水平和Caspase-9 mRNA水平均则明显降低(P<0.01)。综上,本研究初步揭示了藤黄健骨胶囊对绝经后骨质疏松模型鼠成骨细胞凋亡的抑制与SIRT1/PGC-1α/Nrf2信号通路有关,SIRT1可能是调控成骨细胞凋亡的重要靶点。

HRD1、P53、HER2水平与乳腺浸润性导管癌临床病理特征的关系

目的研究HRD1、P53,HER2与乳腺浸润性导管癌临床病理特征的关系。方法选取确诊并实施相关治疗的82例乳腺癌患者为此次试验的对象,收集全部患者的癌旁组织以及癌组织石蜡切片,应用免疫组织化学EliVi-sion两步法比较癌旁组织以及癌组织中HRD1、P53、HER2水平,分析HRD1、P53、HER2与乳腺浸润性导管癌临床病理特征的相关性。结果癌组织中HRD1(χ^(2)=5.502,P=0.019)、P53(χ^(2)=6.552,P=0.011)、HER2(χ^(2)=5.512,P=0.023)的阳性表达率显著高于癌旁组织;脉管侵犯有无、不同肿瘤直径、TNM不同分期以及淋巴结是否发生转移患者的P53、HRD1、HER2表达水平存在差异(P<0.05);相关性分析发现,患者的肿瘤直径、脉管侵犯、TNM分期以及淋巴结转移情况与患者的HRD1、P53、HER2水平呈正相关。结论HRD1、P53、HER2与乳腺浸润性导管癌临床病理特征呈现显著的相关性,可作为日后治疗的重要靶点。

干预自噬调控p62-Keap1/Nrf2-GPX4通路对结直肠癌细胞铁死亡及奥沙利铂耐药的影响

目的探讨干预自噬对结直肠癌细胞铁死亡和奥沙利铂(OXA)耐药的影响及分子机制。方法培养人结直肠癌HCT-8、COLO205、HCT-116、SW620和SW480细胞系,筛选LC3表达适中的HCT-116细胞,检测其与OXA耐药HCT-116/OXA细胞株LC3、p62、Keap1、Nrf2、GPX4蛋白及Fe^(2+)、GSH、MDA的表达差异,并应用自噬和铁死亡干预剂并联合OXA干预HCT-116/OXA细胞株,检测LC3、p62、Keap1、Nrf2、GPX4蛋白及Fe^(2+)、GSH、MDA的表达,CCK-8实验检测各组细胞的增殖活性及对OXA的敏感性,平板克隆、Transwell实验检测各组细胞的生长情况和侵袭能力。结果5组细胞中HCT-116细胞的LC3、p62和GPX4均呈中等表达量;与HCT-116细胞相比,HCT-116/OXA细胞对OXA敏感性较低,且p62、Nrf2、GPX4蛋白呈高表达,LC3和Keap1呈低表达,Fe^(2+)、GSH、MDA表达水平均增高(P<0.05);自噬激活剂Rapa组及Rapa+Fer-1组较Fer-1组和对照组的LC3、Keap1蛋白及Fe^(2+)、MDA水平均升高,而p62、Nrf2、GPX4蛋白及GSH水平呈低表达,且Rapa+Fer-1组GPX4蛋白、GSH的水平低于Rapa组(P<0.05)。在自噬抑制剂组中,CQ组及CQ+Erastin组与对照组和Erastin组相比其LC3、p62、Nrf2、GPX4蛋白及GSH水平均呈高表达,Keap1蛋白、Fe^(2+)、MDA均呈低表达,而Erastin组GPX4蛋白、GSH表达低于其余三组,Fe^(2+)、MDA含量高于其余三组(P<0.05)。自噬激活剂联合应用OXA,Rapa干预组与其余三组相比,其对OXA的化学敏感性高、迁移细胞数量少、细胞增殖活性低;Rapa+Fer-1组对OXA的敏感性低于Rapa组,但高于Fer-1组和对照组(P<0.05)。而Fer-1组与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。自噬抑制剂联合应用OXA,Erastin、CQ+Erastin和CQ三组与对照组相比其细胞活性、迁移能力和克隆形成能力均降低,其中Erastin组最低,而CQ+Erastin组高于Erastin组、低于CQ组(P<0.05)。结论在结直肠癌中,自噬参与了铁死亡的调节,干预自噬可通过p62-Keap1/Nrf2-GPX4通路调控结直肠癌细胞发生铁死亡,从而逆转OXA耐药。

SIRT1/Nrf2/HO-1通路在七氟烷后处理改善失血性休克复苏小鼠空间学习与记忆障碍中的作用

目的探究沉默信息调节因子1(silent information regulation 1,SIRT1)/核因子E2相关因子2(nuclear transcription factor E2 related factor 2,Nrf2)/血红素加氧酶-1(heme oxygenase 1,HO-1)通路在七氟烷后处理减轻脑缺血/再灌注小鼠认知功能损伤中的作用。方法将♂C57BL/6J小鼠随机分为:假手术组、失血性休克复苏组、七氟烷后处理组、七氟烷后处理+SIRT1抑制剂组、七氟烷后处理+Nrf2抑制剂组,建立脑缺血/再灌注模型。水迷宫检验小鼠学习记忆能力;检测海马组织ATP、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、活性氧、丙二醛含量;Western blot检测海马SIRT1、Nrf2和HO-1蛋白表达。结果再灌注后小鼠学习记忆能力降低,海马SOD、ATP含量降低,丙二醛、活性氧含量升高,SIRT1、Nrf2和HO-1蛋白表达降低;七氟烷处理后减轻了再灌注后小鼠记忆障碍和氧化应激;加用SIRT1和Nrf2抑制剂后,减弱了七氟烷对小鼠认知障碍和氧化损伤的保护作用。结论七氟烷后处理可能通过SIRT1/Nrf2/HO-1通路对失血性休克复苏引起的小鼠学习记忆障碍起到保护作用,机制与其抑制氧化应激反应相关。

PGC-1α/Nrf1介导的线粒体生物合成通路在H_(2)O_(2)诱导的心肌细胞衰老中的作用机制

目的探究PGC-1α/Nrf1介导的线粒体生物合成通路在H_(2)O_(2)诱导的心肌细胞衰老中的作用及可能机制。方法培养H9c2心肌细胞,根据实验设计分为对照组、衰老组、PGC-1α激活组,Western blotting检测心肌细胞中p21、p53、PGC-1α、Nrf1的蛋白水平,RT-qPCR检测心肌细胞中p21、p53、PGC-1α、Nrf1的mRNA水平,免疫荧光染色检测p53与PGC-1α共表达水平,试剂盒检测心肌细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)及腺苷三磷酸(ATP)水平,线粒体膜电位(ΔΨm)检测试剂盒检测ΔΨm。结果与对照组相比,衰老组心肌细胞中衰老标志蛋白p21、p53蛋白及mRNA水平增加,线粒体生物合成通路蛋白PGC-1α、Nrf1蛋白及mRNA水平减少;与衰老组相比,PGC-1α激活组p21、p53蛋白及mRNA水平减少,PGC-1α、Nrf1蛋白及mRNA水平增加(P均<0.05)。与对照组相比,衰老组心肌细胞SOD、GSH含量减少,MDA、ROS含量增加,细胞ΔΨm下降,ATP含量减少;与衰老组相比,PGC-1α激活组SOD、GSH含量增加,MDA、ROS含量减少,ΔΨm增加,ATP含量增加(P均<0.05)。结论PGC-1α/Nrf1介导的线粒体生物合成通路在H_(2)O_(2)诱导的心肌细胞衰老中发挥重要作用,激活PGC-1α/Nrf1通路可通过改善氧化应激水平改善心肌细胞的衰老。

右美托咪定调控p62/Keap1/Nrf2信号轴对LPS诱导大鼠肝脏损伤的保护机制研究

目的 探究右美托咪定(Dexmedetomidine,Dex)调控自噬受体蛋白p62/Kelch样ECH相关蛋白-1(Kelch-like ECH-associated protein 1,Keap1)/核因子E2相关因子2(Nuclear factor E2 related factor 2,Nrf2)(p62/Keap1/Nrf2)通路对脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导大鼠肝脏损伤的保护作用机制。方法 选取SD大鼠50只,随机将大鼠分为5组,分别为空白对照组(Sham组)、LPS诱导肝脏损伤模型组(LPS组)、LPS诱导+Dex干预组(Dex组)、Keap1/Nrf2信号轴抑制剂组(KI696组)、LPS诱导+Dex干预+KI696组(Dex+KI696组)。统计各组大鼠干预后血清、肝功能因子,包括总胆固醇(Total cholesterol,TC)、总血脂(Total glyceride,TG)、丙氨酸氨基转移酶(Alanine transaminase,ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(Aspartate aminotransferase,AST),肝组织炎症因子白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-8(Interleukin-8,IL-8)、白细胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α),氧化应激指标丙二醛(Malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽(Glutathione,GSH)、过氧化氢酶(Catalase,CAT)水平差异。HE染色分析各组大鼠肝脏组织病理形态;Western-blot检测各组大鼠肝脏组织p62/Keap1/Nrf2信号轴关键蛋白p62、Keap1、Nrf2,铁死亡关键蛋白前列腺素内过氧化物合酶(Prostaglandin endoperoxide synthase,PTGS2)、谷胱甘肽过氧化物酶4(Glutathione peroxidase 4,GPX4)、铁蛋白基因(Recombinant human ferritin heavy chain,FTH1)表达。结果 与Sham组相比,LPS组p62、TC、TG、ALT、AST、IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α、MDA、PTGS2表达升高,Keap1、Nrf2、SOD、GSH、CAT、GPx4、FTH1表达降低(P<0.05)。与LPS组相比,Dex组p62、TC、TG、ALT、AST、IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α、MDA、PTGS2表达降低,Keap1、Nrf2、SOD、GSH、CAT、GPx4、FTH1表达升高(P<0.05);KI696组Keap1、PTGS2、SOD、GSH、CAT、GPx4、FTH1表达降低,Nrf2、TC、TG、ALT、AST、IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α、MDA表达升高(P<0.05)。与KI696组相比,Dex+KI696组Keap1、PTGS2、SOD、GSH、CAT、GPx4、FTH1表达升高(P<0.05)。结论 右美托咪定通过抑制p62活性,激活Keap1/Nrf2通路活性发挥抗氧化应激损伤、抗炎症反应作用,减缓铁死亡程度,达到保护肝组织的作用。

雷公藤甲素调控SIRT2/p53信号通路诱导肺癌A549细胞凋亡

目的 体外培养肺腺癌(lung adenocarcinoma,LUAD)细胞A549,采用不同浓度雷公藤甲素(triptolide,TP)干预,研究其通过SIRT2通路诱导肺癌细胞凋亡的作用机制,为临床治疗肺腺癌患者提供新的策略和思路。方法 采用qRT-PCR检测不同浓度(0 nmol/L、60 nmol/L、80 nmol/L)TP对A549细胞中SIRT2相关基因表达水平;不同浓度TP对A549细胞中SIRT2相关蛋白的影响,采用Western Blot法检测。结果 基因表达水平检测结果显示,TP(60 nmol/L、80 nmol/L)与对照组TP(0 nmol/L)相比,SIRT2、MDM2、P300表达下调。同时,p53基因表达上调。Western Blot蛋白水平检测结果,TP(60 nmol/L、80 nmol/L)与对照组TP(0 nmol/L)相比,SIRT2、P300、MDM2蛋白在A549细胞中表达下降,p53蛋白表达上调,p53信号通路的Bcl-2蛋白表达抑制,增加Bax蛋白表达。结论 TP能够通过调控SIRT2/p53通路相关蛋白表达抑制肺腺癌细胞增殖并诱导其凋亡。

Hp、RASAL2、CDH1及TP53对胃癌前病变与早期胃癌的鉴别诊断价值

目的探讨幽门螺杆菌(Hp)、RAS蛋白激活样因子2(RASAL2)、钙黏蛋白1(CDH1)及肿瘤抑制基因P53(TP53)对胃癌前病变与早期胃癌的鉴别诊断价值。方法选取2021年6月至2023年6月收治的早期胃癌52例,根据1:1选例原则另选取同期胃癌前病变52例、胃炎52例,分别纳入胃癌组、癌前组、胃炎组。比较3组及不同病理特征的早期胃癌患者Hp、RASAL2、CDH1、TP53阳性表达率,比较胃癌组Hp阳性、阴性患者RASAL2、CDH1、TP53阳性表达率,采用Spearman相关分析探讨各指标阳性表达与早期胃癌患者部分病理特征的相关性,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析联合检测对早期胃癌及胃癌前病变的鉴别诊断价值。结果3组Hp、CDH1、TP53阳性表达率胃癌组>癌前组>胃炎组,RASAL2阳性表达率胃癌组<癌前组<胃炎组,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。胃癌组Hp阳性患者CDH1、TP53阳性表达率高于Hp阴性患者,RASAL2阳性表达率低于Hp阴性患者(P<0.05,P<0.01);早期胃癌患者Hp、RASAL2、CDH1、TP53阳性表达率在肿瘤浸润深度及淋巴结转移方面比较差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。Hp、CDH1、TP53阳性表达与早期胃癌肿瘤浸润深度、淋巴结转移均呈正相关,RASAL2阳性表达与之呈负相关(P<0.01)。ROC曲线分析结果显示,Hp、RASAL2、CDH1、TP53联合诊断胃癌前病变的曲线下面积(AUC)为0.904(95%CI:0.846,0.945),联合诊断早期胃癌的AUC为0.894(95%CI:0.819,0.946)。结论Hp、CDH1、TP53在早期胃癌组织中阳性表达率较高,RASAL2阳性表达率较低,联合检测对胃癌前病变及早期胃癌具有一定鉴别诊断价值,可作为临床鉴别诊断胃癌前病变、早期胃癌的辅助指标。

亚慢性铝暴露致大鼠认知障碍的Sirt1-Keap1/Nrf2信号通路机制

目的:观察亚慢性铝暴露对大鼠海马沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,Sirt1)、Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白(Kelch-like ECH-associated protein-1,Keap1)、核因子E2相关因子2(nuclear factor E2-related factor2,Nrf2)和微小RNA-128-3p(miR-128-3p)表达水平的影响,探讨miR-128-3p和Sirt1-Keap1/Nrf2信号通路在铝致大鼠认知障碍中的机制。方法:选取32只6周龄SPF级健康雄性SD大鼠,体重(190±20)g,按体质量随机分为4组:对照组、低剂量(10μmol/kg)组、中剂量(20μmol/kg)组和高剂量(40μmol/kg)组,每组8只。腹腔注射麦芽酚铝建立大鼠染毒模型。染毒结束后,Morris水迷宫实验来检验大鼠的学习记忆能力,Western blot检测大鼠海马组织中Sirt1、Keap1和Nrf2蛋白的表达,RT-qPCR检测海马组织miR-128-3p的表达,冰冻切片荧光染色检测大脑皮层活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平。结果:(1)在定位巡航实验中,第3、4和5天铝暴露组大鼠的逃避潜伏期均显著高于对照组(P<0.05)。第6天,高剂量组与对照组和低剂量组相比穿越平台和平台象限的次数均减少(P<0.01)。(2)各组大鼠海马组织中Sirt1和Nrf2的相对表达水平随着麦芽酚铝暴露剂量的增加逐渐降低;Keap1的相对表达水平随着麦芽酚铝暴露剂量的增加逐渐升高,且高剂量组中miR-128-3p相对表达水平显著高于对照组(P<0.05)。(3)随着染毒剂量的增加,大鼠海马中谷胱甘肽过氧化物酶的含量逐渐减少,ROS水平逐渐升高。结论:亚慢性铝暴露可激活大鼠海马中miR-128-3p的表达,抑制Sirt1-Keap1/Nrf2通路,使Sirt1-Keap1/Nrf2通路不能被激活发挥抗氧化能力,大鼠的抗氧化系统失衡,导致大鼠神经细胞氧化损伤,表现为大鼠的认知功能降低。

Nrf2与p53/p21信号通路在肿瘤中作用的研究进展

氧化应激普遍存在于肿瘤发生和发展的病理过程中。转录因子红细胞系-2p45相关因子-2(NF-E2 p45-related factor 2,Nrf2)信号通路是人体内重要的抗氧化机制,其产物保护机体的细胞免受毒性和氧化性损伤,对癌症的治疗具有重要的价值。肿瘤抑制基因p53能显著促进细胞周期调控因子p21转录活性,p53/p21信号通路是控制细胞周期进程以及调节肿瘤细胞凋亡的核心调控途径。然而,目前有关Nrf2和p53/p21信号通路在肿瘤中的相互调控机制尚未完全阐明。本文将从Nrf2信号通路的组成,p53/p21信号通路的结构与功能,Nrf2信号通路与p53/p21信号通路相互调控对肿瘤的作用关系以及相关抗肿瘤药物的研究进展等方面进行阐述。

基于Keap1/Nrf2/NLRP3炎症小体和p62途径探讨右美托咪定改善脑卒中后损伤的内在机制

目的:探讨右美托咪定(Dex)对脑卒中后模型脑损伤的改善作用,并基于Keap1/Nrf2/NLRP3炎症小体和p62途径探讨其作用机制。方法:大鼠随机分为假手术组、模型组、依达拉奉组、Dex组,除假手术组外,各组采用线栓法制造缺血性脑卒中大鼠模型,假手术组只穿线不结扎。造模成功后,依达拉奉组大鼠给予依达拉奉3.2 mg/kg,Dex组大鼠灌胃给予Dex 50 mg/kg,模型组、假手术组大鼠给予等体积生理盐水,连续给药14 d。采用改良m-NSS法评价大鼠行为学变化;TTC染色测定脑梗死体积;ELISA检测脑组织中TNF-α、IL-1β、IL-6水平;免疫荧光染色检测脑组织内ROS含量;RT-PCR检测脑组织Keap1、Nrf2、NLRP3、p62 mRNA水平;Western blot检测Keap1、Nrf2、NLRP3、p62蛋白表达。结果:与假手术组相比,模型组大鼠脑神经功能评分明显升高,脑梗死体积明显增大(P<0.01),脑组织中TNF-α、IL-6、IL-1β及ROS水平明显升高(P<0.01),Keap1、Nrf2、NLRP3、p62 mRNA及蛋白表达明显升高(P<0.01);与模型组相比,Dex组大鼠脑神经功能评分明显降低,脑梗死体积明显减小(P<0.01),脑组织中TNF-α、IL-6、IL-1β及ROS水平明显降低(P<0.01),NLRP3、p62 mRNA及蛋白表达明显降低(P<0.01),Keap1、Nrf2 mRNA及蛋白表达明显升高(P<0.01)。结论:Dex可明显改善脑卒中大鼠脑损伤,其可能是通过调控Keap1、Nrf2、NLRP3炎症小体及p62相关基因及蛋白表达实现的。

西红花苷通过调控SIRT1/Nrf2通路对心肌缺血再灌注大鼠的保护作用

目的探讨西红花苷通过调控沉默信息调节因子2相关酶类1(SIRT1)/核因子E2相关因子2(Nrf2)通路对心肌缺血再灌注(I/R)大鼠心肌损伤的保护作用。方法大鼠结扎冠脉前降支40 min再灌注4 h建立I/R模型,造模成功后分为模型组、地尔硫[艹卓]组(10 mg/kg)和西红花苷低、中、高剂量组(20、40、80 mg/kg),另取8只正常大鼠为假手术组,连续给予相应药物15 d,ELISA法检测血清LDH、CK-MB、SOD活性和MDA水平,HE染色观察心肌组织病理改变,TUNEL染色法检测心肌细胞凋亡率,试剂盒检测心肌组织SOD活性和MDA水平,RT-qPCR和Western blot法检测心肌组织SIRT1、Nrf2、HO-1 mRNA和蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠血清LDH和CK-MB活性、血清和心肌组织MDA水平、心肌细胞凋亡率均升高(P<0.01),血清和心肌组织SOD活性及心肌组织SIRT1、Nrf2、HO-1 mRNA和蛋白表达均降低(P<0.01),大鼠心肌纤维排列紊乱,有大片炎性浸润,多数心肌细胞破裂且核有消融现象,心肌结构模糊不清;与模型组比较,地尔硫[艹卓]组和西红花苷各剂量组血清LDH和CK-MB活性、血清和心肌组织MDA水平、心肌细胞凋亡率均降低(P<0.01),血清和心肌组织SOD活性及心肌组织SIRT1、Nrf2、HO-1 mRNA和蛋白表达均升高(P<0.01),大鼠心肌组织病理损伤均得到改善。结论西红花苷可减轻I/R大鼠心肌损伤,减少心肌细胞凋亡,其机制可能与激活SIRT1/Nrf2通路,减轻氧化应激反应有关。

lncRNA SNHG1调控铁死亡减轻HIV-1 gp120 V3环所致小胶质细胞炎症的分子机制研究

目的:探究长链非编码RNA(lncRNA)SNHG1调控铁死亡改善HIV-1 gp120 V3环致CHME-5人源小胶质细胞炎症的分子机制。方法:体外培养CHME-5人源小胶质细胞,设立空白组、随机肽段组、HIV-1 gp120V3环组(HIV-1 gp120组)、HIV-1 gp120+shCon组、HIV-1 gp120+SNHG1 sh2组、HIV-1 gp120+SNHG1 sh2+ferrostatin-1(Fer-1;铁死亡抑制剂)组和HIV-1 gp120+SNHG1 sh2+EX527(Sirt1抑制剂)组。随机肽段和gp120 V3环分别处理正常CHME-5细胞24 h;抑制剂预处理SNHG1 sh2细胞2 h后,gp120 V3环处理24 h。ELISA法检测细胞上清中炎症因子水平;Western blot法检测铁死亡相关蛋白[溶质载体家族7成员11(SLC7A11)和谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)]、Sirt1和p53蛋白表达水平;酶标仪检测细胞内亚铁离子(Fe^(2+))和丙二醛(MDA)含量。结果:(1)ELISA结果显示:较空白组,HIV-1 gp120组炎症因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)和IL-1β表达水平显著提高(P<0.05);较HIV-1 gp120组,HIV-1 gp120+SNHG1 sh2组炎症因子表达水平显著降低(P<0.05);较HIV-1 gp120+SNHG1 sh2组,HIV-1 gp120+SNHG1 sh2+Fer-1组炎症因子表达水平显著降低(P<0.05),HIV-1 gp120+SNHG1 sh2+EX527组炎症因子表达水平显著升高(P<0.01)。(2)Western blot结果显示:较空白组,HIV-1 gp120组铁死亡相关蛋白SLC7A11和GPX4表达水平显著下调(P<0.01);较HIV-1 gp120组,HIV-1 gp120+SNHG1 sh2组SLC7A11和GPX4表达水平显著上调(P<0.01);较HIV-1 gp120+SNHG1 sh2组,HIV-1 gp120+SNHG1 sh2+Fer-1组SLC7A11和GPX4表达水平明显上调(P<0.05),HIV-1 gp120+SNHG1 sh2+EX527组SLC7A11和GPX4表达水平显著下调(P<0.01),p53表达水平显著上调(P<0.05)。(3)较空白组,HIV-1 gp120组Fe^(2+)和MDA含量显著提高(P<0.05);较HIV-1 HIV-1 gp120组,HIV-1 gp120+SNHG1 sh2组Fe^(2+)和MDA含量显著降低(P<0.01);较HIV-1 gp120+SNHG1 sh2组,HIV-1gp120+SNHG1 sh2+Fer-1组Fe^(2+)和MDA含量显著降低(P<0.05),HIV-1 gp120+SNHG1 sh2+EX527组Fe^(2+)和MDA含量显著提高(P<0.05)。结论:敲减SNHG1可减轻HIV-1 gp120 V3环介导的小胶质细胞炎症反应,其机制可能是通过Sirt1/p53信号通路调控铁死亡相关信号分子实现的。

丹参酮ⅡA通过miR-155-5p激活SIRT1-AMPK通路改善H9c2心肌细胞缺血/再灌注损伤

目的:探究丹参酮ⅡA(TⅡA)通过miR-155-5p激活沉默信息调节因子1(SIRT1)-腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)通路改善H9c2心肌细胞缺血/再灌注(I/R)损伤的机制。方法:体外培养H9c2细胞并建立I/R损伤模型,造模完成后将H9c2细胞随机分为模型组、TⅡA组、TⅡA+miR-NC组、TⅡA+miR-155-5p mimics组,转染后分别加入10μmol/L TⅡA进行干预,并以添加DMSO的H9c2细胞作为对照组。qRT-PCR检测miR-155-5p表达水平;MTT法分析细胞增殖能力;流式细胞术评估细胞凋亡情况;ELISA测定TNF-α、IL-4、IL-10、IL-17、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平;Western blot检测SIRT1、AMPK、p-AMPK蛋白水平。结果:与对照组相比,模型组miR-155-5p表达升高,细胞活力下降,凋亡率及TNF-α、IL-17、LDH、MDA表达升高,IL-4、IL-10、SOD、SIRT1、p-AMPK表达减少(P<0.05);与模型组比较,TⅡA组miR-155-5p表达降低,细胞活力增强,凋亡率及TNF-α、IL-17、LDH、MDA表达下降,IL-4、IL-10、SOD、SIRT1、p-AMPK表达升高(P<0.05);与TⅡA组和TⅡA+miR-NC组比较,TⅡA+miR-155-5p mimics组miR-155-5p表达升高,细胞活力降低,凋亡率上升,TNF-α、IL-17、LDH、MDA表达上升,IL-4、IL-10、SOD、SIRT1、p-AMPK表达降低(P<0.05)。结论:TⅡA可通过下调miR-155-5p改善H9c2心肌细胞I/R损伤,其机制可能与激活SIRT1-AMPK通路有关。

电针对佐剂性关节炎大鼠踝关节炎症的HIF-1α/MDM2/p53信号通路的影响

目的观察电针对佐剂性关节炎(Adjuvant arthritis,AA)大鼠踝关节的保护作用以及HIF-1α/MDM2/p53信号通路表达的影响。方法将SD大鼠随机分为对照组、模型组、假电针组、激动剂组、电针组、电针+拮抗剂组、拮抗剂组,每组10只。大鼠注射弗氏完全佐剂制备AA模型,电针组和电针+拮抗剂组大鼠予以电针干预;假电针组大鼠予以电刺激处理;电针+拮抗剂组和拮抗剂组大鼠注射诱导缺氧诱导因子1α(Hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)拮抗剂;激动剂组大鼠注射HIF-1α激动剂。采用关节炎指数评分评估AA大鼠的关节炎严重程度,苏木素-伊红(HE)法观察各组大鼠踝关节的关节炎症情况,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠血清HIF-1α表达,荧光定量PCR(RT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测各组大鼠滑膜组织HIF-1α、血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)、细胞内鼠双微体2(Murine double minute 2,MDM2)、p53的mRNA和蛋白表达情况。结果与模型组比较,电针组、电针+拮抗剂组和拮抗剂组大鼠的关节炎指数评分、HE染色评分和血清HIF-1α表达显著降低(P<0.01),而假电针组、激动剂组大鼠的关节炎指数评分、HE染色评分和血清HIF-1α表达与模型组无显著差异(P>0.05)。RTPCR和Western blot结果显示,与模型组比较,电针组、电针+拮抗剂组和拮抗剂组大鼠的HIF-1α、VEGF、MDM2的mRNA和蛋白表达均显著降低,而p53的mRNA和蛋白表达显著提高(P<0.01)。假电针组、激动剂组大鼠的HIF-1α、VEGF、MDM2、p53的mRNA和蛋白表达无显著差异(P>0.05)。结论电针干预对AA大鼠的踝关节炎症有显著的保护作用,HIF-1α/MDM2/p53信号通路在其中起着关键的介导作用。

吴茱萸碱在诱导人黑色素瘤A375-S2细胞凋亡过程中对SIRT1和p53蛋白的影响

目的研究吴茱萸碱(evodiamine)在诱导A375-S2细胞凋亡过程中对SIRT1和p53蛋白表达的调控。方法电镜观察吴茱萸碱诱导细胞凋亡过程中细胞形态的变化。Western blot方法分析药物作用后对SIRT1蛋白和p53及其下游p21蛋白表达的影响。结果经15μmol.L-1吴茱萸碱处理24 h的A375-S2细胞表现出典型的凋亡特征,即细胞表面微绒毛消失、胞质空泡化、染色质浓集、边聚。在吴茱萸碱诱导A375-S2细胞凋亡过程中,SIRT1蛋白的表达下降,p53和p-p53的表达有所上升,其下游p21蛋白也被激活。结论在吴茱萸碱诱导的A375-S2细胞凋亡中,p53及其下游p21蛋白被活化,SIRT1蛋白表达被下调。

miR-204通过靶向Sirt1/p53信号通路抑制霍奇金淋巴瘤细胞增殖

目的:探讨微小RNA-204(miR-204)对霍奇金淋巴瘤细胞增殖的作用,并研究其初步机制。方法:采用RT-qPCR检测霍奇金淋巴瘤组织中miR-204和Sirt1 mRNA的表达水平。在L428细胞中分别转染miR-204模拟物(miR-204 mimic)、 Sirt1 小干扰RNA( Sirt1 siRNA)和miR-204 mimic+pcDNA3.1-Sirt1后,CCK-8法与BrdU实验分别检测细胞活力和BrdU掺入量;Western blot检测Sirt1和乙酰化p53(acetylated p53, ac-p53)的表达水平。双萤光素酶报告基因法验证miR-204与Sirt1的靶向关系。结果:霍奇金淋巴瘤组织中miR-204低表达,Sirt1 mRNA高表达。与对照组相比,L428细胞转染miR-204 mimic或 Sirt1 siRNA后,细胞活力、BrdU掺入量及Sirt1和ac-p53表达水平均显著降低( P <0.05)。与单纯miR-204 mimic转染组相比,miR-204 mimic+pcDNA3.1-Sirt1共转染组L428细胞活力、BrdU掺入量Sirt1和ac-p53蛋白表达水平均显著升高( P <0.05)。双萤光素酶报告基因实验结果表明,Sirt1 是miR-204的靶基因。结论: miR-204对L428细胞增殖的抑制作用可能是通过抑制Sirt1表达和促进ac-p53上调来实现的。

肺癌组织和外周血中p53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5和MAGE A1蛋白水平检测及其临床价值探讨

背景与目的:肺癌发病机制具有多样性,但一经确认,往往已错过最佳治疗时机,本文通过探讨肺癌组织和外周血中抑癌基因(p53)、蛋白基因产物(PGP9.5)、转录因子(SOX2)、肿瘤相关基因编码蛋白(GAGE7)、解旋酶(GBU4-5)和黑色素瘤抗原(MAGE A1)蛋白水平的相关性,同时分析其在肺癌诊疗中的应用价值。方法:回顾并分析2018年5月—2020年5月在复旦大学附属肿瘤医院确诊的100例肺癌患者的病历资料,临床TNM分期Ⅰ期25例,Ⅱ期45例,Ⅲa期30例;非小细胞肺癌80例,小细胞肺癌20例;取手术切除的肿瘤组织和癌旁组织,采用免疫组织化学染色法检测上述6种蛋白的水平,采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)法检测其基因表达,采用酶联免疫吸附实验(enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA)检测外周血中6种蛋白的抗体阳性情况。结果:肿瘤组织中p53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5和MAGE A1蛋白的阳性率和基因表达水平均明显高于癌旁组织(P<0.05);将其与肿瘤的临床病理学特征进行相关分析发现,肿瘤组织和外周血中的p53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5和MAGE A1蛋白的阳性率和基因表达水平与肿瘤TNM分期和分化级别有关(P<0.05),而与患者性别、年龄、肿瘤直径、病理学类型无关(P>0.05)。肿瘤组织中6种蛋白的表达水平与外周血清表达具有较好的一致性(P>0.05)。结论:肺癌肿瘤组织和外周血中p53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5和MAGE A1蛋白表达阳性与肿瘤TNM分期及分化级别密切相关。