CD137信号调控P53/P21通路对血管平滑肌细胞衰老的机制研究

目的探讨CD137信号调控P53/P21通路对血管平滑肌细胞(VSMC)衰老的机制。方法选择8周龄雄性C57BL/6J小鼠30只,随机分为年轻组(8周龄)和衰老组(80周龄),每组15只。饲养对应时间后处死小鼠并分离血浆及主动脉血管。细胞实验中将正常VSMC分为空白对照组、博来霉素(BLM)组、联合激动剂组和联合抑制剂组。采用细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒染色检测VSMC衰老水平。Western blot和聚合酶链反应检测组织及细胞中衰老相关蛋白,酶联免疫吸附测定衰老相关炎性因子表达。结果衰老组小鼠主动脉中CD137、组蛋白h2ax(γ-H2AX)表达明显高于年轻组,增殖细胞核抗原(PCNA)表达明显低于年轻组(P<0.05)。衰老组小鼠血浆CD137水平明显高于年轻组[(154.0±4.1)pg/ml vs(98.0±2.3)pg/ml,P<0.05]。与空白对照组比较,BLM组衰老VSMC明显增加(P<0.05);与BLM组比较,联合激动剂组衰老VSMC明显增加(P<0.05);与联合激动剂组比较,联合抑制剂组衰老VSMC明显减少,差异有统计学意义(P<0.05)。与空白对照组比较,BLM组肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6和IL-1β水平明显增高(P<0.05);与BLM组比较,联合激动剂组TNF-α、IL-6和IL-1β水平明显增加(P<0.05);与联合激动剂组比较,联合抑制剂组TNF-α、IL-6和IL-1β水平明显减少,差异有统计学意义(P<0.05)。与空白对照组比较,BLM组、联合激动剂组和联合抑制剂组B淋巴细胞瘤2基因、γ-H2AX、P53和P21表达明显增加,PCNA表达明显减少(P<0.05);与BLM组比较,联合激动剂组P53和P21表达明显增加(P<0.05);与联合激动剂组比较,联合抑制剂组P53表达明显减少,差异有统计学意义(P<0.05)。结论CD137信号调控P53/P21通路促进VSMC衰老。

基于miRNA21-5p调控TGF-β1/Smads信号通路探讨苓桂气化方抗射血分数保留心力衰竭心肌纤维化的机制

目的基于miRNA21-5p调控转化生长因子-β1(transforming growth factor beta 1,TGF-β1)/Smads信号通路探讨苓桂气化方抗射血分数保留心力衰竭(heart failure with preserved ejection fraction,HFpEF)心肌纤维化的机制。方法40只4周龄自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats,SHR)平均分为HFpEF组、沙库巴曲缬沙坦组(LCZ696,0.018 g·kg^(-1))、苓桂气化方低剂量组(LGQH-L,3.87 g·kg^(-1))和苓桂气化方高剂量组(LGQH-H,7.74 g·kg^(-1)),给予高脂、高盐及高糖饮食16周及腹腔注射链脲霉素溶液8周建立HFpEF大鼠模型。10只威斯塔京都(Wistar Kyoto,WKY)大鼠和10只SHR大鼠作为对照组,以普通饲料喂养至实验结束。造模成功后,WKY、SHR和HFpEF组给予等剂量生理盐水,其他3组按照预先规定的干预措施,每天灌胃1次,持续6周。干预结束后,行超声心动图测量左心室(left ventricle,LV)前壁厚度(LV end-diastolic anterior wall thickness,LVAWd)、LV后壁厚度(LV end-diastolic posterior wall thickness,LVPWd)、LV舒张末内径(LV end-diastolic internal diameter,LVIDd)、LV射血分数(LV ejection fraction,LVEF)、LV舒张早期二尖瓣流入峰值速度(E)、舒张晚期二尖瓣流入峰值速度(A)和LV舒张早期二尖瓣环运动速度(e'),并计算E/A和E/e';酶联免疫吸附试验检测血清心房钠尿肽(atrial natriuretic peptide,ANP)、B型利钠肽(B-type brain natriuretic peptide,BNP)及半乳糖凝集素3(Galectin-3,Gal-3);病理切片进行苏木精伊红及马松染色观察心肌肥厚及纤维化,并计算LV室壁厚度(LV wall thickness,LVWT)、胶原体积分数(collagen volume fraction,CVF)及血管周围纤维化比率(perivascular fibrosis ratio,PFR);实时定量聚合酶链反应检测LV心肌miRNA21-5p及TGF-β1/Smads信号通路相关mRNA表达;蛋白印迹检测LV心肌TGF-β1/Smads信号通路相关蛋白表达。结果与对照组比较,HFpEF组的LVAWd、LVPWd、LVIDd、E/A、E/e'、ANP、BNP、Gal-3、LVWT、CVF和PFR显著升高(P<0.05或P<0.01);LV心肌miR-NA21-5,α-SMA、CollⅠ、CollⅢ、TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA表达和α-SMA、CollⅠ、CollⅢ、TGF-β1、P-Smad2/3蛋白表达显著上调(P<0.05或P<0.01);Smad7 mRNA及蛋白表达显著下调(P<0.05或P<0.01)。与HFpEF组比较,苓桂气化方呈剂量依赖性减少LVAWd、LVPWd、LVIDd、E/A、E/e'、ANP、BNP、Gal-3、LVWT、CVF和PFR(P<0.05或P<0.01);下调miRNA21-5p,α-SMA、CollⅠ、CollⅢ、TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA表达和α-SMA、CollⅠ、GF-β1、P-Smad2/3蛋白表达(P<0.05或P<0.01);上调Smad7 mRNA及蛋白表达(P<0.05或P<0.01)。结论苓桂气化方可能通过靶向miRNA21-5p调控TGF-β1/Smads信号通路抑制心肌纤维化,从而减轻HFpEF大鼠LV重塑和舒张功能障碍,是治疗HFpEF的有效中药复方。

槲皮素通过p53-p21-Rb通路缓解慢性阻塞性肺疾病的肺衰老

目的 探讨槲皮素对慢性阻塞性肺疾病(COPD)小鼠肺衰老的治疗作用及机制。方法 将30只C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组、槲皮素组,每组10只。模型组和槲皮素组采用烟熏联合气道内滴注脂多糖(LPS)的方法构建COPD小鼠模型。造模成功后,槲皮素组给予槲皮素(50 mg/kg)灌胃,1次/d,持续4周;对照组和模型组给予等体积生理盐水。采用苏木精-伊红(HE)染色法观察小鼠肺组织病理改变,并评估肺部病理损伤;采用衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色法观察小鼠肺组织的衰老状况;采用免疫组化法检测肺组织中凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达情况;采用蛋白质印迹(Western blot)法检测肺组织中衰老相关蛋白p53、p21、Rb表达水平。结果 与对照组比较,模型组小鼠肺组织病理损伤明显,SA-β-gal染色的阳性面积明显增加,肺组织中Bcl-2蛋白表达减少、Bax蛋白表达增多,衰老相关蛋白p53、p21、Rb表达水平明显升高(均P<0.05);与模型组比较,槲皮素组小鼠肺组织病理损伤减轻,SA-β-gal染色阳性面积减少,肺组织中Bcl-2蛋白表达增高、Bax蛋白表达均减弱,衰老相关蛋白p53、p21、Rb表达水平明显降低(均P<0.05)。结论 槲皮素可能通过下调p53-p21-Rb信号通路减轻肺组织病理损伤、抑制肺组织细胞凋亡、延缓肺组织的衰老,从而起到治疗慢性阻塞性肺疾病的作用。

SRT2104对小鼠糖尿病肾病发病机制及SIRT1/P53/NRF2通路的影响

目的研究SRT2104对糖尿病肾病(DN)小鼠肾功能、肾纤维化、肾炎症及肾氧化应激的影响,并探讨其影响机制。方法将36只雄性BABL/c小鼠随机均分为3组:对照组、DN组和DN+S组,后两组小鼠通过连续5 d腹腔注射50 mg/kg的链脲佐菌素建立DN小鼠模型,之后DN+S组小鼠给予含有SRT2104的饮食喂养24周。最后检测各组小鼠的血糖及肾功能指标,以及肾皮质中肾纤维化、肾炎症及肾氧化应激相关指标和SIRT1/P53/NRF2通路分子的水平。结果DN组和DN+S组的血糖均高于对照组(P<0.05),但DN组和DN+S组组间对比无显著差异。DN组小鼠的尿白蛋白和尿肌酐的比率(UACR)、肾重量/胫骨长度、尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)和血β2-微球蛋白(β2-MG)的数值均显著高于对照组(P<0.05),DN+S组显著低于DN组(P<0.05)。DN组小鼠肾皮质中纤维化指标转化生长因子β1(TGF-β1)和结缔组织生长因子(CTGF)的表达、炎症指标纤溶酶原激活剂抑制剂-1(PAI-1)和VCAM-1的表达和氧化应激指标诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、活性氧(ROS)和丙二醛(MDA)的水平均显著高于对照组(P<0.05),DN+S组显著低于DN组(P<0.05)。DN+S小鼠肾皮质中SIRT1和NRF2的表达均显著高于DN组(P<0.05),P53乙酰化程度低于DN组(P<0.05)。结论SRT2104可降低DN小鼠肾纤维化、肾炎症及肾氧化应激,改善肾损伤,其机制与SIRT1/P53/NRF-2通路的激活有关。

淫羊藿苷对D-半乳糖诱导的脑衰老模型小鼠p53/p21信号通路的影响

目的:观察淫羊藿苷对脑衰老模型小鼠p53/p21信号通路的影响,并探讨淫羊藿苷抗衰老的可能机制。方法:将实验小鼠随机分为空白组、模型组、淫羊藿苷低剂量组和淫羊藿苷高剂量组,除空白组外,其他各组通过D-半乳糖诱导建立脑衰老模型。淫羊藿苷低剂量组和淫羊藿苷高剂量组灌胃淫羊藿苷药液,空白组和模型组灌胃等体积生理盐水。用Morris水迷宫评价各组小鼠的学习记忆能力;用ELISA检测各组小鼠血清中T-AOC、GSH-PX、GSH-ST、MDA的表达。用Real time-PCR和免疫组化检测各组小鼠海马中p53和p21的表达。结果:与空白组比较,模型组小鼠上平台潜伏期、游泳总路程和第1次抵原平台时间都明显增加(P<0.01),而小鼠穿越平台次数和目标象限时间则明显较少(P<0.01)。与模型组相比,淫羊藿苷低剂量组和淫羊藿苷高剂量组小鼠上平台潜伏期、游泳总路程和第1次抵原平台时间均有所较少(P<0.01,P<0.05),而小鼠越平台次数和目标象限时间有所增加(P<0.01,P<0.05)。与空白组比较,模型组小鼠血清中T-AOC、GSH-PX、GSH-ST明显降低(P<0.01),而MDA明显升高(P<0.01);与模型组比较,淫羊藿苷低剂量组和淫羊藿苷高剂量组小鼠血清中T-AOC、GSH-PX、GSH-ST均有不同程度升高(P<0.01,P<0.05),而MDA则有所降低(P<0.01)。与空白组比较,模型组小鼠海马中p53、p21 mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.01)。与模型组比较,淫羊藿苷低剂量组和淫羊藿苷高剂量组小鼠海马中p53、p21 mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.01,P<0.05)。结论:淫羊藿苷具有延缓衰老作用,其机制可能与其抑制衰老信号通路p53/p21有关。

CHD5基因启动子甲基化调控p19Arf/p53/p21Cip1信号通路促进急性髓系白血病发病的研究

目的:探讨急性髓系白血病患者(AML)骨髓中CHD5基因甲基启动子甲基化状态及其调控p19Arf/p53/p21Cip1信号通路促进AML发病的机制。方法:采用MSP检测AML组及对照组CHD5基因甲基化状态,应用实时定量RT-PCR和Westernblot检测CHD5、p19Arf、p53及p21Cip1的表达水平。结果:AML患者骨髓中CHD5基因甲基化率(39.06%)较对照组(6.67%)明显增高(P<0.05);CHD5基因甲基化与AML不同染色体核型相关(P=0.009),但与性别、年龄及临床分型无显著相关(P>0.05);AML患者CHD5相对表达水平明显低于对照组(P<0.05);存在CHD5甲基化AML患者p19Arf、p53及p21Cip1基因和蛋白表达水平较对照组降低。结论:AML患者CHD5基因启动子的高甲基化可导致CHD5、p19Arf、p53和p21Cip1表达水平下降,从而可能通过调控p19Arf/p53/p21Cip1途径减弱对白血病细胞增殖抑制作用,促进AML的发生。

白藜芦醇对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及其与sirt1-p53通路的关系

目的研究白藜芦醇对大鼠心肌缺血再灌注(I/R)损伤的保护作用及其与sirt1-p53通路的关系。方法 48只SD大鼠随机分为4组,I/R组、白藜芦醇预处理组(Res+I/R组),白藜芦醇预处理+sirt1抑制剂组(Res+ex527+I/R组)I,/R+sirt1抑制剂组(I/R+ex527),每组各12只。结扎大鼠冠状动脉左前降支建立大鼠心肌I/R损伤模型;分光光度法测定心肌组织中超氧化物歧化酶(SOD)、肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)含量;TUNEL法检测心肌细胞凋亡;免疫组化测定心肌组织中Bcl-2和Bax蛋白表达;Western印迹检测sirt1、乙酰化p53表达。结果白藜芦醇能减少大鼠心肌I/R后心肌细胞凋亡(P<0.05),使sirt1表达增高(P<0.05),乙酰化p53表达降低(P<0.05)。结论白藜芦醇对大鼠心肌I/R损伤具有保护作用,其机制可能与sirt1-p53通路有关。

柴胡疏肝散对非酒精性脂肪性肝病大鼠肝组织SIRT1/p53通路相关蛋白的影响

目的探讨柴胡疏肝散对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠肝组织沉默信息调节因子蛋白1(SIRT1)/p53通路相关蛋白表达的影响。方法将24只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、柴胡疏肝散组(9.6 g·kg-1),每组8只。正常对照组给予基础饲料,模型组和柴胡疏肝散组给予高脂饲料,柴胡疏肝散组同时给予柴胡疏肝散浸膏剂灌胃。16周后处死大鼠,检测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)含量和肝组织TC、TG含量;取肝组织行HE和油红O染色观察组织学改变;蛋白质印迹法检测肝组织SIRT1、p53、乙酰化p53(Ac-p53)蛋白表达。结果与模型组比较,柴胡疏肝散组肝组织病理学结果表明,脂质沉积明显减轻,血清LDL-C和肝组织TC、TG显著降低(P<0.05,P<0.01),肝组织SIRT1蛋白表达水平显著上调(P<0.01),而Ac-p53蛋白表达水平下调(P<0.05)。结论柴胡疏肝散能够减轻高脂饮食诱导的NAFLD大鼠肝组织脂质沉积,调控肝组织SIRT1/p53通路相关蛋白的表达水平可能是其作用机制之一。

ZIC1基因过表达激活P53信号通路抑制胸膜间皮瘤细胞增殖

目的探讨小脑锌指结构1(ZIC1)基因过表达对胸膜间皮瘤SMC-1细胞增殖、凋亡的影响以及相应的机制。方法用携带ZIC1基因的慢病毒颗粒转染SMC-1细胞作为过表达组,用空载慢病毒颗粒感染SMC-1细胞作为空载体组,将常规培养未进行转染的SMC-1细胞作为空白对照组,采用Western blot在蛋白水平检测3组细胞中ZIC1蛋白的表达情况;采用CCK-8细胞增殖试验检测各组细胞增殖能力,Hoechst-PI双染法检测各组细胞凋亡情况;采用Western blot检测P53介导的细胞凋亡信号通路的主要基因P53、P21、MDM2及P53磷酸化位点Ser392蛋白表达水平。结果与空载组和对照组相比,ZIC1过表达组中ZIC1蛋白的表达明显增高,差异有统计学意义(F=4.665,P=0.036);ZIC1过表达组中肿瘤细胞的增殖活性明显减弱,而肿瘤细胞的凋亡明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);ZIC1基因过表达组中P53信号通路中的主要基因P53、P21、MDM2及P53-Ser392蛋白表达均明显增加(P<0.05)。结论ZIC1基因过表达可以抑制胸膜间皮瘤SMC-1细胞增殖,促进其凋亡,其可能的机制为通过上调P53基因磷酸化位点的表达激活P53基因介导的细胞凋亡信号通路来实现。

miR-204通过靶向Sirt1/p53信号通路抑制霍奇金淋巴瘤细胞增殖

目的:探讨微小RNA-204(miR-204)对霍奇金淋巴瘤细胞增殖的作用,并研究其初步机制。方法:采用RT-qPCR检测霍奇金淋巴瘤组织中miR-204和Sirt1 mRNA的表达水平。在L428细胞中分别转染miR-204模拟物(miR-204 mimic)、 Sirt1 小干扰RNA( Sirt1 siRNA)和miR-204 mimic+pcDNA3.1-Sirt1后,CCK-8法与BrdU实验分别检测细胞活力和BrdU掺入量;Western blot检测Sirt1和乙酰化p53(acetylated p53, ac-p53)的表达水平。双萤光素酶报告基因法验证miR-204与Sirt1的靶向关系。结果:霍奇金淋巴瘤组织中miR-204低表达,Sirt1 mRNA高表达。与对照组相比,L428细胞转染miR-204 mimic或 Sirt1 siRNA后,细胞活力、BrdU掺入量及Sirt1和ac-p53表达水平均显著降低( P <0.05)。与单纯miR-204 mimic转染组相比,miR-204 mimic+pcDNA3.1-Sirt1共转染组L428细胞活力、BrdU掺入量Sirt1和ac-p53蛋白表达水平均显著升高( P <0.05)。双萤光素酶报告基因实验结果表明,Sirt1 是miR-204的靶基因。结论: miR-204对L428细胞增殖的抑制作用可能是通过抑制Sirt1表达和促进ac-p53上调来实现的。

白豆蔻对大鼠阿霉素肾病的作用机制及与STAT1-P53-P21信号通路表达的关系

目的研究白豆蔻对大鼠阿霉素肾病的作用机制及与STAT1-p53-p21信号通路表达的关系。方法选择雄性SD大鼠120只,随机分为正常对照组、模型对照组、白豆蔻低剂量组、白豆蔻中剂量组、白豆蔻高剂量组、贝那普利组。采用1次性尾静脉注射10 mg/kg阿霉素构建阿霉素肾病模型,在造模后第4 d开始给药,白豆蔻低、中、高剂量组大鼠分别每天灌胃1.5、3.0、4.5 g/kg白豆蔻,贝那普利组大鼠每天灌胃10 mg/kg贝那普利,模型对照组和正常对照组大鼠灌胃等量生理盐水,每日一次,持续4周。通过尿液分析仪检测尿液尿蛋白(PRO)、尿隐血(BLO)和胆红素(BIL)含量,通过全自动生化分析仪检测大鼠血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)水平,通过HE染色观察肾组织损伤,通过流式检测肾细胞凋亡情况,通过Western blot检测caspase-3、Bax、Bcl-2、STAT1、p53和p21的表达,通过试剂盒检测SOD和MDA的含量,通过ELISA检测血清中炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的水平。结果给药各组大鼠与模型对照组相比,尿液中PRO、BLO和BIL含量及血液中TC、TG、BUN和Scr含量均有不同程度的降低,血液中TP和ALB含量均有不同程度的升高,肾小球病症均有不同程度减轻,肾细胞凋亡率、caspase-3和Bax蛋白表达量均有不同程度的降低,Bcl-2蛋白表达量均有不同程度的升高,MDA含和IL-1β、IL-6和TNF-α含量均有不同程度的降低,SOD活性均有不同程度的升高,STAT1、P53和P21蛋白表达量均有不同程度的降低,且白豆蔻中剂量组的作用最显著。结论白豆蔻可通过调控STAT1-P53-P21信号通路减轻大鼠阿霉素肾病。

头花蓼对幽门螺杆菌相关性胃炎大鼠胃组织SIRT1、p53和p21的影响

目的:观察头花蓼对幽门螺杆菌相关性胃炎(HAG)的治疗效果及对HAG胃组织中SIRT1/p53/p21信号通路的影响。方法:30只SD大鼠均分为正常对照组、模型组和药物组,正常对照组给予无菌脑心浸液肉汤灌胃,模型组和药物组大鼠给予H.pylori灌胃(1×1011CFU/L SS2000菌液1.5 m L/只)建立HAG模型,药物组HAG模型大鼠给予1.58 mg/(kg·d)头花蓼灌胃治疗,正常对照组大鼠和模型组大鼠给予等量无菌生理盐水灌胃,连续给药14 d;治疗结束4周时检测大鼠胃组织H.pylori定植量、观察各组大鼠胃黏膜组织学改变,采用Real time PCR和Western blot技术检测大鼠胃组织SIRT1、p53及p21 mRNA及蛋白表达水平。结果:正常对照组大鼠胃组织H.pylori定植量为0,模型组和药物组大鼠胃黏膜均有H.pylori定植,与模型组比较,药物组H.pylori定植量显著降低(P<0.05);正常对照组大鼠胃组织无病理形态学改变,模型组大鼠H.pylori感染后的胃黏膜腺体排列不规则,胃黏膜固有层中有较多淋巴细胞浸润,细胞浸润多呈弥漫性;药物组大鼠胃组织病理形态学改变少于模型组;与正常对照组比较,模型组病理评分显著升高,而药物组病理评分显著低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05);H.pylori感染后,与正常对照组相比,模型组大鼠胃组织SIRT1、p53基p21 mRNA表达量增加(P<0.05);头花蓼治疗后,与模型组相比,药物组大鼠胃组织SIRT1、p53及p21 mRNA水平都明显升高(P<0.05);与正常对照组相比,模型组大鼠胃组织SIRT1、p53及p21蛋白表达均有所升高,但差异无统计学意义(P>0.05);而头花蓼治疗后,与模型组相比,SIRT1、p53和p21蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论:头花蓼治疗可能是通过上调SIRT1、p53和p21基因表达来发挥作用。

当归多糖对造血干细胞SIRT1、p53和p21表达的影响

目的研究当归多糖(ASP)基于辐射所致小鼠衰老造血干细胞(HSCs) SIRT1、p53和p21蛋白表达的影响,探讨ASP基于调控HSCs衰老的可能机制。方法 72只SPF级C57BL/6J小鼠随机纳入对照组、模型组和ASP组。模型组通过X线3.0G y/8F全身照射建立小鼠HSCs衰老模型;ASP组在照射期间给予ASP灌胃;对照组与模型组予生理盐水。经免疫磁珠法分选小鼠HSCs,采用流式细胞术检测细胞周期,通过β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色观察衰老细胞;经混合集落培养(CFU-Mix)观察HSCs自我更新及定向分化潜能;Western blot检测SIRT1、p53、p21蛋白表达。结果与对照组比较,X线照射可能显著增加模型组HSCs G;期细胞比例、SA-β-Gal染色阳性细胞率、p53及p21蛋白表达(P<0.05),降低SIRT1表达和CFU-Mix形成能力(P<0.05)。与模型组比较,ASP会抑制衰老HSCs G;期细胞比例、SA-β-Gal染色阳性细胞率、p53及p21蛋白表达增加(P<0.05),同时SIRT1表达增加、CFU-Mix能力增强(P<0.05)。结论 ASP可能上调SIRT1表达、下调p53及p21表达,从而可能延缓小鼠HSCs衰老。

基于PI3K/Akt/p53信号通路探讨白花蛇舌草乙酸乙酯萃取物诱导急性髓系白血病细胞凋亡的作用

目的通过评估白花蛇舌草乙酸乙酯萃取物(EAEHDW)对磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/p53信号通路传导调节作用,探讨其抑制急性髓系白血病M2型(AML-M2)细胞株Kasumi-1增殖及诱导凋亡的机制。方法利用乙酸乙酯从白花蛇舌草中萃取制备得到EAEHDW,高效液相色谱串联质谱装置检测样品纯度。设置空白组,将浓度分别为0.02 mg/mL、0.04 mg/mL、0.06 mg/mL、0.08 mg/mL、0.10 mg/mL的EAEHDW加入对数生长期的Kasumi-1细胞株,采用MTT法检测不同浓度EAEHDW作用不同时间后Kasumi-1细胞存活率,采用Annexin V/PI流式细胞术检测不同浓度EAEHDW作用24 h后Kasumi-1细胞凋亡情况,采用Western blot法检测不同浓度EAEHDW(0.02 mg/mL、0.04 mg/mL、0.06 mg/mL)作用24 h后Kasumi-1细胞中含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)家族蛋白及PI3K/Akt/p53信号传导通路蛋白表达情况。结果不同浓度的EAEHDW干预后,细胞存活率较空白组明显降低,细胞凋亡率较空白组明显升高,且细胞存活率随着作用时间的延长和药物浓度的增加而下降越明显,细胞凋亡率随着药物浓度的增加而升高越明显,差异均有统计学意义(P均<0.05);不同浓度的EAEHDW作用于Kasumi-1细胞后,细胞中多聚ADP核糖聚合酶(PARP)、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、细胞色素C(Cyto-C)、p53蛋白相对表达量均明显升高(P均<0.05),Akt、磷酸化Akt(p-Akt)、鼠双微染色体2(MDM2)、磷酸化MDM2(p-MDM2)蛋白相对表达量均明显降低(P均<0.05)。结论EAEHDW可明显抑制髓系白血病Kasumi-1细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与影响Caspase家族蛋白表达和抑制PI3K/Akt/p53信号通路导致p53激活有关。

小檗碱对NAFLD大鼠肝组织氧化损伤及SIRT1/p53通路的影响

目的:研究小檗碱对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠肝组织氧化损伤及沉默信息调节因子2同源蛋白1(SIRT1)/p53通路的影响,探讨小檗碱抗NAFLD的作用机制。方法:选用SPF级雄性SD大鼠24只,按随机数字表均分为正常组、模型组与小檗碱组,正常组给予基础饲料喂养,模型组及小檗碱组给予高脂饲料喂养,造模同时小檗碱组给予小檗碱(100 mg·kg^(-1)·d^(-1))灌服。16周后处死大鼠并采集肝脏,检测肝组织中总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)含量,超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)含量及总抗氧化能力(T-AOC);HE、油红O染色与透射电镜观察肝脏组织学的改变;Western blot检测大鼠肝组织SIRT1、p53及乙酰化p53(Ac-p53)蛋白水平。结果:与模型组相比,小檗碱组大鼠肝组织TC、TG和MDA含量水平显著降低(P<0.05或P<0.01),而SOD活力和T-AOC显著升高(P<0.01);组织学结果也观察到小檗碱组大鼠肝脏脂质蓄积状态明显减轻;小檗碱组肝组织SIRT1蛋白表达水平较模型组显著上调(P<0.05),Ac-p53蛋白表达水平下调(P<0.05)。结论:小檗碱能减轻高脂饮食诱导的NAFLD大鼠肝脏脂肪变性和氧化应激损伤,其作用机制可能是通过上调SIRT1蛋白的表达,从而抑制p53的乙酰化。

少阳主骨方介导p19^(Arf)-p53-p21^(Cip1)信号通路调控食蟹猴关节软骨退变的机制

目的根据"少阳主骨"理论,研究少阳主骨方介导p19Arf-p53-p21Cip1信号通路调控关节软骨退变的机制。方法通过X线选取13只膝关节退变的老年食蟹猴,随机选取1只进行病理学观察,其余食蟹猴随机分为少阳主骨方组、氨糖美辛组、生理盐水组,每组4只,连续灌胃8周后处死所有食蟹猴,取关节软骨进行病理学观察,RT-q PCR、Western blot检测关节软骨中p19Arf、p53、p21Cip1基因与蛋白的表达。结果老年食蟹猴KOA模型关节软骨符合KOA病理变化,3组食蟹猴Mankin评分少阳主骨方组7.38±0.52分、氨糖美辛组7.88±0.83分、生理盐水组8.38±0.74分,少阳主骨方组与生理盐水组间具有统计学差异(P<0.05);p19Arf、p53、p21Cip1基因与蛋白的表达少阳主骨方组<氨糖美辛组<生理盐水组,具有统计学差异(P<0.05)。结论少阳主骨方可以延缓关节软骨退变,调控p19Arf-p53-p21Cip1表达。

麦味养肺汤通过调控p53/p21信号通路抑制Ⅱ型肺泡上皮细胞衰老抗肺纤维化的作用机制研究

目的探讨麦味养肺汤(麦冬、五味子、党参等)通过调控p53/p21信号通路抑制Ⅱ型肺泡上皮细胞(AECⅡ)衰老抗肺纤维化的作用机制。方法将C57BL/6小鼠随机分为空白组、模型组、麦味养肺汤组(60 g·kg^(-1)·d^(-1))和阳性对照组(吡非尼酮,0.3 g·kg^(-1)·d^(-1)),每组6只。采用气管滴注博来霉素(5 mg·kg-1)复制肺纤维化小鼠模型;造模后次日开始灌胃给药,每日1次,连续给药21 d。检测并记录小鼠肺顺应性与肺阻力的变化;活体micro-CT成像法检测小鼠肺组织纤维化程度;采用HE、Masson染色法观察、评估肺组织炎症和纤维化程度;免疫组织化学法测定肺组织中Ⅰ/Ⅲ型胶原的表达;β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色法测定肺组织细胞衰老情况;ELISA法测定肺组织中羟脯氨酸(Hyp)的含量;Western Blot法测定肺组织中Fibronectin、Vimentin、α-SMA、p53、p21、p16、SP-C蛋白表达;免疫荧光法检测小鼠肺组织中p21、p16及SP-C的表达。结果与空白组比较,模型组小鼠体质量显著下降(P<0.01),肺组织中炎症及纤维化评分均显著升高(P<0.01);肺顺应性显著下降(P<0.01),肺阻力显著增加(P<0.01);肺组织中Ⅰ/Ⅲ型胶原沉积量及Hyp含量显著增加(P<0.01);肺组织中Fibronectin、Vimentin、α-SMA蛋白表达显著上调(P<0.01);肺组织呈大面积SA-β-gal蓝染,细胞衰老程度明显,肺组织中p53、p21、p16等衰老相关蛋白表达显著上调(P<0.01);肺组织中p21、p16的红色荧光表达明显增强,Merge图像显示p21、p16与SP-C共染的橙色荧光明显增多,SP-C蛋白表达显著下调(P<0.01)。与模型组比较,麦味养肺汤组小鼠的体质量明显升高(P<0.05),肺组织中炎症及纤维化评分均明显降低(P<0.05,P<0.01);肺顺应性明显上升(P<0.05),肺阻力显著下降(P<0.01);肺组织中Ⅰ/Ⅲ型胶原沉积量及Hyp含量显著减少(P<0.01);肺组织中Fibronectin、Vimentin、α-SMA蛋白表达明显下调(P<0.05);肺组织SA-β-gal蓝染明显减轻,细胞衰老程度得到明显改善,肺组织中p53、p21、p16蛋白表达明显下调(P<0.05,P<0.01);肺组织中p21与p16的红色荧光表达明显下调,Merge图像显示p21、p16与SP-C共染的橙色荧光明显减少,SP-C蛋白表达明显上调(P<0.05)。结论麦味养肺汤能够减轻博来霉素诱导肺纤维化小鼠的肺组织炎症反应,改善胶原沉积,促进肺功能,可能与调控p53/p21信号通路抑制AECⅡ衰老有关。

大黄素调控P53/P21通路对H_(2)O_(2)诱导损伤HUVEC的保护作用

目的研究大黄素对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导损伤的血管内皮细胞(HUVEC)保护作用及作用机制。方法MTT法筛选H_(2)O_(2)造模浓度及大黄素给药浓度。取HUVEC细胞,分为正常对照组、H_(2)O_(2)模型组(终浓度100μmol/L H_(2)O_(2))和大黄素4个不同剂量(终浓度15.0、7.5、5.0、2.5μmol/L)组,置于37℃、5%CO_(2)培养箱中培养24 h。电镜和荧光显微镜观察细胞形态和结构,Hoechst法观察细胞凋亡,化学法检测各组细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)含量;Western印迹检测各组细胞中P53、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3和P21蛋白的表达。结果与正常对照组比较,模型组HUVEC细胞增殖活力显著下降;细胞形态与结构改变;SOD、NO、NOS含量显著降低;P53、caspase-3和P21蛋白表达显著提高;经不同剂量大黄素干预后,能明显改善和拮抗H_(2)O_(2)对HUVEC的氧化损伤。结论大黄素对H_(2)O_(2)诱导的HUVEC氧化损伤具有显著保护作用,其作用机制可能是调控P53/P21/caspase-3通路、抑制HUVEC氧化损伤和细胞凋亡。

p53/p21通路与细胞周期阻滞在急性肾损伤中的研究进展

急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)是住院患者最常见的急危重症之一,可导致肾功能急剧下降。DNA损伤存在于AKI早期,细胞对DNA损伤的主要反应之一是细胞周期阻滞,其中肿瘤蛋白p53在此过程中发挥重要作用。本文旨在综述AKI过程中细胞周期阻滞和p53/p21信号通路的作用,明确细胞周期阻滞的内在保护作用以及进一步了解p53/p21信号通路和细胞周期阻滞的机制和功能,将有助于制定治疗AKI的策略。

P53/P21通路在电针抑制骨质疏松大鼠模型成骨细胞衰老中的机制

目的探讨电针对老年大鼠骨质疏松及衰老细胞通路P53/P21的影响。方法27月龄雄性大鼠随机分为老年组和电针治疗组(n=8),电针治疗组接受电针干预(每周5次,共8周),6月龄雄性大鼠设为青年组。8周后处死大鼠,ELISA检测血清Ⅰ型胶原C末端肽(CTX-I)、Ⅰ型胶原羧基端前肽(PICP)水平;Micro-CT扫描骨组织;检测P53、P21等mRNA及蛋白表达水平。结果老年组CTX-I较青年组增加,PICP较青年组降低(P<0.01);电针可降低老年大鼠CTX-I,增高PICP(P<0.01);Micro-CT显示相对青年组,老年组大鼠骨小梁分布紊乱、稀疏,BMD、BV/TV、Tb.N等下降(P<0.01),Tb.Sp增高(P<0.01)。电针可改善骨小梁紊乱分布,增加BMD、BV/TV、Tb.N(P<0.05),降低Tb.Sp(P<0.01)。相对于青年组,老年组大鼠P53、P21 mRNA及蛋白表达量增高(P<0.01)。电针能下调老年大鼠P53、P21 mRNA及蛋白表达量(P<0.01)。结论电针可能通过抑制P53/P21信号通路来缓解成骨细胞衰老、增加成骨细胞活性,并以此来促进骨形成,改善骨质疏松。