SIRT1去乙酰化酶抑制剂引起人乳腺癌MCF-7耐药细胞凋亡的机制

研究SIRT1去乙酰化酶抑制剂引起人乳腺癌MCF-7耐多柔比星(doxorubicin,DOX)细胞及其敏感细胞凋亡的机制。MTT法检测细胞生长抑制作用;Western blotting方法检测蛋白表达;DNA特异染料Hoechst 33342染色检测染色质凝集;Annexin V检测细胞凋亡;流式细胞仪测定细胞周期分布。结果表明,SIRT1去乙酰化酶抑制剂烟酰胺(nicotinamide,NAM)和Sirtinol对人乳腺癌细胞MCF-7敏感和耐药细胞表现出相同的生长抑制作用,但没有增强DOX活性的作用。NAM使MCF-7和MCF-7/DOX细胞阻滞在G2/M期。50 mmol.L-1NAM作用MCF-7细胞后,激活caspase凋亡通路,出现PARP、caspase-6、-7、-9切割片段,并且染色质发生凝集和Annexin V阳性细胞。而在MCF-7/DOX耐药细胞中,NAM作用24 h后,才开始出现PARP、caspase-6、-7切割片段,48 h后明显增加,可以检测到较多的细胞出现染色质凝集和Annexin V阳性细胞。SIRT1去乙酰化酶抑制剂对人乳腺癌MCF-7耐药细胞和敏感细胞均有相似的抑制作用,无交叉耐药性,其作用通过激活caspase凋亡通路实现。

Sirt1去乙酰化酶抑制剂诱导成人白血病细胞系MT2生长阻滞及凋亡

目的:研究Sirtuin1(Sirt1)去乙酰化酶抑制剂对成人T细胞白血病细胞系MT2增殖及存活的影响。方法:采用RT-PCR方法,比较了成人白血病细胞系MT2与其他两种白血病细胞系(Jurkat,MOLT-4)中Sirt1 mRNA表达水平;通过Sirt1抑制剂尼克酰胺(Nicotinamide)处理MT2细胞后,观察其细胞形态学的变化,并采用MTT、流式细胞术等方法检测Nico-tinamide对MT2细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响。结果:成人白血病细胞系MT2中Sirt1表达水平明显高于Jurkat细胞系(P<0.05),而与MOLT-4细胞系无明显差异;抑制Sirt1的去乙酰化酶活性能明显抑制MT2细胞的增殖,引起细胞G2/M期阻滞,诱导细胞凋亡;镜下观察到细胞膜皱缩、卷曲及破裂等凋亡样形态改变。结论:抑制Sirt1去乙酰化酶活性可能是治疗成人T细胞白血病的可行途径之一。

组蛋白去乙酰化酶抑制剂MGCD0103对小反刍兽疫病毒体外复制的影响

旨在探究组蛋白去乙酰化酶(HDACs)选择性抑制剂MGCD0103(Mocetinostat)对小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)在山羊子宫内膜上皮细胞(EEC细胞)复制的影响。本研究通过RT-qPCR法测定PPRV感染后宿主细胞HDACs和抑制剂处理细胞中PPRV N基因的转录水平,通过Time of Addition Assay确定MGCD0103在PPRV复制过程的作用阶段,用Western blot检测PPRV N蛋白的相对表达量,并采用TCID50方法测定了病毒滴度。结果表明,PPRV感染引起EEC细胞HDAC1(P<0.001)和HDAC2(P<0.002)转录水平明显上升;MGCD0103在病毒入侵和复制阶段均发挥了抑制作用,且在复制阶段抑制作用更明显;MGCD0103显著降低PPRV N基因转录水平和表达水平及病毒滴度(P<0.002),且其抑制PPRV在EEC中的半数有效浓度(EC50)和药物选择指数(SI)分别是0.43μmol·L^(-1)和4.35。本研究确定MGCD0103显著抑制PPRV的复制,这对研发有效抗PPRV药物具有重要意义,为高效率产毒细胞株的构建提供新思路。

组蛋白去乙酰化酶抑制剂ACY1215通过调控能量代谢酶保护脂多糖/D-氨基半乳糖诱导的急性肝衰竭小鼠机制研究

目的探讨组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂ACY1215对急性肝衰竭(ALF)小鼠的保护作用及其可能的作用机制。方法将30只小鼠随机分为对照组、模型组和ACY1215处理组,采用脂多糖和D-氨基半乳糖联合腹腔注射诱导小鼠ALF模型,常规行血生化和组织病理学检查,采用Western blot法检测肝组织苹果酸脱氢酶1(MDH1)、异柠檬酸脱氢酶(IDH1)和果糖-2,6-二磷酸酶2(PFKFB2)及白介素-1β(IL-1β)和IL-18分子蛋白的表达。结果肝组织病理学检查显示,ALF模型制备成功,而ACY1215干预组肝组织病理学损害显著减轻;模型组血清ALT、AST和TBIL水平分别为(3743.5±655.9)U/L、(2539.4±488.1)U/L和(89.56±7.2)μmol/L,显著高于对照组【分别为(34.5±7.6)U/L、(32.3±9.3)U/L和(6.2±2.4)μmol/L,P<0.05】,而ACY1215处理组各项指标均显著降低【分别为(951.5±328.9)U/L、(475.3±131.24)U/L和(38.41±9.5)μmol/L,P<0.05】;模型组小鼠肝组织MDH1和IDH1表达较对照组显著减弱,PFKFB2、IL-18和IL-1β表达较对照组显著增强,而ACY1215干预组肝组织MDH1和IDH1表达较模型组显著增强,而PFKFB2、IL-18和IL-1β表达较模型组显著减弱。结论组蛋白去乙酰化酶抑制剂ACY1215可以通过对能量代谢酶的调节发挥保护ALF小鼠的作用。

组蛋白去乙酰化酶抑制剂在急性髓系白血病中的应用

急性髓系白血病(AML)是造血干/祖细胞恶性克隆性疾病,以骨髓、血液和其他组织中髓系起源的异常原始细胞增殖为特征。“3+7”诱导方案(蒽环类药物联合阿糖胞苷)一直是治疗AML的基石,但仍有部分AML患者无法耐受强化疗或完全缓解后复发,目前AML的总体疗效仍不乐观。因此,寻找新药物以提高AML患者疗效具有重要的临床意义。越来越多的研究证明,表观遗传对AML的发生、发展起重要作用。组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACi)是表观遗传修饰的分子靶向药物,可抑制组蛋白去乙酰化酶(HDAC)的活性,上调组蛋白赖氨酸的乙酰化水平,目前已应用于AML临床研究中,在联合治疗中显现出良好的耐受性与治疗效果。本综述介绍了HDAC和HDACi的分类依据以及在临床上的应用,阐述了伏立诺他、贝利司他、帕比司他、戊丙酸、恩替诺特、西达本胺等6种HDACi在AML中的临床前研究结果和临床应用研究进展,讨论了HDACi与其他抗癌药物联用在AML中的作用机制,并对HDACi今后的发展提出了建议,期望为临床治疗AML提供参考。

组蛋白去乙酰化酶抑制剂在乳腺癌的治疗进展

伴随着组蛋白去乙酰化酶抑制剂(histone deacetylase inhibitor,HDACi)这一类靶向表观遗传调控机制的药物的创新发展,乳腺癌患者的治疗格局正在被逐渐改变。无论是激素受体(hormone receptor,HR)阳性且人表皮生长因子受体2(hu⁃man epidermal growth factor receptor 2,HER2)阴性乳腺癌患者还是三阴性乳腺癌(triple⁃negative breast cancer,TNBC)患者,都能够从HDACi联合治疗方案中取得可观的临床获益。文章围绕HDACi这一类药物,总结其在乳腺癌各个分子亚型中应用的研究进展,特别是总结了中国人群的治疗现状,对未来联合用药方案合理布局的探索进行综述。

组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA对慢性间歇性低氧小鼠肝损伤的影响及其机制

目的 探索组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA对凋亡蛋白Caspase-9/Caspase-3的表达和慢性间歇性低氧小鼠肝损伤的影响及其机制。方法 将雄性C57小鼠随机分为正常组(control组)、慢性间歇性低氧组(CIH组)和SAHA干预组(CIH+SAHA组),将CIH+SAHA组与CIH组小鼠放入低氧仓内进行间歇性低氧处理,每天8 h,持续4周,从第3周起,每日造模前给予实验小鼠腹腔注射SAHA 50 mg/(kg·d),给药持续2周。实验第4周后,测量小鼠体质量,然后处死小鼠,HE染色观察肝组织形态学变化,测定血清中谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)水平,Western blot检测小鼠肝组织中裂解型胱天蛋白酶3(c-Caspase-3)和Caspase-9的蛋白水平,TUNEL试剂盒检测小鼠肝组织细胞凋亡情况。结果 与control组相比,间歇性低氧4周后,CIH组小鼠肝指数显著升高且肝组织损伤明显,肝组织细胞凋亡相关蛋白Caspase-9和c-Caspase-3的表达水平显著增高,肝组织细胞凋亡比例增加(P<0.05);与CIH组相比,CIH+SAHA组肝指数、ALT、AST水平以及Caspase-9和c-Caspase-3蛋白表达水平、肝组织细胞凋亡指标降低(P<0.05)。结论 SAHA可能通过抑制凋亡相关蛋白Caspase-9/Caspase-3,进而改善慢性间歇性低氧引起的小鼠肝损伤。

组蛋白去乙酰化酶抑制剂与肺相关疾病的研究进展

组蛋白去乙酰化酶抑制剂(histone deacetylase inhibitor,HDACi)作为一类表观遗传调控药物,在调控细胞周期、增殖分化方面发挥着重要作用。目前多种HDACi已被美国食品药品监督管理局(FDA)批准用于某些血液系统恶性肿瘤[1-6],如白血病。

组蛋白去乙酰化酶及其抑制剂在牙源性干细胞成骨和成牙本质分化中的研究进展

组蛋白去乙酰化酶(HDACs)可使组蛋白去乙酰化,与DNA结合更加紧密,从而发挥抑制基因转录的作用。相反,组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACis)有利于染色质松弛,使各种转录因子与DNA特异性结合,发挥激活转录基因的作用。牙源性干细胞(DSCs)是人成体干细胞,此类细胞具有取材时损伤小和免疫排斥反应低等特点,在成骨、成牙本质等分化过程中是极其重要的种子细胞。大量研究表明,HDACs及HDACis两者在细胞分裂分化、信号转导、调控细胞炎症等多种生命过程中共同发挥作用。本文对组蛋白修饰中HDACs以及HDACis在DSCs成骨和成牙本质分化中的研究进展进行综述,旨在为研究HDACs及HDACis之间的相互作用,并有望对DSCs治疗牙齿及骨损伤的临床应用提供参考。

组蛋白去乙酰化酶抑制剂在新生儿缺氧缺血性脑病中的脑保护作用研究进展

新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)是新生儿死亡和致残的重要原因,目前尚无特效的治疗方案。组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACIs)可抑制组蛋白去乙酰化酶(HDACs)的活性,促进组蛋白和非组蛋白酰化修饰,以激活转录、增强基因表达。越来越多的研究表明,HDACIs在HIE中具有强大的神经保护作用,可减轻炎症反应、兴奋性毒性反应及氧化应激,抑制细胞凋亡,并能促进神经发生和血管生成,显著缩小脑梗死面积。未来应进一步深入研究HDACIs在神经保护方面的作用机制和临床应用,为新生儿HIE的治疗提供新的选择。

组蛋白去乙酰化酶抑制剂Chidamide抑制C2C12骨骼肌细胞分化及其机制

目的:探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂西达苯胺(Chidamide)对C2C12小鼠骨骼肌细胞分化作用及其分子机制。方法:CCK-8(cell counting Kit-8)法检测0、0.5、1、2、4μmol/L Chidamide处理后C2C12细胞的活力;将C2C12骨骼肌细胞分为对照组(control)和Chidamide组,Western印迹检测Chidamide处理后组蛋白H3乙酰化(Pan-acetyl H3)水平,细胞免疫荧光染色肌管细胞分化成熟标志蛋白肌球蛋白重链(MyHC),检测肌细胞分化,Western印迹和qPCR检测MyHC、成肌分化抗原(MyoD)、肌细胞生成素(MyoG)的表达及肌原纤维Ⅰ型(Myh7)、Ⅱa型(Myh2)、Ⅱb型(Myh4)和Ⅱx型(Myh1)的表达。结果:0、0.5、1、2、4μmol/L的Chidamide均不影响细胞活力。Chidamide升高Pan-acetyl H3蛋白水平(t=3.22,P<0.05)。细胞免疫荧光结果显示,与对照组相比,Chidamide处理后肌细胞融合受损,分化程度降低。Western印迹和qPCR结果显示,与对照组相比,Chidamide下调MyHC、MyoD和MyoG蛋白水平(t=5.71、6.05、7.37,均P<0.01)和mRNA水平(t=26.87、5.81、4.86,均P<0.01);降低Myh7蛋白(t=3.93,P<0.01)和mRNA水平(t=4.85,P<0.01);降低Myh1、Myh2蛋白(t=14.13、5.05,均P<0.01)和mRNA水平(t=15.48、16.82,均P<0.001),但不影响Myh4的蛋白(t=2.19,P>0.05)和mRNA水平(t=1.50,P>0.05)。结论:Chidamide可能通过下调MyoD和MyoG的表达抑制C2C12骨骼肌细胞分化,且主要抑制Ⅰ型、Ⅱa和Ⅱx型肌原纤维,不影响Ⅱb型肌原纤维。

前蛋白转化酶枯草溶菌素9抑制剂通过降低血管细胞黏附分子-1减缓载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化进展

目的探究前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)抑制剂减缓动脉粥样硬化(AS)的分子机制。方法选取45只载脂蛋白E基因敲除(ApoE^(-/-))小鼠作为研究对象,采用随机数字表法分为对照组、AS模型组和PCSK9抑制剂干预组,每组15只。以普通喂养方式为对照组,通过高脂饮食诱导构建AS模型组,高脂喂养并给予PCSK9抑制剂作为PCSK9抑制剂干预组。实验结束后取小鼠血浆测定血脂浓度;取小鼠主动脉根部,制作切片并通过油红O染色及苏木精-伊红(HE)染色观察AS病理形态学改变;通过免疫组化染色测定主动脉组织血管细胞黏附分子1(VCAM-1)表达;取小鼠胸主动脉利用real-time PCR和Western Blot法测定主动脉血管中VCAM-1的mRNA含量及蛋白表达;ELISA测定血浆肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)浓度。结果AS模型组小鼠血浆中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平高于对照组,高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);PCSK9抑制剂干预组血浆TC、TG、LDL-C、HDL-C水平与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05),PCSK9抑制剂干预组血浆TC、TG、LDL-C水平低于AS模型组,HDL-C高于AS模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。AS模型组主动脉硬化斑块相对面积大于对照组,而PCSK9抑制剂干预组斑块相对面积小于AS模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。AS模型组和PCSK9抑制剂干预组小鼠主动脉VCAM-1蛋白表达及mRNA水平高于对照组,而PCSK9抑制剂干预组VCAM-1蛋白表达及mRNA水低于AS模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。AS模型组血浆TNF-α、PAI-1水平高于对照组,而PCSK9抑制剂干预组血浆TNF-α、PAI-1水平低于AS模型组,差异有统计学意义(P<0.05),但PCSK9抑制剂干预组血浆TNF-α、PAI-1含量与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论PCSK9抑制剂可降低血液中炎症因子TNF-α和PAI-1浓度,从而减少主动脉VCAM-1的表达,进而减缓动脉粥样硬化进展。

整合酶抑制剂治疗人免疫缺陷病毒1型的临床疗效及对患者病毒载量和CD4^(+)T细胞的影响

目的探讨整合酶抑制剂治疗人免疫缺陷病毒1型(HIV-1)患者的临床疗效及对患者病毒载量和CD4^(+)T细胞的影响。方法选取2020年8月至2022年2月九江市第三人民医院收治的88例HIV-1患者作为研究对象,按照随机抽签方式分为观察组与对照组,每组44例。对照组采用常规HIV-1治疗方案,观察组采用整合酶抑制剂治疗。比较两组临床疗效、CD4^(+)T细胞计数、病毒载量水平及治疗安全性。结果观察组治疗总有效率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后1个月、3个月、6个月、1年、1.5年,观察组CD4^(+)T细胞计数水平均高于对照组,病毒载量水平均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。两组不良事件发生率比较差异无统计学意义。结论整合酶抑制剂治疗HIV-1患者的临床疗效显著,能更大程度地降低病毒载量和提升CD4^(+)T细胞水平,且安全性较高,值得推广应用。

组蛋白去乙酰化酶抑制剂对呼吸道合胞病毒感染诱发的气道炎性反应作用机制

目的:从细胞实验水平探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACi)对呼吸道合胞病毒(RSV)诱导的肺部炎性反应的作用影响及机制。方法:体外培养呼吸道上皮细胞(AECs)后,分为对照组和RSV处理组,RSV处理组在细胞培养过程中加入HDACi类药物曲古抑菌素A(TSA),检测相关炎性反应因子表达的变化,同时应用聚合酶链反应(PCR)、Western印迹检测相关炎性反应信号通路关键因子、氧化应激关键因子mRNA及各蛋白的表达水平。结果:RSV感染呼吸道上皮细胞后,会使HDAC相关分子HDAC2表达上调。细胞实验加入TSA后,能够显著抑制RSV诱导的促炎细胞因子释放,氧化应激相关因子一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)表达也明显下降。结论:HDACi类药物TSA可以抑制RSV诱导的气道炎性反应并减轻氧化应激损伤。

组蛋白去乙酰化酶抑制剂诱导人胃癌细胞SGC-7901凋亡及其机制

目的研究去乙酰化酶转移酶抑制剂曲古抑菌素A(TSA)对人胃癌细胞SGC-7901的凋亡诱导作用及其机制。方法利用细胞计数、流式细胞仪及末端脱氧核苷酸转移酶生物素dUTP切口末端标记法(TUNEL)研究TSA对胃癌细胞SGC-7901的凋亡诱导作用。利用蛋白印迹法、基因芯片及实时定量PCR研究TSA对胃癌细胞凋亡相关基因表达的影响。结果TSA可诱导胃癌细胞SGC-7901发生凋亡;TSA可增加胃癌细胞SGC-7901p53,bax等基因的表达,降低BCL-2、生存素和半胱天冬酶的表达;TSA可使凋亡诱导因子抗侵袭因子(AIF)和核酸内切酶EndoG从线粒体释放并转移到细胞核内;TSA可通过调控多个凋亡相关基因的表达诱导胃癌细胞发生凋亡,且该凋亡是半胱天冬酶非依赖性的。结论TSA可通过调控多个凋亡相关基因来实现其诱导胃癌细胞凋亡的作用,这种凋亡诱导作用是通过半胱天冬酶非依赖途径进行的。

组蛋白去乙酰化酶(SIRT1)抑制剂的研究进展

SIRT1是一种依赖NAD^+辅酶的组蛋白去乙酰化酶,通过对组蛋白进行去乙酰化修饰,调控基因的的表达。SIRT1与代谢,炎症和肿瘤等多种疾病有关,有望成为肿瘤治疗的新靶点。本文对近些年SIRT1抑制剂的发展,以及它们存在的问题作了概述,并对SIRT1抑制剂的未来进行展望,将为以后SIRT1抑制剂的开发提供一些参考。

新型组蛋白去乙酰化酶抑制剂致U251细胞周期阻滞、凋亡及其机制的研究

目的探讨新型组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACi)2,2,3,3-四甲基环丙酰硫脲(TCCT)诱导人脑胶质瘤U251细胞周期阻滞、凋亡及其作用机制。方法以不同药物浓度与U251细胞共同培养48 h后,采用MTT法检测药物作用48 h后肿瘤细胞的增殖。药物作用24 h后,采用RT-PCR检测肿瘤细胞的p21WAF1/CIP1与Cyclin D1 mRNA的表达,Western blot检测HDAC3、HDAC4、Cyclin D1与p21WAF1/CIP1蛋白的表达,PI单染法分析细胞周期,Annexin V-PI双染法检测肿瘤细胞凋亡。结果 TCCT对U251细胞增殖具有明显抑制作用,药物干预48 h时的IC50为(0.461±0.108)mmol·L-1,并呈现剂量依赖性。TCCT药物干预24 h后U251细胞p21WAF1/CIP1mRNA表达上调,Cyclin D1 mRNA下调;组蛋白去乙酰化酶3(HDAC3)和组蛋白去乙酰化酶4(HDAC4)表达下调,Cyc-lin D1蛋白表达弱下调,p21WAF1/CIP1蛋白表达上调;S期细胞比例明显提高(P<0.05);细胞凋亡率明显增高(P<0.01)。结论 TCCT对U251细胞增殖有明显的抑制作用,引起肿瘤细胞S期阻滞和凋亡。其作用机制可能与其下调HDAC3、HDAC4表达,促进组蛋白乙酰化,而影响p21WAF1/CIP1和Cyclin D1的基因、蛋白的表达有关。

组蛋白去乙酰化酶抑制剂DWP0016对肺癌A549细胞和小鼠Lewis肺癌的抑制作用

目的探讨新型组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂DWP0016对肺癌的抑制作用及可能机制。方法①体外实验:DWP0016 0.625～10μmo.lL-1作用A549细胞48 h,MTT法检测细胞存活,实时荧光定量PCR检测10号染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白(PTEN)mRNA水平;Western蛋白质印迹法测定总组蛋白H3,乙酰化H3(Ac-H3),细胞周期调控因子p21,PTEN,总Akt和磷酸化Akt(p-Akt)的表达。②在体实验:小鼠腋下接种0.2 ml Lewis肿瘤细胞悬液制备肺癌模型,7 d后按照分组分别ip给予DWP001612.5,25和50 mg.kg-1及伏林司他(SAHA)50 mg.kg-1,每天1次,连续8 d。取肿瘤组织称重,计算肿瘤抑制率;免疫组化法检测肿瘤组织中Ac-H3和PTEN的表达。结果①体外实验:MTT结果显示,DWP0016抑制A549细胞增殖的IC50为2.51μmol.L-1,SAHA IC50为6.03μmol.L-1。与正常对照组相比,DWP0016 2.5μmo.l L-1组细胞组蛋白H3乙酰化及p21蛋白表达显著上升(P<0.05),PTEN的转录水平和蛋白水平上调,Akt的磷酸化水平下调(P<0.05)。②在体实验:与模型组比较,给予DWP001612.5 mg.kg-1移植瘤小鼠的瘤质量显著降低(P<0.05),抑瘤率达42.0%,给予DWP0016 50 mg.kg-1肿瘤抑制率高于SAHA 50 mg.kg-1(P<0.05);与模型组比较,肿瘤组织中Ac-H3和PTEN的表达增加。结论 DWP0016能明显抑制A549细胞增殖和Lewis肺癌模型小鼠的肿瘤生长,其机制与诱导Ac-H3的表达、激活p21、促进抑癌因子PTEN的转录及下调Akt的磷酸化水平有关。

组蛋白去乙酰化酶抑制剂对胶质瘤细胞增殖及E2F1表达的影响

目的探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACIs)对胶质瘤细胞增殖及E2F1表达的影响。方法体外培养胶质瘤细胞U251,用2个E2F1干扰质粒she2f1a和she2f1b转染细胞,空载体BS/U6为对照,噻唑蓝比色法及核染色法检测细胞增殖率;TSA处理U251细胞2 h、4 h、8 h,及多种HDACIs包括曲古菌素A(TSA)TSA、伏立诺他(SAHA)、M344、丁酸钠(NaBu)NaBu、丙戊酸(VPA)、苯甲酰胺(M344)处理细胞8 h,二甲基亚砜(DMSO)处理为对照,蛋白免疫印迹法检测E2F1表达;用TSA处理8、12、24 h,DMSO处理为对照,噻唑蓝比色法分析细胞增殖率;采用多种HDACIs(TSA,SAHA,NaBu,VPA,M344)处理细胞24 h,噻唑蓝比色法分析细胞增殖率。结果与BS/U6比较,2个E2F1干扰质粒she2f1a和she2f1b都能沉默E2F1表达和抑制细胞增殖(P<0.05);与对照组比较,TSA处理细胞2 h和4 h未见抑制E2F1表达,处理8 h能抑制E2F1表达,其它HDACIs均能抑制E2F1表达;与对照组相比,TSA处理8 h未影响细胞增殖率(P>0.05),但TSA处理12 h能抑制细胞增殖(P<0.05),处理24 h抑制效应更强(P<0.05)。而且,其它HDACIs均能抑制细胞增殖(P<0.05)。结论 HDACIs能抑制胶质瘤细胞E2F1表达及其介导的细胞增殖。

新型组蛋白去乙酰化酶抑制剂DWP0016诱导神经胶质瘤细胞U251周期阻滞及凋亡作用研究

目的:观察新型组蛋白去乙酰化酶(Histone Deacetylases,HDACs)抑制剂DWP0016对神经胶质瘤U251细胞株的作用,探讨诱导U251细胞周期阻滞及凋亡作用的机制。方法:采用噻唑蓝(MTT)法检测DWP0016对U251细胞株的增殖抑制作用;采用流式细胞术观察DWP0016对U251细胞周期的影响及凋亡诱导作用;采用实时定量PCR(real-time PCR)检测抑癌因子P21,P53的mRNA水平变化;蛋白免疫印迹法(Western blotting)测定Ac-H3,P21,P53,Pi3K,p-Pi3K,Akt,p-Akt的蛋白表达并进行光密度定量。结果:DWP0016抑制U251细胞增殖的半数抑制浓度(IC50=0.531μmol.L-1)明显低于阳性对照奥沙利铂(IC50=4.792μmol.L-1),组蛋白H3乙酰化水平显著上升;DWP0016作用后,U251细胞中细胞周期阻滞于G1期并产生凋亡,P21,P53的mRNA水平和蛋白水平明显上升,Pi3K/Akt通路中的Pi3K,Akt的磷酸化水平下降。结论:DWP0016能明显抑制U251细胞增殖,诱导细胞周期阻滞和凋亡产生,其机制与促进抑癌因子P21,P53的转录及蛋白表达,抑制细胞中Pi3K/Akt生长信号通路有关,具有良好的抗神经胶质瘤潜力和开发应用前景。