猪源SIRT5促进O型口蹄疫病毒在PK-15细胞复制

目的探究猪源SIRT5对O型口蹄疫病毒(Foot and mouth disease virus serotype O,FMDV-O)复制的影响及其调控FMDV-O复制的初步机制。方法利用Western Blotting和RT-qPCR检测FMDV-O感染PK-15细胞后内源性SIRT5表达情况;设计合成3对SIRT5特异性siRNA,通过Western Blotting和RT-qPCR检测SIRT5、FMDV-O蛋白水平、转录水平及病毒拷贝数的变化情况;构建SIRT5真核表达质粒转染至PK-15细胞,运用Western Blotting、RT-qPCR实验方法探究过表达SIRT5对FMDV-O复制的影响,同时利用RT-qPCR检测过表达SIRT5对SeV、FMDV-O诱导的I型干扰素刺激基因mRNA表达水平的影响。结果FMDV-O感染PK-15细胞后内源性SIRT5的表达上调;siRNA干扰SIRT5抑制FMDV-O的复制;过表达SIRT5促进FMDV-O复制;过表达SIRT5降低了SeV、FMDV-O诱导的干扰素刺激基因mRNA的表达水平。结论FMDV-O感染刺激宿主SIRT5表达,而猪源SIRT5通过抑制I型干扰素刺激基因的产生进而促进FMDV-O复制。本研究为进一步探究猪源SIRT5促进FMDV-O复制的机制提供参考依据。

LncRNA SNHG14调控miR-656-3p/SIRT5通路加重肝癌侵袭和迁移

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)小核仁RNA宿主基因14(SNHG14)对肝细胞癌(HCC)细胞侵袭和迁移的影响及机制。方法:采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测肝癌细胞SNHG14和miR-656-3p的表达。与sh-SNHG14,miR-656-3p抑制剂,miR-656-3p模拟物,pcDNA3.1-SIRT5共转染后,检测HepG2和MHCC97H细胞增殖、侵袭和迁移。然后用qRT-PCR测定SNHG14、miR-656-3p和SIRT5的表达水平,荧光素酶报告基因检测和RNA下调SNHG14与miR-656-3p之间的关系,以及miR-656-3p与SIRT5之间的关系。结果:HCC细胞中SNHG14表达上调,miR-656-3p表达下调。抑制SNHG14和miR-656-3p过表达,可抑制HepG2和MHCC97H细胞增殖,侵袭和迁移。SNHG14直接作用于miR-656-3p,SIRT5是miR-656-3p的靶基因。miR-656-3p抑制剂或pcDNA3.1-SIRT5可逆转sh-SN HG14对肝癌细胞增殖、侵袭和迁移的抑制作用。结论:SNHG14通过调节miR-656-3p/SIRT5轴促进肝癌细胞的侵袭和迁移。

猪SIRT5基因外显子区多态性研究

为系统挖掘猪沉默信息调节因子5(silence information regulator 5,SIRT5)基因外显子区域SNPs位点,以4个猪资源群体(从江香猪、黔北黑猪♀×巴克夏♂F1代杂交猪、夜郎黄金猪和大约克猪)为研究对象,构建品种DNA池,采用直接测序技术结合生物信息学软件分析猪SIRT5外显子多态性。结果显示:4个猪资源群体中共筛选得到G515A、C831T和A882G 3个变异位点,其中G515A属于错义突变,可由甘氨酸改变为谷氨酸;等位基因频率估算发现,C831T和A882G变异位点在从江香猪群体中多态丰度高,而在大约克猪中均呈现偏态分布;生物信息学发现,G515A突变后,猪SIRT5基因mRNA最小自由能降低,稳定性提升。本研究成功筛选出猪SIRT5基因外显子区的多态位点,为进一步验证该基因突变位点是否具有调控地方猪脂肪代谢水平提供参考。