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题名SIRT6对肝细胞脂质合成的影响及其转录基因分析
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作者
曹海超
张松
丁美玲
马澜婧
刘巧云
聂勇战
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机构
第四军医大学西京消化病医院肿瘤生物学国家重点实验室
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出处
《现代生物医学进展》
CAS
2016年第15期2831-2835,共5页
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基金
国家自然科学基金项目(81120108005)
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文摘
目的:在肝脏L-02 SIRT6-KO细胞系中,观察SIRT6在肝脏脂滴形成中的作用,初步研究在肝脏脂质代谢中SIRT6相关的转录差异基因发挥作用的分子机制。方法:利用基因敲除技术TALEN技术,构建肝脏L-02 SIRT6特异性敲除细胞系,并经q PCR和Western blot检测其表达水平;利用油酸刺激L-02 SIRT6-KO细胞及其对照组,体外模拟肝脏脂肪变的条件,并经高内涵和油红染色验证其脂滴形成能力;利用基因芯片检测L-02 SIRT6-KO及其对照细胞系中相关差异基因,并经生物信息学分析筛选脂代谢相关差异基因。结果:建立人肝脏SIRT6特异性敲除细胞系,q PCR显示m RNA下降50%,但Western blot证明SIRT6完全敲除;BODIPY实验及油红O染色发现,L-02 SIRT6-KO细胞比对照组其脂滴形成数量增多,高内涵荧光检测显示L-02 SIRT6-KO细胞中脂滴荧光强度比对照组增强(176.38±2.55 vs 104.26±2.08);通过对差异转录基因分析,发现了一组在脂质代谢中和SIRT6相关的关键基因如STEAP4、HMGA2、PDE1A、INSL4等。结论:成功建立人肝脏L-02 SIRT6-KO细胞系,并经实验证明SIRT6缺失能够促进脂滴形成;筛选到一组和SIRT6相关参与脂质代谢的关键基因。
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关键词
TALEN
L-02
sirt6-ko
脂质代谢
差异转录基因
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Keywords
TALEN
L-02 sirt6-ko
Lipid metabolism
Key transcriptional genes
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分类号
R-33
[医药卫生]
Q789
[生物学—分子生物学]
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