青海藏族先天性心脏病患者SIRT7基因突变分析

目的:筛查SIRT7基因中与青海藏族先天性心脏病发病相关的变异。方法:对254例藏族先心病患者和288例健康对照者的SIRT7基因外显子区进行Sanger测序,排除已知的单核苷酸多态性(SNP)位点、各个数据库中≥1%的位点和对照组中出现的变异,识别病例组携带的罕见编码区非同义突变并进行蛋白质有害性预测和保守性分析。结果:在1例先天性心脏病患者中筛选出一个新的错义突变SIRT7(c.C181G;p.Leu61Val),该突变在对照和公共数据库中均未出现,在线软件预测为致病性,在物种进化中高度保守。结论:本研究首次在青海藏族先天性心脏病患者中识别出SIRT7基因新的错义突变,提示SIRT7可能与藏族先天性心脏病的发生相关。

急性心肌梗死患者SIRT7基因启动子区变异的相关性研究

目的探讨急性心肌梗死(AMI)患者中SIRT7基因多态性与AMI风险的关联性。方法选择225例AMI患者为试验组,180例健康体检人群为对照组,分析两组基本资料及血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)指标水平之间的差异。克隆SIRT7基因后测序分析该基因的多态性,并分析其与AMI患病风险的相关性。结果试验组患者的吸烟、糖尿病比例均高于对照组,收缩压低于对照组,差异均有统计学意义(χ^2分别=17.13、18.13,t=9.32,P均<0.05),试验组TC、HDL水平明显低于对照组,TG、LDL水平明显高于对照组,差异均有统计学意义(t分别=7.41、13.10、-13.18、-8.33,P均<0.05)。测序结果显示SIRT7基因中GA基因型及且G等位基因频率最高(45.83%,67.01%)。关联分析结果表明g.81914125发生AA突变是AMI患病的危险因素(OR=1.63,95%CI 1.12~1.97,P<0.05)。结论AMI患者血脂指标明显上升,其SIRT7基因多态性与AMI患者的患病风险具有相关性。

pLKO.1-shSIRT7重组质粒的构建及其对人肝癌PLC/PRF/5细胞系增殖的影响

基于近年来研究发现sirtuin 7 (SIRT7)与肝癌密切相关,为此,本研究获取SIRT7基因敲除小鼠的肝细胞基因表达谱数据,在m RNA整体水平上分析SIRT7在肝细胞中的作用;另外,构建特异性下调人SIRT7基因的短发夹RNA (shRNA)表达质粒,并初步研究SIRT7基因沉默对肝癌PLC/RPF/5细胞系的影响。应用DAVID、GSEA、Cytoscape等生物信息学相关工具分析基因表达谱数据。基于pLKO.1空载质粒构建p LKO.1-sh SIRT7重组质粒并通过酶切和测序鉴定。使用Lipofectamin 2000转染重组质粒进入PLC/RPF/5细胞,并通过PCR和Western blotting验证SIRT7基因的沉默效率。通过MTT实验检测细胞增殖能力的改变和流式细胞术检测细胞周期的变化,并使用PCR检测鉴定CDC4、TK1、CDC34、BCL2等基因表达水平的变化。基因表达谱分析结果显示,SIRT7基因敲除后,基因mRNA整体水平变化主要集中在与细胞周期、细胞凋亡等相关的通路中。重组质粒酶切与测序结果显示,成功构建了pLKO.1-shSIRT7重组质粒。转染后PLC/RPF/5细胞SIRT7基因的表达得到有效沉默,与对照组相比,沉默SIRT7基因的表达可导致细胞的增殖能力降低并引起G0/G1期的细胞比例增多,PCR实验显示CDC4与BCL2表达水平增高,TK1与CDC34表达水平降低。以上研究结果提示,在肝癌PLC/RPF/5细胞系中沉默SIRT7的表达可使更多的细胞阻滞在G0/G1期,从而降低其增殖能力,其机制可能与引起细胞周期相关基因的表达改变有关。

高原地区先天性心脏病基因突变的遗传与表观遗传学研究

目的:筛查青海地区藏族先天性心脏病发病与SIRT7基因相关的变异,分析其基因突变的遗传及表观遗传的表现方式。方法:对254例藏族先心病患者(病例组)和288例健康对照者(对照组)的SIRT7基因外显子区进行Sanger测序,排除已知的单核苷酸多态性(SNP)位点、各个数据库中≥1%的位点和对照组中出现的变异,识别病例组携带的罕见编码区非同义突变并进行蛋白质有害性预测和保守性分析。结果:在1例藏族女性先天性心脏病房间隔缺损(ASD)患者中筛选出一个新的错义突变SIRT7(c.C181G;p.Leu61Val),该突变在对照和公共数据库中均未出现,在线软件预测为致病性,在物种进化中高度保守。另外从甲基化分析中发现,有4个甲基化差异位点和1个甲基化差异区域,4个位点的甲基化水平的差异性有统计学意义(P<0.05)。结论:本研究首次在青海藏族先天性心脏病患者中识别出SIRT7基因新的错义突变。同时发现基因突变位点的甲基化水平改变会导致相应基因表达发生异常,影响遗传物质的表观遗传学改变,提示SIRT7可能与藏族先天性心脏病的发生相关。