Smad3小分子抑制剂SIS3的合成研究

以3-甲基吡啶和苯甲腈为原料反应得到2-苯基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶,再通过与碘甲烷、DMF和丙二酸反应得到具有丙烯酸结构的化合物,最后通过缩合、成盐,制备获得了Smad3小分子抑制剂SIS3。产物总收率达40%。产物经-1H NMR和MS分析确认。此方法具有反应条件温和、产率高、产品易纯化等特点。

Smad3对非小细胞肺癌A549细胞和宫颈癌HeLa细胞迁移的影响

目的过表达、敲低或抑制Smad3的活性,探讨Smad3对非小细胞肺癌A549细胞和宫颈癌He La细胞迁移的影响。方法设计扩增Smad3基因全长编码序列c DNA的引物,通过分子克隆技术构建p CMV-MycSmad3过表达载体,同时设计并合成靶向Smad3的siRNA序列,在A549和He La细胞中过表达或敲低Smad3,或者利用Smad3的抑制剂SIS3 2μM处理细胞,采用细胞划痕的方法研究Smad3对A549和He La细胞迁移的影响。结果利用分子克隆技术成功构建p CMV-Myc-Smad3过表达载体。过表达Smad3促进A549和He La细胞的迁移。敲低Smad3抑制A549和He La细胞的迁移。SIS3抑制Smad3的活性导致A549和He La细胞的迁移速率变慢。结论Smad3促进A549和He La细胞的迁移。

糖肾方抑制TGF-β1/Smad3通路促进小鼠肾小管上皮细胞胆固醇流出

目的:利用高糖诱导的小鼠肾小管上皮细胞(mouse tubular epithelial cells,mTECs)观察中药糖肾方颗粒及Smad3抑制剂SIS3对于TGF-β1/Smad3通路及细胞胆固醇流出通路的影响。方法:25 mmol/L高糖诱导mTECs细胞后,分别给予糖肾方及Smad3抑制剂SIS3干预,利用ELISA试剂盒检测细胞中脂质含量,利用Western blot和Real-time PCR检测细胞中TGF-β1/Smad3通路及过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α(peroxisome proliferator-activated receptorγcoactivator 1α,PGC-1α)、肝脏X受体(liver X receptor,LXR)、ATP-结合盒转运蛋白A1(ABCA1)、ATP-结合盒转运蛋白G1(ABCG1)的表达。结果:糖肾方可以降低高糖诱导mTECs细胞中总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酸酯(triglyceride,TG)、低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)含量,上调高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C)含量(P<0.05);糖肾方及Smad3抑制剂SIS3可下调高糖诱导mTECs细胞中TGF-β1、Smad3、CollagenⅠ和Fibronectin的表达,上调PGC-1α、LXR、ABCA1、ABCG1的表达(P<0.05)。结论:糖肾方可通过抑制TGF-β1/Smad3信号通路促进细胞胆固醇流出,减轻肾损害。

重组人激活素A调节人脂肪干细胞中内胚层特异性转录因子表达的机制

目的研究重组人激活素A(activin A)调节人脂肪干细胞(human adipose stem cells,h ASCs)中内胚层特异性转录因子GATA4和FOXA2表达的机制。方法将h ASCs分为对照组、activin A组和activin A+SIS3组,分别给予相应处理。用免疫细胞化学法和高内涵分析系统测定各组细胞中磷酸化smad3蛋白(p-smad3)、限定性内胚层特异性转录因子GATA4和FOXA2的蛋白水平表达情况,用实时定量PCR法测定GATA4和FOXA2的mRNA水平表达情况。结果分组处理细胞30 min,activin A组细胞细胞核中p-smad3的表达显著高于对照组和activin A+SIS3组(P<0.05);分组处理细胞72 h,activin A组细胞中GATA4和FOXA2的mRNA和蛋白表达显著高于对照组和activin A+SIS3组(P<0.05)。结论 activin A可活化h ASCs细胞内的p-smad3信号,并促进限定性内胚层特异性转录因子GATA4和FOXA2的表达;p-smad3的特异性抑制剂SIS3可阻断activin A对h ASCs中p-smad3、GATA4和FOXA2的调节作用。activin A调节h ASCs中限定性内胚层特异性转录因子GATA4和FOXA2的表达依赖于p-smad3信号。

Smad蛋白抑制剂SIS3对细粒棘球蚴原头节的作用研究

目的研究Smad蛋白抑制剂SIS3对体外细粒棘球蚴原头节的影响。方法建立体外细粒棘球蚴培养体系,以不同浓度(12.5、25、50和100μmol/L)、不同作用时间(24、48、72和96h)对原头节进行药物(Smad蛋白抑制剂SIS3)干预试验,伊红染色和扫描及透射电镜观察不同浓度药物干预过程中原头节活力及虫体超微结构的变化。结果SIS3干预48h,50和100μmol/L SIS3组与空白对照组原头节活力显著下降;作用96h,50和100μmol/L SIS3组原头节活力分别下降(10.06±2.79)%和(19.49±2.63)%。随着药物浓度的增加,扫描电镜观察原头节体表绒毛排列紊乱,吸盘结构变形,顶突小钩脱落;透射电镜观察药物组原头节表层微毛减少或消失,合胞体带变薄,胞浆空泡化,虫体内部出现脂滴等。结论 Smad信号通路抑制剂SIS3对体外细粒棘球蚴有抑制作用,为治疗细粒棘球蚴病提供了理论基础。