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H1亚型猪流感病毒广东株HA基因的原核表达
被引量:
8
1
作者
周庆丰
马静云
+3 位作者
曹永长
谢青梅
杜礼琴
毕英佐
《华南农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第1期105-108,共4页
为了研制猪流感检测试剂和流感亚型特异性单抗筛选所需的重组抗原,本研究克隆和原核表达了H1N1亚型猪流感病毒的血凝素(hem agglutin in,HA)基因.首先采用RT-PCR方法扩增了H1亚型猪流感病毒(SIV)广东株的HA基因.测序结果表明,扩增的SIVH...
为了研制猪流感检测试剂和流感亚型特异性单抗筛选所需的重组抗原,本研究克隆和原核表达了H1N1亚型猪流感病毒的血凝素(hem agglutin in,HA)基因.首先采用RT-PCR方法扩增了H1亚型猪流感病毒(SIV)广东株的HA基因.测序结果表明,扩增的SIVHA基因cDNA长度为1 701个核苷酸,共编码566个氨基酸.BLAST分析表明,H1N1亚型SIV广东株HA基因核苷酸序列与GenBank中已发表的中国香港特别行政区、中国大陆、美国分离的经典H1亚型毒株相近,核苷酸序列同源性在89%以上.然后将HA基因的cDNA片段亚克隆至pET32 a(+)表达载体中,构建重组质粒pET32 a-H1,转化大肠杆菌BL21(DE3)并进行诱导表达.SDS-PAGE和凝胶扫描分析表明,HA基因在大肠杆菌中获得了高效表达,重组融合蛋白的表达量占菌体总蛋白的25.2%.经免疫印迹证实重组蛋白可以被SIV特异性抗体所识别.
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关键词
猪流感病毒
ha
基因
克隆
原核表达
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职称材料
H1N1亚型猪流感病毒血凝素基因的克隆与表达
2
作者
马祥
顾万军
+2 位作者
刘镇明
黄良宗
彭启明
《动物医学进展》
CSCD
2006年第8期73-76,共4页
应用RT-PCR方法扩增了1株H1N1亚型猪流感病毒的血凝素基因,并克隆到pMD 18-T Simple载体中,经PCR、酶切和测序验证克隆正确后,亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建了重组质粒pcDNA-HA。在脂质体作用下重组质粒pcDNA-HA转染Vero细胞...
应用RT-PCR方法扩增了1株H1N1亚型猪流感病毒的血凝素基因,并克隆到pMD 18-T Simple载体中,经PCR、酶切和测序验证克隆正确后,亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建了重组质粒pcDNA-HA。在脂质体作用下重组质粒pcDNA-HA转染Vero细胞。间接免疫荧光试验结果表明,血凝素基因在Vero细胞中成功进行了瞬时表达,这为猪流感病毒DNA疫苗的进一步研究奠定了基础。
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关键词
猪流感病毒
血凝素基因
克隆
表
达
VERO细胞
下载PDF
职称材料
H3亚型猪流感病毒血凝素基因在昆虫细胞中的表达及其间接ELISA检测方法的建立
被引量:
4
3
作者
万春和
刘明
+1 位作者
刘春国
张云
《中国兽医科学》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第3期252-257,共6页
根据GenBank上登录的H3亚型猪流感病毒HA基因序列设计了1对引物,经PCR扩增出HA基因目的片段,并将其克隆到pFastBacGP67C杆状病毒载体上,筛选阳性重组转座载体pFastBacGP67C-H3,转化至含有杆状病毒穿梭载体(bacmid)的DH10Bac感受态细胞,...
根据GenBank上登录的H3亚型猪流感病毒HA基因序列设计了1对引物,经PCR扩增出HA基因目的片段,并将其克隆到pFastBacGP67C杆状病毒载体上,筛选阳性重组转座载体pFastBacGP67C-H3,转化至含有杆状病毒穿梭载体(bacmid)的DH10Bac感受态细胞,构建杆状病毒表达载体,获得重组转座子rBacmid-H3,在脂质体介导下转染处于对数生长期的sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒rBv-H3,将其感染sf9昆虫细胞,收获目的蛋白。经血凝试验、SDS-PAGE、Western-blot、免疫组织化学分析,结果表明,HA蛋白得到表达,且具有良好的免疫学活性。用表达的HA蛋白作为包被抗原,初步建立了H3亚型猪流感病毒的间接ELISA检测方法,通过对93份送检的疑似猪流感血清进行检测,结果显示,检出阳性率为46.24%。上述结果为建立快速、准确、简便的H3亚型猪流感鉴别诊断试剂盒奠定了基础。
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关键词
H3亚型猪流感病毒
血凝素基因
昆虫细胞杆状病毒表达系统
间接酶联免疫吸附试验
原文传递
题名
H1亚型猪流感病毒广东株HA基因的原核表达
被引量:
8
1
作者
周庆丰
马静云
曹永长
谢青梅
杜礼琴
毕英佐
机构
华南农业大学动物科学学院
出处
《华南农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第1期105-108,共4页
基金
广东省科技计划项目(2004A2090102)
文摘
为了研制猪流感检测试剂和流感亚型特异性单抗筛选所需的重组抗原,本研究克隆和原核表达了H1N1亚型猪流感病毒的血凝素(hem agglutin in,HA)基因.首先采用RT-PCR方法扩增了H1亚型猪流感病毒(SIV)广东株的HA基因.测序结果表明,扩增的SIVHA基因cDNA长度为1 701个核苷酸,共编码566个氨基酸.BLAST分析表明,H1N1亚型SIV广东株HA基因核苷酸序列与GenBank中已发表的中国香港特别行政区、中国大陆、美国分离的经典H1亚型毒株相近,核苷酸序列同源性在89%以上.然后将HA基因的cDNA片段亚克隆至pET32 a(+)表达载体中,构建重组质粒pET32 a-H1,转化大肠杆菌BL21(DE3)并进行诱导表达.SDS-PAGE和凝胶扫描分析表明,HA基因在大肠杆菌中获得了高效表达,重组融合蛋白的表达量占菌体总蛋白的25.2%.经免疫印迹证实重组蛋白可以被SIV特异性抗体所识别.
关键词
猪流感病毒
ha
基因
克隆
原核表达
Keywords
H1N1 subtype swine influenza virus (
siv
)
ha
gene
cloning
prokaryotic
expression
分类号
S852.65 [农业科学—基础兽医学]
下载PDF
职称材料
题名
H1N1亚型猪流感病毒血凝素基因的克隆与表达
2
作者
马祥
顾万军
刘镇明
黄良宗
彭启明
机构
华南农业大学兽医学院
佛山科学技术学院
出处
《动物医学进展》
CSCD
2006年第8期73-76,共4页
基金
广东省自然科学基金资助项目(34064)
文摘
应用RT-PCR方法扩增了1株H1N1亚型猪流感病毒的血凝素基因,并克隆到pMD 18-T Simple载体中,经PCR、酶切和测序验证克隆正确后,亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建了重组质粒pcDNA-HA。在脂质体作用下重组质粒pcDNA-HA转染Vero细胞。间接免疫荧光试验结果表明,血凝素基因在Vero细胞中成功进行了瞬时表达,这为猪流感病毒DNA疫苗的进一步研究奠定了基础。
关键词
猪流感病毒
血凝素基因
克隆
表
达
VERO细胞
Keywords
siv ha gene clone expression veto cells
分类号
S852.659.5 [农业科学—基础兽医学]
下载PDF
职称材料
题名
H3亚型猪流感病毒血凝素基因在昆虫细胞中的表达及其间接ELISA检测方法的建立
被引量:
4
3
作者
万春和
刘明
刘春国
张云
机构
中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室
福建省农业科学院畜牧兽医研究所
出处
《中国兽医科学》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第3期252-257,共6页
基金
国家"十一五"科技支撑计划项目(2006BAD06A05)
黑龙江省自然科学基金项目(ZJN-0702-02)
文摘
根据GenBank上登录的H3亚型猪流感病毒HA基因序列设计了1对引物,经PCR扩增出HA基因目的片段,并将其克隆到pFastBacGP67C杆状病毒载体上,筛选阳性重组转座载体pFastBacGP67C-H3,转化至含有杆状病毒穿梭载体(bacmid)的DH10Bac感受态细胞,构建杆状病毒表达载体,获得重组转座子rBacmid-H3,在脂质体介导下转染处于对数生长期的sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒rBv-H3,将其感染sf9昆虫细胞,收获目的蛋白。经血凝试验、SDS-PAGE、Western-blot、免疫组织化学分析,结果表明,HA蛋白得到表达,且具有良好的免疫学活性。用表达的HA蛋白作为包被抗原,初步建立了H3亚型猪流感病毒的间接ELISA检测方法,通过对93份送检的疑似猪流感血清进行检测,结果显示,检出阳性率为46.24%。上述结果为建立快速、准确、简便的H3亚型猪流感鉴别诊断试剂盒奠定了基础。
关键词
H3亚型猪流感病毒
血凝素基因
昆虫细胞杆状病毒表达系统
间接酶联免疫吸附试验
Keywords
H3 subtype
siv
ha
gene
baculovirus/insect cell
expression
system
indirect ELISA
分类号
S852.659.5 [农业科学—基础兽医学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
H1亚型猪流感病毒广东株HA基因的原核表达
周庆丰
马静云
曹永长
谢青梅
杜礼琴
毕英佐
《华南农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007
8
下载PDF
职称材料
2
H1N1亚型猪流感病毒血凝素基因的克隆与表达
马祥
顾万军
刘镇明
黄良宗
彭启明
《动物医学进展》
CSCD
2006
0
下载PDF
职称材料
3
H3亚型猪流感病毒血凝素基因在昆虫细胞中的表达及其间接ELISA检测方法的建立
万春和
刘明
刘春国
张云
《中国兽医科学》
CAS
CSCD
北大核心
2010
4
原文传递
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