H1N1亚型猪流感病毒的拯救

利用8质粒拯救系统成功拯救出了猪流感病毒毒株A/Swine/TianJin/01/2004(H1N1)(A/S/TJ/04)。将猪流感病毒8个基因节段经RT-PCR合成cDNA后,分别克隆到RNA聚合酶I/II双向表达载体PHW2000中,构建成8个重组质粒。用8个重组质粒共转染COS-1细胞,30h后加入TPCK-胰酶至终浓度0.5μg/mL。共转染48小时后收获COS-1细胞及其上清,经尿囊腔接种9日龄SPF鸡胚。收获死亡鸡胚尿囊液并继续用SPF鸡胚传3代,得到有感染性的病毒。经血凝、血凝抑制验、测序分析、电镜观察等均证实了A/S/TJ/04猪流感病毒的成功拯救。这是目前国内首次报道拯救出H1N1亚型猪流感病毒,为进一步研究猪流感病毒基因组结构与功能的关系、流感跨种传播的机制以及构建新型猪流感疫苗株奠定了基础。

慢病毒载体系统研究及应用进展

近年来,慢病毒载体系统(lentivirus vector system)研究发展迅速,作为基因改造的有效手段在生命科学领域中得到广泛运用。该系统携带基因片段大,整合效率高,能够感染多种分裂期与非分裂期的细胞,实现基因在宿主体内的长期稳定表达。现就慢病毒载体系统的基本结构、发展历程以及临床应用等方面的研究情况进行综述,介绍该系统目前的发展和应用现状。