Six同源盒蛋白4蛋白在肝癌组织的表达及其对肝癌细胞恶性细胞生物学行为的影响

目的探讨Six同源盒蛋白4(Six homeobox 4,Six4)蛋白在肝癌中表达及对肝癌细胞增殖、迁移和上皮-间充质转化的影响。方法选取2018年6月到2019年6月新乡医学院第一附属医院收集的169例肝癌组织和对应的癌旁组织作为研究对象,采用免疫组织化学分析肝癌组织和癌旁组织中Six4蛋白表达水平;采用常间回文重复序列丛集-Cas9(CRISPR-Cas9)在人类肝癌细胞HepG2中建立Six4敲除细胞系,命名为对照组和SIX4 KO组。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)和5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(EdU)染色分析两组细胞增殖;采用Transwell分析两组细胞迁移;采用蛋白质印迹法(Western blot)分析上皮间质标志物上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)表达水平,计量数据比较采用t检验。结果肝癌组织中Six4蛋白表达水平(169.59±18.59)高于癌旁组织(79.43±10.43),差异有统计学意义(t=4.179,P<0.05)。本研究成功构建Six4敲除细胞系。Six4 KO组细胞吸光值(1.21±0.19)低于对照组(2.15±0.28),差异有统计学意义(t=3.441,P<0.05)。对照组细胞EdU染色阳性率(76.45±8.90)%明显高于Six4 KO组细胞(31.63±7.43)%,差异有统计学意义(t=4.693,P<0.05)。Six4 KO组细胞迁移数量(65.64±9.99)个低于对照组(119.48±12.08)个,差异有统计学意义(t=3.748,P<0.05)。Six4 KO组细胞E-cadherin相对表达水平(1.49±0.21)高于对照组(0.33±0.11),差异有统计学意义(t=5.184,P<0.05)。Six4 KO组细胞间质标记物N-cadherin和Vimentin相对表达水平(0.58±0.11、0.68±0.23)低于对照组(1.74±0.28、1.89±0.26),差异均有统计学意义(t=4.274、4.109,P<0.05)。结论SIX4蛋白在肝癌组织中呈高表达,参与肝癌细胞增殖、迁移和上皮-间充质转化等恶性细胞生物学行为。

胆囊癌组织中miR-103a-3p、SIX4表达及与患者临床病理特征和预后的关系

目的探讨胆囊癌组织中微小RNA-103a-3p(miR-103a-3p)、SIX同源盒蛋白4(SIX4)表达及与患者临床病理特征和预后的关系。方法选择80例胆囊癌患者,取手术切除癌组织和癌旁组织,采用qRT-PCR法检测癌组织和癌旁组织中miR-103a-3p、SIX4表达,分析不同临床病理特征胆囊癌组织中miR-103a-3p、SIX4表达差异,Kaplan-Meier法分析不同miR-103a-3p、SIX4表达患者的生存差异,Cox比例风险回归模型分析胆囊癌患者预后的影响因素。结果胆囊癌组织中miR-103a-3p表达低于癌旁组织(P<0.05),SIX4表达高于癌旁组织(P<0.05)。TNM分期Ⅲ期、低分化、肝脏浸润、胆总管浸润、淋巴结转移患者miR-103a-3p表达低于TNM分期Ⅰ、Ⅱ期、中高分化和无肝脏浸润、无胆总管浸润、无淋巴结转移患者(P均<0.05),SIX4表达高于TNM分期Ⅰ、Ⅱ期、中高分化和无肝脏浸润、无胆总管浸润、无淋巴结转移患者(P均<0.05)。胆囊癌患者miR-103a-3p表达与SIX4表达呈负相关(r=-0.532,P<0.05)。随访期间患者死亡59例,miR-103a-3p低表达、SIX4高表达胆囊癌患者3年总生存率低于miR-103a-3p高表达、SIX4低表达患者(Log-Rankχ2分别为6.761、5.853,P均<0.05)。肝脏浸润、淋巴结转移、SIX4高表达是胆囊癌患者预后的危险因素(P均<0.05),miR-103a-3p高表达是保护因素(P<0.05)。结论胆囊癌组织中miR-103a-3p表达上调,SIX4表达下调,且与胆囊癌恶性临床病理特征和生存率低下有关。

SIX4和miR-103a-3p在胆囊癌组织中的表达及其对胆囊癌细胞增殖和侵袭的影响

目的 探究SIX同源盒蛋白4(SIX4)、微小RNA(miR)-103a-3p在胆囊癌组织中的表达情况,以及二者对胆囊癌细胞增殖、侵袭的影响。方法 胆囊癌组织及癌旁组织取自永州市中心医院2019年10月至2021年9月32例接受手术治疗的胆囊癌患者,并将体外培养的胆囊癌细胞系GBC-SD分为对照组、mimic NC组、miR-103a-3p mimic组、miR-103a-3p mimic+pc DNA3.1组、miR-103a-3p mimic+SIX4组。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测SIX4 mRNA、miR-103a-3p水平;蛋白印迹法检测SIX4、增殖细胞核相关抗原Ki-67、增殖细胞核抗原(PCNA)以及基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP9蛋白水平;CCK-8法检测细胞增殖情况;Transwell检测细胞侵袭情况。双荧光素酶验证SIX4 mRNA 3’UTR与miR-103a-3p的结合作用。结果 与癌旁组织相比,胆囊癌组织中SIX4 mRNA水平升高,miR-103a-3p水平降低(P<0.05)。miR-103a-3p靶向负调控SIX4。与对照组、mimic NC组比较,miR-103a-3p mimic组细胞中SIX4 mRNA和蛋白水平,OD,侵袭数量,Ki-67、PCNA、MMP2、MMP9蛋白水平降低,miR-103a-3p水平升高(P<0.05);与miR-103a-3p mimic+pc DNA3.1组比较,miR-103a-3p mimic+SIX4组上述各项指标均被逆转。结论 胆囊癌组织中SIX4水平升高、miR-103a-3p水平降低,过表达miR-103a-3p可能通过靶向抑制SIX4表达,从而抑制胆囊癌细胞增殖、侵袭。