伴有焦虑症状双相抑郁患者认知功能损害与GRIN2B基因启动子区DNA甲基化相关性研究

目的探索伴有焦虑症状双相抑郁患者认知功能与N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基(glutamate iono-tropic receptor NMDA type subunit 2B,GRIN2B)基因启动子区各CpG位点甲基化水平的相关性。方法根据汉密尔顿焦虑量表(14-item Hamilton anxiety rating scale,HAMA)评分将31例双相抑郁患者分为焦虑组15例和非焦虑组16例,同期选取16名健康对照。采用蒙特利尔认知评估量表(Montreal cognitive assessment,MoCA)、数值广度测验(digital span test,DST)、连线测试A部分(trail making test A,TMT-A)、斯特鲁普色词测验(Stroop color and word test,SCWT)评估3组总体认知功能、注意力及执行控制、信息处理速度、执行功能等认知功能维度,采用Massarray质谱法检测所有受试者外周血GRIN2B基因启动子区各CpG位点的DNA甲基化水平。结果3组GRIN2B基因启动子区DNA甲基化水平差异性位点为CpG3、CpG5、CpG7、CpG10、CpG12(P<0.05),其中,焦虑组CpG12甲基化水平低于非焦虑组(36.23%±16.41%vs.50.20%±19.79%,P<0.05)。偏相关分析显示,焦虑组患者中较差的命名能力与GRIN2B基因CpG4低甲基化水平相关(r=0.670,P=0.034),较差的执行功能与CpG6低甲基化水平相关(r=0.926,P<0.001),较差的注意力与GRIN2B基因CpG8高甲基化水平相关(r=-0.810,P=0.025),较差的言语记忆与CpG9高甲基化水平相关(r=-0.810,P<0.001),较差的抽象能力与CpG10高甲基化水平相关(r=-0.756,P=0.011)。结论GRIN2B基因启动子区DNA甲基化水平与伴有焦虑症状双相抑郁患者认知功能损害可能有关联,与双相抑郁患者焦虑症状的产生也可能有关联。

宫颈癌组织中DACT2启动子甲基化与宫颈癌细胞侵袭和转移的关联

目的:探究宫颈癌组织中β-环连蛋白抑制基因2(DACT2)启动子甲基化与宫颈癌细胞侵袭和转移的相关性。方法:选择2020年1月—2022年3月在南阳市第一人民医院就诊的60例宫颈癌患者作为观察组,再选择同期60例健康体检者作为对照组,采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和实时荧光定量RT-PCR检测DACT2 mRNA的表达,并对DACT2进行免疫组化观察;通过甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)和亚硫酸氢盐基因组测序(BGS)分析DACT甲基化水平。采用Pearson检验法,分析DACT2启动子甲基化与宫颈癌细胞侵袭和转移的关联性。结果:对比宫颈癌患者的病理特征中分期、有无细胞转移以及宫颈浸润深度患者所占百分比,差异有统计学意义(t=4.747、5.368、0.834,P<0.05),而年龄和肿瘤大小比较,差异无统计学意义(t=1.004、0.895,P>0.05);宫颈癌组织、癌旁组织和正常组织中DACT2去甲基化发生率分别为45.00%、6.67%和5.00%,差异有统计学意义(χ^(2)=26.454,P<0.05);宫颈癌甲基化组DACT2 mRNA和蛋白表达水平显著低于宫颈癌非甲基化组,差异有统计学意义(t=11.332、8.543,P<0.05);相关性分析结果表明,DACT2启动子甲基化是引发宫颈癌细胞侵袭和转移的因素,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:宫颈癌细胞侵袭和转移主要影响因素就是DACT2启动子甲基化,且DACT2启动子甲基化率越高,细胞侵袭和转移程度就越高。因此临床应密切监测患者DACT2启动子甲基化情况,有助于优化宫颈癌患者的治疗方案。

ChREBP基因启动子甲基化调控TLRs/MyD88/NF-κB信号通路对2型糖尿病发病机制的研究

目的研究探讨碳水化合物反应原件结合蛋白(ChREBP)基因启动子的甲基化水平在2型糖尿病(T2DM)发病机制中的作用,同时验证CD14+类白细胞参与T2DM的发病机制。方法使用单纯随机抽样方法选取2019年1月至6月间内蒙古医科大学附属医院收治的T2DM患者40例(T2DM组),同时选取正常体检者20名(对照组)作为研究对象纳入分析。留取外周血测定CD14+单核细胞Toll样受体2(TLR2)、依赖髓样分化因子88(MyD88)、核因子κB(NF-κB)等相关因子表达水平,并比对正常人和T2DM患者全血DNA中ChREBP基因启动子的甲基化水平。结果T2DM组ChREBP甲基化水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。T2DM组TLR4、MyD88为1.23±0.32、1.86±0.36,均显著高于对照组(0.97±0.36、0.84±0.33),NF-κBP65、磷酸化IκB-ɑ为1.37±0.31、0.87±0.29,均显著低于对照组(1.95±0.31、1.50±0.37),差异均有统计学意义(P<0.05)。进一步分析可见,ChREBP甲基化水平与TLR4、MyD88呈正相关(r=0.334、0.387,P<0.05),与NF-κBP65和磷酸化IκB-ɑ呈负相关(r=-0.298、-0.326,P<0.05)。结论ChREBP基因启动子的甲基化水平增高与T2DM发病相关联,同时CD14+类白细胞参与T2DM的发生,提示ChREBP基因启动子甲基化可能通过调控TLRs/MyD88/NF-κB信号通路参与T2DM的发生过程。

MRI影像组学无创预测脑胶质母细胞瘤MGMT启动子甲基化状态的价值

目的:探讨MRI影像组学模型术前预测脑胶质母细胞瘤(GBM)O 6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶启动子甲基化(MGMT-PM)状态的价值。方法:回顾性分析2018年1月-2021年10月在本院经病理证实的130例脑GBM患者的临床资料和MRI图像(ADC和对比增强3D-T 1WI)。其中,MGMT-PM阳性组(PM率≥8%)58例,MGMT-PM阴性组(PM率<8%)72例。按7:3的比例将所有患者随机分为训练集(91例)和验证集(39例)。由2位放射科医师独立在ADC和CE-3D-T 1WI图像上逐层勾画ROI,获得病灶的全域容积感兴趣区(VOI),分别提取851个组学特征。然后,采用最小绝对收缩和选择算法(LASSO)进行特征降维,将保留下来的特征与其对应的系数进行线性组合,构建影像组学模型并计算每例患者的影像组学评分(Radscore),得到Radscore ADC、Radscore CE-T 1WI和Radscore联合三组评分。采用ROC曲线评估各组学模型的诊断效能,将最优模型的Radscore和临床特征(年龄、性别)纳入logistic回归分析构建预测MGMT-PM状态的临床-组学综合模型,并绘制其诺模图。采用ROC曲线评价综合模型的预测效能,并采用校准曲线和决策曲线分别评估此模型的校准度和临床实用价值。结果:在训练集中,Radscore联合预测MGMT-PM状态的AUC为0.872,优于单一序列(Radscore ADC:AUC=0.798,P<0.05;Radscore CE-T 1WI:AUC=0.840,P<0.05);在验证集中得到了一致的结论。在影像组学模型中加入临床特征后,可提高预测效能,临床-组学综合模型的AUC、敏感度和特异度分别为0.904、92.50%和78.43%。校准曲线显示临床-组学综合预测模型在训练集和验证集中预测概率与实际概率之间的差异均无统计学意义(P=0.051、0.284)。决策曲线分析表明综合预测模型具有一定的临床实用价值。结论:MRI影像组学模型有助于术前无创性预测GBM的MGMT启动子甲基化状态,多序列结合及引入临床特征能提高模型的预测效能。

Wnt2基因启动子DNA甲基化在子痫前期发病机制中的作用

目的检测胎盘组织中Wnt2基因启动子区的DNA甲基化程度,探讨Wnt2基因与子痫前期发病的关系。方法收集产科病房经剖宫产分娩的早发型重度子痫前期患者30例作为早发型重度子痫前期组(ZPE),晚发型重度子痫前期患者30例作为晚发型重度子痫前期组(WPE),同期住院经剖宫产分娩的正常晚期妊娠妇女30例作为对照组(NC)。采用甲基化特异性PCR技术检测三组胎盘组织中Wnt2基因启动子区的DNA甲基化程度。结果与NC组相比,ZPE组及WPE组Wnt2基因启动子区的DNA甲基化程度均显著升高(P<0.05);ZPE组及WPE组差异无统计学意义。结论正常晚期妊娠妇女、早发型及晚发型重度子痫前期患者的胎盘组织中,均存在Wnt2基因启动子区的DNA不完全甲基化。与正常晚期妊娠妇女相比,早发型重度子痫前期及晚发型重度子痫前期患者胎盘组织中Wnt2基因启动子区的DNA甲基化程度均明显增加。

绵羊脂肪组织AGPAT2基因启动子区DNA甲基化及其表达研究

为研究绵羊脂肪沉积过程与AGPAT2基因启动子区DNA甲基化水平及其表达的相关性,本研究以尾型不同的湖羊与广灵大尾羊的尾部脂肪组织为实验材料,通过生物信息学软件和亚硫酸氢盐测序(Bisulfite Genomic Sequencing PCR,BSP)分析AGPAT2启动子区序列的CpG岛和甲基化水平;以qPCR技术检测绵羊尾部脂肪组织中AGPAT2基因的表达水平。结果表明,AGPAT2启动子区存在CpG岛;在尾部脂肪组织中,湖羊与广灵大尾羊的AGPAT2基因启动子区的目的片段甲基化率分别为90.5%和76.2%;湖羊AGPAT2基因启动子区中的目的序列发生甲基化位点高于广灵大尾羊;广灵大尾羊AGPAT2mRNA的相对表达量在绵羊尾部脂肪组织中极显著高于湖羊;对AGPAT2启动子区的甲基化水平与其表达水平进行Pearson相关系数分析可知,二者呈中度负相关(r=-0.364,P=0.478)。综上所述,本研究揭示AGPAT2基因在转录水平的表达受启动子区甲基化的负调控,从而推测AGPAT2基因的DNA甲基化水平与绵羊的脂肪沉积过程具有一定的相关性。

miR-214-5p通过DNMT1介导的AXIN2基因DNA甲基化修饰在皮肤基底细胞癌中的作用机制

目的探讨皮肤基底细胞癌中轴抑制蛋白2(Axis inhibition protein 2,AXIN2)基因启动子甲基化对基因转录的影响及miR-214-5p通过靶向DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase1,DNMT1)对AXIN2甲基化率的调控机制。方法收集2022年1月-2023年6月在广州市皮肤病防治所就诊治疗的102例皮肤基底细胞癌(Cutaneous basal cell carcinoma,BCC)患者作为研究对象,提取癌组织和癌旁正常组织标本及基线资料。焦磷酸测序法检测AXIN2基因启动子区甲基化率。实时荧光定量PCR检测AXIN2、DNMT1基因mRNA和miR-214-5p的表达水平。将miR-214-5p模拟物(mimic)、抑制物(inhibitor)及其阴性对照(mimic NC和inhibitor NC)分别对基底细胞癌A431细胞进行转染,48 h后检测DNMT1基因mRNA表达水平和AXIN2基因甲基化率。结果BCC癌组织的AXIN2基因甲基化率显著高于癌旁正常组织(t=5.128,P<0.001),AXIN2基因mRNA相对表达水平显著低于癌旁正常组织(t=7.826,P<0.001),DNMT1基因mRNA表达水平显著高于癌旁正常组织(t=4.838,P<0.001),miR-214-5p表达水平显著低于癌旁正常组织(t=5.426,P<0.001)。BCC癌组织的AXIN2基因甲基化率与其mRNA表达水平呈负相关(r=-0.793,P<0.001),DNMT1基因mRNA水平与AXIN2基因甲基化率呈正相关(r=0.814,P<0.001),miR-214-5p表达水平与DNMT1基因mRNA水平呈负相关(r=-0.747,P<0.001)。双荧光素酶报告基因实验结果证实,DNMT1是miR-214-5p的靶基因。细胞转染后,与mimic NC、inhibitor和inhibitor NC比较,mimic的DNMT1基因mRNA水平、AXIN2基因甲基化率显著降低(P<0.001);而inhibitor的DNMT1基因mRNA水平和AXIN2基因甲基化率相较于其他三组明显上升(P<0.001)。结论miR-214-5p可通过调控下游靶蛋白DNMT1表达,影响AXIN2基因的DNA甲基化率,调控AXIN2基因的表达水平,参与皮肤基底细胞癌的发生机制。

TET2重塑CXCR4 DNA甲基化对急性心肌梗死小鼠心肌组织自噬、炎症反应及凋亡的影响

目的:探究急性心肌梗死(AMI)过程中内皮细胞tet甲基胞嘧啶双加氧酶2(TET2)对趋化因子受体4(CXCR4)DNA甲基化的影响以及对AMI小鼠心肌组织自噬、炎症反应及组织细胞凋亡的影响机制,为临床探究AMI发展的分子机制提供理论依据。方法:8周龄雄性C57/BL6小鼠50只,制备AMI模型,尾部注射TET2、CXCR4过表达质粒;蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测心肌组织TET2、CXCR4、微管相关蛋白3(LC3)、P62、B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(Bcl-2)关联X蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)、Bcl-2表达;甲基化检测CXCR4 DNA甲基化水平;酶联免疫吸附法(ELISA)检测心肌组织内炎性因子白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平;原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测各组心肌组织细胞凋亡指数。结果:与假手术组比较,模型组心肌组织内TET2、CXCR4均表达上调,TET2、CXCR4均在心肌组织内过表达,TET2过表达促进CXCR4表达,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,TET2 mimic组CXCR4启动子区域DNA甲基化程度降低,CXCR4蛋白表达升高,差异有统计学意义(P<0.05);与假手术组比较,模型组小鼠心肌组织自噬蛋白LC3、抑制细胞凋亡蛋白Bcl-2表达下调,炎性因子IL-6、TNF-α、IL-1β水平、自噬蛋白P62、促细胞凋亡蛋白Bax、cleaved Caspase-3表达上调,差异有统计学意义(P<0.05);TET2、CXCR4过表达进一步下调LC3、Bcl-2蛋白表达,上调炎性因子IL-6、TNF-α、IL-1β水平,P62、Bax、cleaved Caspase-3蛋白表达;TET2、CXCR4二者联合体现出最低LC3、Bcl-2蛋白表达,最高炎性因子IL-6、TNF-α、IL-1β水平以及P62、Bax、cleaved Caspase-3蛋白表达,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:AMI发展中,TET2通过降低CXCR4 DNA甲基化,促进CXCR4基因表达,进而抑制AMI小鼠心肌组织自噬,上调炎症反应及细胞凋亡程度,促进疾病发展。

血清CysC、β_(2)-MG与急性髓系白血病患者去甲基化治疗效果的关系

目的:分析血清胱抑素C(Cys C)、β_(2)-微球蛋白(β_(2)-MG)与急性髓系白血病(AML)患者去甲基化治疗效果的关系。方法:使用前瞻性队列研究方法,纳入2019年2月-2022年1月内蒙古医科大学附属医院收治的98例AML患者进行研究,全部患者均接受地西他滨(DAC)+HAG方案治疗,以28 d为1个疗程,治疗3-4疗程。每个疗程结束时评估患者的治疗效果,达到完全缓解(CR)的患者进入巩固治疗,全部疗程结束未达到CR的患者视为治疗失败。治疗前检查项目包括血常规参数、血清Cys C、β_(2)-MG,并统计患者一般临床资料。根据统计结果,使用logistic回归分析血清Cys C、β_(2)-MG与AML患者去甲基化治疗效果的关系;绘制受试者工作特征(ROC)曲线,以曲线下面积(AUC)评估血清Cys C、β_(2)-MG对AML患者去甲基化治疗效果的预测效能。结果:入组98例AML患者,治疗期间5例被剔除,最终93例患者完成化疗疗程,其中23例初次诱导化疗(1-2疗程)达到CR,再诱导化疗(3-4疗程)后11例达到CR,治疗成功率为36.56%(34/93)。去甲基化治疗失败患者预后不良、预后中等占比高于治疗成功患者,血小板(PLT)、血红蛋白(Hb)水平低于治疗成功患者,血清Cys C、β_(2)-MG表达水平高于治疗成功患者,差异有统计学意义(P<0.05)。logistic回归分析显示,血清Cys C、β_(2)-MG高表达及预后不良是AML患者去甲基化治疗失败的独立危险因素(OR>1,P<0.05)。ROC曲线显示,血清Cys C、β_(2)-MG单独及联合预测AML患者去甲基化治疗效果的AUC值分别为0.788、0.785、0.834。结论:AML患者去甲基化治疗失败与血清Cys C、β_(2)-MG高表达有关,治疗前检测血清Cys C、β_(2)-MG能够预测AML患者去甲基化治疗失败风险。

结直肠癌患者肠道菌群及粪便SDC2基因甲基化检测意义及其关系研究

目的探讨粪便Syndecan-2(SDC2)甲基化与肠道菌群失调在结直肠癌(CRC)中的意义。方法将70例CRC患者(CRC组)、65例结直肠腺瘤性息肉(CAP)患者(CAP组)及50例健康志愿者(对照组)作为研究对象,检测其粪便DNA SDC2甲基化与肠道菌群失调情况,实时荧光定量PCR法定量分析粪便菌群,Spearman相关系数分析CRC患者粪便SDC2甲基化与其定量分析结果之间的相关性。结果实时荧光定量PCR法在分析粪便菌群中的稳定性及特异性良好,CRC组粪便SDC2甲基化阳性率及肠道菌群失调率均高于对照组与CAP组(P<0.05);与对照组相比,CRC组及CAP组有益菌定量分析水平降低,CRC组肠道菌群中有害菌水平上升(P<0.05)。CRC患者粪便SDC2甲基化与肠道乳酸杆菌、双歧杆菌定量水平呈负相关(P<0.05),与大肠杆菌、粪肠球菌以及脆弱拟杆菌定量分析水平呈正相关(P<0.05)。结论CRC患者存在明显的肠道菌群紊乱表现及高水平SDC2甲基化阳性率,肠道菌群可能通过影响SDC2甲基化参与CRC发生与发展。

妊娠期高血压疾病孕妇血清miR-21、miR-122及其启动子区甲基化水平变化

目的探讨妊娠期高血压疾病(HDP)孕妇血清miR-21、miR-122及其启动子区甲基化水平变化及其临床意义。方法选择HDP孕妇142例(观察组),其中妊娠期高血压80例、子痫前期62例,同期选择正常妊娠孕妇50例作为对照组。采集所有研究对象空腹外周静脉血,离心留取血清,分别采用RT-qPCR法和甲基化特异性聚合酶链反应法检测血清miR-21、miR-122及其启动子区甲基化,分析HDP孕妇血清miR-21、miR-122及其启动子区甲基化水平与临床特征的关系。结果观察组血清miR-21、miR-122水平均显著高于对照组(P均<0.05);子痫前期孕妇血清miR-21、miR-122水平均显著高于妊娠期高血压孕妇(P均<0.05)。观察组miR-21、miR-122启动子区甲基化阳性率均显著低于对照组(P均<0.05);子痫前期孕妇血清miR-21、miR-122启动子区甲基化阳性率均显著低于妊娠期高血压孕妇(P均<0.05)。HDP孕妇血清miR-21、miR-122及启动子区甲基化阳性率均与收缩压、舒张压、24 h尿蛋白量有关(P均<0.05),而与年龄、孕周、孕前BMI无关(P均>0.05)。结论HDP孕妇血清miR-21、miR-122水平显著升高,其启动子区甲基化阳性率显著降低;血清miR-21、miR-122及其启动子区甲基化水平与HDP的发生、发展有关。

胰腺癌患者锌指蛋白772基因启动子区DNA甲基化的特征分析

目的:探讨胰腺癌患者锌指蛋白(ZNF)772基因启动子区DNA甲基化的特征。方法:选择胰腺癌患者118例为胰腺癌组,选择同期胰腺炎患者118例为胰腺炎组,检测两组ZNF772基因表达水平与启动子区DNA甲基化情况,调查患者的病理资料并进行相关性分析。结果:胰腺癌组的ZNF772基因相对表达水平低于胰腺炎组,差异有统计学意义(P<0.05)。胰腺癌组的ZNF772基因启动子区DNA甲基化率为18.6%,高于胰腺炎组的1.7%,差异有统计学意义(P<0.05)。在胰腺癌组中,不同临床分期、组织学分化、淋巴结转移、远处转移患者的ZNF772基因启动子区DNA甲基化率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归显示临床分期、组织学分化、淋巴结转移、远处转移都为影响ZNF772基因启动子区DNA甲基化的重要因素(P<0.05)。结论:胰腺癌患者多伴随有ZNF772基因启动子区DNA甲基化,从而导致ZNF772基因表达水平下降,其可能作为一种监测胰腺癌病情的重要指标。

基于CRISPR-Cas12a检测成人型弥漫性胶质瘤MGMT启动子甲基化

目的应用成簇规律间隔短回文重复序列相关12a(CRISPR-Cas12a)方法检测成人型弥漫性胶质瘤O 6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)启动子甲基化情况,并初步评价该方法的检测效能及其与高通量测序结果的一致性。方法选择2022年3月—2022年4月解放军总医院第一医学中心神经外科手术切除的初治成人型弥漫性胶质瘤组织样本,分别利用CRISPR-Cas12a方法和高通量测序对样本MGMT启动子甲基化情况进行检测。计算CRISPR-Cas12a方法的灵敏度、特异性等效能指标,并利用配对χ2检验(McNemar检验)及Kappa一致性检验分析CRISPR-Cas12a方法与高通量测序结果的一致性。结果共纳入32例成人型弥漫性胶质瘤组织样本。CRISPR-Cas12a方法检测成人型弥漫性胶质瘤组织样本MGMT启动子甲基化序列的灵敏度为98.4%,特异性为90.9%;检测MGMT启动子非甲基化序列的灵敏度为100%,特异性为90.5%。两种CRISPR-Cas12a方法的检测结果与高通量测序结果一致性均较好。结论Crispr-Cas12a方法能较准确地对成人型弥漫性胶质瘤组织样本MGMT启动子甲基化情况进行检测,有望成为一种新兴的检测MGMT启动子甲基化情况的方法。

粪便SDC2基因甲基化检测在结直肠癌早期诊断中的应用价值

目的 探讨粪便SDC2基因甲基化检测在结直肠癌早期诊断中的应用价值。方法 采用定量甲基化特异性PCR技术检测接受结直肠癌(CRC)筛查的患者粪便样本中SDC2的甲基化(mSDC2),SDC2基因甲基化检测阳性患者进一步行结肠镜检查,患者均通过结肠镜检查或术后病理检查腺癌(CRC)明确诊断,病理区分为结直肠癌、进展型腺瘤、非腺瘤性息肉、炎症。采用Pearson相关法分析SDC2基因甲基化检测结直肠肿瘤阳性预测值(PPV)与年龄的相关性。结果 纳入268例mSDC2阳性患者,其中确诊结直肠癌23例、进展型腺瘤42例、非腺瘤息肉20例、炎症18例,余下患者结肠镜检查未发现明显异常。<60岁结直肠癌患者SDC2基因甲基化检测PPV为7.04%(10/142),≥60岁者为30.23%(13/43);mSDC2在结直肠癌患者中的PPV随着年龄增长而增加,差异有统计学意义(P<0.05)。随年龄增长,mSDC2循环阈值与年龄呈负相关(r=-0.68,P<0.05)。结直肠癌患者mSDC2的Ct值比进展型腺瘤、非腺瘤息肉、炎症病变均低,差异有统计学意义(P均<0.05)。按mSDC2中位数为34.58分为mSDC2高值12例与低值11例,不同mSDC2水平的结肠癌患者,其年龄、性别、临床分期、CEA值差异无统计学意义(P均>0.05)。结论 粪便SDC2基因甲基化检测作为一种非侵入性的检测手段,有助于癌前病变的筛查及结直肠癌早期诊断。

甲基化SIM2、GNA12、CTGF在子痫前期孕妇中表达水平及其对疾病的预测价值

目的 探究子痫前期孕妇血浆中甲基化DNA的表达水平及对子痫前期发生的预测价值。方法 纳入2022年1-12月在该院确诊的82例子痫前期孕妇作为观察组,另外纳入82例健康孕妇作为对照组。提取患者游离总DNA,经过DNA亚硫酸氢盐修饰后通过实时荧光定量PCR反应(qRT-PCR)检测患者血浆中甲基化单意同源物2(SIM2)、结缔组织生长因子(CTGF)及鸟嘌呤核苷酸结合蛋白(GNA12)基因的相对表达水平,并采用相关性分析及受试者工作特征(ROC)曲线对各甲基化DNA预测子痫前期发生的价值进行评估。结果 观察组血浆甲基化SIM2、GNA12、CTGF相对表达水平均高于对照组(P<0.05),且重度子痫前期孕妇各甲基化DNA相对表达水平更高(P<0.05)。相关性分析结果表明,血浆甲基化SIM2、GNA12、CTGF相对表达水平与孕妇发生子痫前期均呈正相关(P<0.05)。ROC曲线分析结果表明,血浆甲基化SIM2、GNA12、CTGF相对表达水平单独及联合检测对预测孕妇子痫前期的效能均较好,且三者联合检测的预测效能最高(曲线下面积为0.888,95%CI:0.827~0.949)。结论 相较于健康孕妇,子痫前期孕妇血浆中甲基化SIM2、GNA12、CTGF相对表达水平均较高,且其与孕妇子痫前期的发生率呈正相关,血浆甲基化SIM2、GNA12及CTGF相对表达水平有望成为判断子痫前期是否发生的重要指标。

清道夫受体B1基因启动子甲基化与冠心病的关联分析

目的 探讨清道夫受体B1(SCARB1)基因启动子区域甲基化与冠心病发病的关联性。方法 选取2018年12月至2020年5月在上海交通大学医学院附属仁济医院就诊的120例冠心病患者作为病例组,并随机选取同期健康体检人群中性别和年龄匹配的140名健康受试者作为对照组,进行病例对照研究。采用亚硫酸盐转化,扩增目标区域后采用高通量测序对基因组进行甲基化检测,分析两组SCARB1基因启动子区域CpG位点的甲基化差异。结果 病例组SCARB1+67基因的甲基化水平显著高于对照组(P<0.001),SCARB1+134基因的甲基化水平显著低于对照组(P<0.001),且在男性(P均<0.001)、女性(P均<0.001)冠心病患者中与对照组比较差异有统计学意义。病例组SCARB1基因的平均甲基化水平显著低于对照组[(80.27±2.14)%比(81.11±1.27)%;P=0.006],且只在男性冠心病患者中差异有统计学意义(P=0.002)。结论 SCARB1基因的甲基化水平与冠心病的发病存在关联,可能参与其发生发展过程。

NOS2基因DNA甲基化编辑调节NO浓度影响肌肉发育通路基因的表达

旨在探究对一氧化氮合成酶(NOS)2进行DNA甲基化编辑后对肌红蛋白的调控作用机制,并研究其对神经元一氧化氮合酶(nNOS)和内皮细胞一氧化氮合酶(eNOS)的表达水平是否有影响。本试验采用DNA甲基化编辑技术在猪肾细胞系PK-15细胞对基因NOS2进行甲基化编辑,在猪肾细胞中检测NOS2基因启动子DNA甲基化水平、NOS2表达水平、细胞内一氧化氮浓度以及肌纤维和肌红蛋白相关基因的表达。结果发现,NOS2基因启动子前500 bp区域平均DNA甲基化水平降低,但差异不显著,而gRNA2结合位点附近的CpG位点甲基化水平增高。此外,对NOS2进行甲基化编辑后,NOS2基因表达量和其iNOS蛋白质表达量显著降低。随着NOS2表达降低,nNOS和eNOS表达显著增加。MYHC-Ⅱb和MYHC-Ⅱx的表达水平显著下降,Myoglobin蛋白表达也显著下降。综上,NOS2基因的异常表达能够影响细胞中的NO生成,同时也会影响NOS1和NOS3的表达,以及和肌肉发育相关基因的表达。

PROSER2基因在牛中的印记表达和DNA甲基化分析

为了研究牛PROSER2基因的印记状态和表观遗传修饰机制,本研究首先应用荧光定量RT-PCR方法分析PROSER2基因在牛组织和胎盘中的表达,进而应用基于单核苷酸多态性(SNP)的RT-PCR产物直接测序法分析等位基因表达状态,最后采用亚硫酸盐直接测序法对位于PROSER2基因启动子及第1个外显子区域和位于外显子4区域的2个CpG岛的甲基化状态进行了分析。结果显示,PROSER2基因在所有检测的6个组织(心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、大脑)及胎盘中均广泛表达。PROSER2基因在牛的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、大脑以及胎盘中均为单等位基因表达。根据杂合胎盘父母的基因型,发现PROSER2基因在牛中是父源印记基因,这与其在人中的印记状态一致。对PROSER2基因启动子和第一个外显子处CpG岛区域的甲基化状态进行分析,在牛的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、大脑和胎盘中均发现1个差异甲基化区,说明DNA的甲基化修饰可能参与PROSER2基因在荷斯坦奶牛中的印记表达。本研究结果可为进一步研究PROSER2基因的功能和印记调控机制提供参考依据。

血浆SDC2基因甲基化检测对胃癌诊断的应用价值

目的探讨在血浆中检测SDC2基因启动子甲基化在胃癌诊断中的应用价值。方法收取2019年3月至2021年9月共211例血浆标本,其中胃癌患者94例作为胃癌组,同期健康体检者117名作为健康对照组,采用基于甲基化特异性PCR的方法检测血浆中甲基化的SDC2。结果SDC2检测在Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期胃癌中的阳性率分别为:27.8%(5/18)、27.3%(6/22)、47.8%(11/23)、57.1%(4/7),敏感度为38.3%(36/94),特异度为94.9%(111/117),诊断胃癌的AUC为0.645。甲基化状态与患者年龄、性别、肿瘤部位、肿瘤大小、分化程度及淋巴结转移之间不存在相关性(P均>0.05)。但随着肿瘤分期增加,SDC2甲基化检测对诊断胃癌的敏感度也逐渐增加。结论血浆SDC2甲基化检测对胃癌的诊断有一定的临床价值。

TBX2基因在头颈鳞癌中甲基化相关的预后分析

目的探究TBX2基因与头颈鳞癌(head and neck squamous cell carcinoma,HNSCC)的关系,分析甲基化预后的价值。方法综合利用UCSC Xena数据库、基因表达综合(Gene Expression Omnibus,GEO)数据库、人类蛋白质图谱(Human Protein Atlas,HPA)数据库、UALCAN数据库挖掘TBX2基因的表达、DNA甲基化和临床相关性,利用基因集富集分析(gene set enrichment analysis,GSEA)法富集TBX2在HNSCC中所参与的信号通路。结果TBX2基因在HNSCC中高表达,TBX2基因高、低表达组HNSCC患者的总生存率(overall survival,OS)无明显差异,但HNSCC中TBX2基因的表达与临床分级分期有关。TBX2基因某些cg位点的低甲基化水平与较差的OS和无进展生存期(progression free survival,PFS)密切相关。GSEA结果显示,TBX2基因主要参与钙信号通路、黏着斑、蛋白酶体等多条通路。结论TBX2基因可作为HNSCC特异性诊断和预后的生物标志物。