梅花鹿鹿茸总蛋白对庆大霉素诱导肾毒性的保护作用及其机制

目的研究梅花鹿鹿茸总蛋白(SVPr)对庆大霉素(GM)诱导的肾损伤的保护作用及其机制。方法(1)体外培养HEK293细胞分为正常对照组(给予等量PBS)、GM模型组(GM 3 g·L^(-1)孵育24 h)和GM+SVPr组(给予SVPr 1,2和4 g·L^(-1)孵育24 h后,分别加入GM 3 g·L^(-1)共同孵育24 h)。以MTT法测定GM对HEK293细胞存活率的影响;以生化试剂盒方法分别测定HEK293细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)含量、细胞裂解液中谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性。(2)将42只ICR小鼠随机分为正常对照组(ig蒸馏水10 d,第3～10天ip给予生理盐水)、GM模型组(ig蒸馏水10 d,第3～10天ip给予GM 100 mg·kg^(-1))、阳性对照组(ig给予芥子酸20 mg·kg^(-1)10 d,第3～10天给药前6 h ip给予GM100 mg·kg^(-1))和SVPr组(分别ig给予SVPr 50,100和200 mg·kg^(-1)10 d,第3～10天给药前6 h ip给予GM100 mg·kg^(-1))。实验结束后记录小鼠体质量和肾质量,计算肾指数;以生化试剂盒方法分别检测小鼠血清中血尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)的水平,肾组织中过氧化氢酶(CAT)和SOD活性、MDA和GSH含量;ELISA法检测血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)水平;HE染色观察肾组织病理变化。结果体外细胞实验结果表明,SVPr 1,2和4 g·L^(-1)预处理可缓解GM 3 g·L^(-1)诱导的HEK293细胞存活率的降低(P<0.01);缓解GM诱导的HEK293细胞GSH和SOD的降低,及MDA和LDH水平的升高(P<0.01)。小鼠实验结果表明,SVPr 50,100和200 mg·kg^(-1)和阳性药芥子酸20 mg·kg^(-1)均显著抑制GM 100 mg·kg^(-1)诱导的小鼠肾指数、BUN、Cr、MDA、TNF-α和IL-6水平的升高(P<0.05,P<0.01),以及SOD,CAT和GSH水平的降低(P<0.05,P<0.01),并改善肾组织病理变化。结论 SVPr可有效减轻GM诱导的小鼠肾损伤,其机制可能与抑制氧化应激和炎症反应有关。

梅花鹿鹿茸总蛋白对糖尿病肾病大鼠肾损伤的治疗作用及分子机制

目的探讨梅花鹿鹿茸总蛋白提取物(SVPr)对糖尿病肾病(DN)大鼠肾损伤的治疗作用及分子机制。方法将120只Sprague Dawley大鼠按照简单随机数字表法分为对照组、模型组、二甲双胍组、低剂量SVPr组、中剂量SVPr组、高剂量SVPr组,每组20只。模型组、二甲双胍组、低剂量SVPr组、中剂量SVPr组、高剂量SVPr组大鼠造模前禁食12 h,单次腹腔注射链脲佐菌素50 mg•kg^(-1)制备DN大鼠模型;造模成功后,二甲双胍组大鼠给予二甲双胍500 mg•kg^(-1)•d^(-1)灌胃,低剂量SVPr组、中剂量SVPr组、高剂量SVPr组大鼠分别经尾静脉注射质量浓度为1.47、2.94、4.41 g•L^(-1)的SVPr溶液0.1 mL,对照组及模型组大鼠注射等量生理盐水,每日1次,持续给药4周。采用生物化学法检测各组大鼠血尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)、血糖、24 h尿蛋白水平,酶联免疫吸附试验法检测各组大鼠肾组织中活性氧(ROS)、核因子-κB(NF-κB)水平,Western blot法检测各组大鼠肾组织中沉默调节蛋白1(SIRT1)、核因子E2相关因子2(Nrf-2)、血红素加氧酶-1(HO-1)蛋白相对表达量。结果模型组大鼠BUN、SCr、24 h尿蛋白、血糖水平均显著高于对照组(P<0.05);低剂量SVPr组、中剂量SVPr组、高剂量SVPr组和二甲双胍组大鼠BUN、SCr、24 h尿蛋白、血糖水平显著低于模型组(P<0.05);高剂量SVPr组大鼠SCr、24 h尿蛋白水平显著低于二甲双胍组(P<0.05),高剂量SVPr组与二甲双胍组大鼠BUN、血糖水平比较差异无统计学意义(P>0.05);中剂量SVPr组大鼠SCr水平显著低于二甲双胍组,BUN、血糖水平显著高于二甲双胍组(P<0.05);中剂量SVPr组与二甲双胍组大鼠24 h尿蛋白水平比较差异无统计学意义(P>0.05);低剂量SVPr组大鼠BUN、24 h尿蛋白、血糖水平显著高于二甲双胍组(P<0.05),低剂量SVPr组与二甲双胍组大鼠SCr水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。高剂量SVPr组大鼠BUN、血糖、24 h尿蛋白、SCr水平显著低于中剂量SVPr和低剂量SVPr组,中剂量SVPr组BUN、血糖、24 h尿蛋白、SCr水平显著低于低剂量SVPr组(P<0.05)。模型组大鼠肾组织中ROS、NF-κB水平显著高于对照组(P<0.05);低剂量SVPr组、中剂量SVPr组、高剂量SVPr组和二甲双胍组大鼠肾组织中ROS、NF-κB水平显著低于模型组(P<0.05);高剂量SVPr组大鼠肾组织中ROS、NF-κB水平显著低于二甲双胍组(P<0.05);中剂量SVPr组大鼠肾组织中ROS水平显著高于二甲双胍组(P<0.05),中剂量SVPr组与二甲双胍组大鼠肾组织中NF-κB水平差异无统计学意义(P>0.05);低剂量SVPr组大鼠肾组织中ROS、NF-κB水平显著高于二甲双胍组(P<0.05);高剂量SVPr组大鼠肾组织中ROS、NF-κB水平显著低于中剂量SVPr组和低剂量SVPr组;中剂量SVPr组大鼠肾组织中ROS水平显著低于低剂量SVPr组(P<0.05),中剂量SVPr组与低剂量SVPr组大鼠肾组织中NF-κB水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。模型组大鼠肾组织中SIRT1、Nrf-2、HO-1相对表达量均显著低于对照组(P<0.05);低剂量SVPr组、中剂量SVPr组、高剂量SVPr组和二甲双胍组大鼠肾组织中SIRT1、Nrf-2、HO-1相对表达量显著高于模型组(P<0.05);高剂量SVPr组大鼠肾组织中SIRT1、Nrf-2相对表达量显著高于二甲双胍组(P<0.05),高剂量SVPr组与二甲双胍组大鼠肾组织中HO-1相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05);中剂量SVPr组大鼠肾组织中SIRT1、Nrf-2相对表达量显著高于二甲双胍组,HO-1相对表达量显著低于二甲双胍组(P<0.05);低剂量SVPr组大鼠肾组织中SIRT1相对表达量显著高于二甲双胍组(P<0.05),低剂量SVPr组与二甲双胍组大鼠肾组织中Nrf-2、HO-1相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05);高剂量SVPr组大鼠肾组织中SIRT1、Nrf-2、HO-1相对表达量显著高于中剂量SVPr组和低剂量SVPr组,中剂量SVPr组大鼠肾组织中SIRT1、Nrf-2、HO-1相对表达量显著高于低剂量SVPr组(P<0.05)。结论SVPr可通过上调SIRT1表达来抑制NF-κB转录活性、激活HO-1/Nrf-2抗氧化应激信号,减轻DN大鼠肾损伤。