Antiviral Effects of Stichopus japonicus Acid Mucopolysaccharide on Hepatitis B Virus Transgenic Mice

Hepatitis B virus(HBV) is a significant global pathogen and efficient cure for HBV patients is still a challenging goal. We previously reported that acidic mucopolysaccharide from stichopus japonicus selenka(SJAMP) could inhibit HBs Ag and HBe Ag expression in vitro. However, the potential anti-HBV effects of SJAMP in vivo have not yet been explored. In this study, we show that SJAMP exhibits potent anti-HBV activity in HBV transgenic mice in a dose-dependent manner. Specifically, sixty HBV transgenic male BALB/c mice were randomly selected to receive the treatment of PBS, low dose SJAMP(30 mg kg^(-1)), middle dose SJAMP(40 mg kg^(-1)), high dose SJAMP(50 mg kg^(-1)) and IFN(45 IU kg^(-1)) for 30 d. SJAMP treatment suppressed serum HBV-DNA, and liver HBs Ag and HBc Ag levels in HBV-transgenic mice. The present study highlights the potential application of SJAMP in HBV therapy.

大、小鼠肌肉注射SJAMP的急性毒性

目的 观察大鼠及小鼠肌肉注射刺参酸性粘多糖 (SJAMP)的急性毒性反应。方法 采用简化机率法测定LD50 。结果 小鼠肌肉注射SJAMP的LD50 为 ( 5 98 81± 6 0 81)mg/kg。雄性及雌性小鼠的LD50 分别为 ( 6 5 2 4 2±85 31)和 ( 5 78 16± 88 6 8)mg/kg(P >0 0 5 )。大鼠肌肉注射SJAMP的LD50 为 ( 5 6 6 0 9± 85 17)mg/kg。结论 SJAMP肌肉注射的毒性明显低于其腹腔或静脉注射 ,SJAMP肌肉注射的致死原因主要是出血。

刺参不同部位中主要营养成分分析与评价(英文)

本文对刺参不同部位(体壁、肠和卵)中的主要营养成分进行了研究。结果表明:刺参属于高蛋白质食品,且肠和卵的蛋白质含量高于体壁;富含人体所必需的铜、铁、锰、锌等元素,这些元素更易在肠中富集;δ-维生素E在刺参中含量丰富,以肠中最高;体壁中酸性粘多糖含量较高,为5.03%;氨基酸组成全面,鲜味氨基酸的含量丰富,体壁中羟脯氨酸含量很高,为4.20%,是动物胶原蛋白的主要成分;鉴定出23种脂肪酸,必需脂肪酸含量高,尤其C20∶5 n3(EPA)在肠中高达16.06%。因此,刺参具有较高的营养价值和一定的药用价值。

仿刺参胶原蛋白的提取及理化性质

对仿刺参(Stichopus japonicus)胶原蛋白的提取及理化性质进行了研究。结果表明,低温提取可得到胃蛋白酶促溶且去除端肽(telopeptide)的酸溶性胶原蛋白(PSC)。紫外-可见扫描测得PSC的最大吸收峰位于220nm;氨基酸分析发现,在1 000个总氨基酸残基中,甘氨酸为329个,羟脯氨酸为66个,羟脯氨酸与脯氨酸之比为0.69,酪氨酸、苯丙氨酸及组氨酸的含量较低,可能不含胱氨酸,这些特性均符合Ⅰ型胶原的特征。差示量热扫描法(DSC)测定仿刺参PSC的热稳定性温度(Ts)为57℃,低于牛皮Ⅰ型胶原5℃;苯酚-硫酸及次甲基蓝法测得PSC的总糖及粘多糖含量分别为0.61%及0.48%;经DEAE-52纯化后,可得到除去粘多糖的蛋白纯品。SDS-PAGE显示,本研究所提取的仿刺参PSC不含杂蛋白,主要成分为胶原β及α链,含少量γ链;其中α链类似于脊椎动物Ⅰ型胶原α1链,PSC分子组成为(α1)3。

刺参酸性粘多糖抑制小鼠肿瘤细胞DNA合成及其代谢研究

刺参酸性粘多糖(SJAMP)明显抑制小鼠S180及乳腺癌细胞DNA的合成,对荷瘤小鼠正常肝细胞DNA的合成则具促进作用。以^(35)S-SJAMP进行了小鼠体内的吸收、分布、排泄及药物动力学研究。

刺参粘多糖及考的松对小鼠移植瘤S180的作用

刺参粘多糖(SJAMP)同考的松合用对于小鼠S180实体瘤的生长有明显的抑制作用,该作用与肝素合用考的松的作用相似。由于肝素合用考的松具有抑制肿瘤血管生成的作用,而SJAMP在化学结构和理化特性方面同肝素相似。所以本实验结果提示,SJAMP同考的松合用可能具有抑制肿瘤血管生成的作用。

刺参黏多糖对Hela细胞PCNA表达及细胞周期的影响

目的研究刺参黏多糖(SJAMP)对体外培养的Hela细胞增殖细胞核抗原(PCNA)表达及细胞周期的影响。方法用免疫组织化学法测定SJAMP对体外培养的Hela细胞作用后的PCNA表达水平,用流式细胞术测定细胞周期变化,并与甲氨蝶呤(MTX)比较。结果SJAMP、MTX均可使体外培养的Hela细胞PCNA表达水平明显降低,还可以使细胞周期发生明显的变化,干预组Hela细胞停留在G_1期的比例要比未干预组明显增加(P<0.05),而S、G_2期的细胞比例比未干预组则明显减少(P<0.05)。结论SJAMP有下调Hela细胞PCNA表达水平,阻滞细胞周期的作用。

刺参酸性粘多糖对人血小板超微结构的影响

本文用扫描电镜结合透射电镜观察了6例正常人血小板经刺参酸性粘多糖(Sjamp)作用后的超微结构变化,并以生理盐水作对照。结果表明Sjamp能引起人血小板变形,伸出多个伪足、颗粒“中心化”,开放管道扩张、聚集、溶解等一系列变化,提示Sjamp是一种血小板激活剂。

刺参酸性黏多糖对荷瘤小鼠肝癌组织中细胞凋亡相关蛋白表达的影响

目的观察刺参酸性黏多糖(SJAMP)对荷瘤小鼠肝癌组织中细胞凋亡相关蛋白表达的影响。方法采用肝癌细胞悬液接种法制备荷瘤小鼠50只,随机分为阴性对照组、阳性对照组和SJAMP低、中、高剂量组各10只,分别腹腔注射生理盐水、5-氟尿嘧啶和6.25、12.5、25 mg/kg的SJAMP各0.2 m L,连续12 d。处死小鼠,剥离肿瘤称取质量,计算抑瘤率;HE染色后观察肿瘤组织病理改变;免疫组化法检测肿瘤组织中的促凋亡基因Caspase-3、Caspase-9、细胞色素C、Smac蛋白和抑制凋亡基因Survivin、NF-κB。结果 SJAMP高剂量组抑瘤率高于中、低剂量组(P均<0.05),与阳性对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。病理检查显示,SJAMP中、高剂量组和阳性对照组肝癌细胞排列稀疏,核分裂减少,坏死区明显增多。与阴性对照组比较,SJAMP中、高剂量组和阳性对照组肝癌组织中Caspase-3、Caspase-9、细胞色素C、Smac蛋白表达升高,Survivin、NF-κB表达降低(P均<0.05)。结论中、高剂量刺参酸性黏多糖能够上调促凋亡基因、下调抑制凋亡基因的表达,从而抑制荷瘤小鼠瘤体的生长。

超滤法分离纯化刺参酸性粘多糖工艺研究

探索了超滤法分离纯化刺参酸性粘多糖的工艺。确定分离纯化条件为:采用截留分子量8 kDa的超滤膜,压力为0.3 MPa,温度为10℃。此工艺制得多糖纯度为93.4%、收率为0.32%,多糖截留率达到97.2%。

免疫金标记法研究血小板功能缺陷性疾病

本文利用国产抗血小板膜糖蛋白单克隆抗体分别制备出抗人血小板膜糖蛋白（GPIb、GPⅡb及GPⅢa）的免疫金探针。以此探针检测了9例“刺参诱聚缺陷症”患者及2例血小板无力症患者血小板膜糖蛋白。结果表明“剌参诱聚缺陷症患者”其静息状态下血小板GPIb、GPⅡb正常，GPⅢa低于正常时照组（P＜0．01）。经“剌参”刺激后，GPⅢa仍低于正常（P＜O．01），而经ADP刺激后GPⅢa可恢复正常。血小板无力症患者其静息状态下GPIb正常，GPⅡb、GPⅢa、均低于正常（P＜0.01）。经“刺参”、ADP刺激后GPⅢa、GPⅡb仍低于正常，（P＜O．01）。

刺参酸性粘多糖对诱发性肝癌大鼠的干预作用及免疫功能的影响(英文)

目的:通过建立诱发性大鼠肝癌动物模型,研究用刺参酸性粘多糖(SJAMP)对大鼠诱发性肝癌的干预作用及免疫功能的影响。方法:将雄性Wistar大鼠50只随机均分为5个组,正常对照组、模型组和3个SJAMP干预组(A组,B组和C组),模型组和SJAMP干预组灌胃0.2%DEN生理盐水溶液以诱发肝癌,同时SJAMP干预组按照不同剂量(0.175μg/g,0.35μg/g,0.7μg/g)给予SJAMP,至16周处死大鼠,取血,无菌取脾、胸腺,计算脾指数、胸腺指数。比较各组>3mm和>5mm的结节数以及最大结节的体积,计算肿瘤抑制率。贴壁法纯化巨噬细胞,用中性红吞噬实验检测巨噬细胞吞噬功能,MTT法检测巨噬细胞杀伤功能。结果:SJAMP干预组>3mm和>5mm的结节数明显少于模型组,最大结节的平均体积明显小于模型组(P<0.05);与模型组相比,SJAMP干预组脾指数和胸腺指数明显升高(P<0.05),SJAMP干预组巨噬细胞吞噬能力和杀伤功能显著提高(P<0.05)。结论:刺参酸性粘多糖对大鼠诱发性肝癌有明显的抑制作用;其机制可能是通过刺激免疫器官生长,增强机体的细胞免疫能力来实现的。

刺参酸性粘多糖介导肝素辅因子Ⅱ对凝血酶活性的抑制

目的：进一步澄清刺参酸性粘多糖（Ｓｊａｍｐ）的抗凝血酶机制。方法：用国产Ｓｊａｍｐ作为激动剂，在正常混合血浆体系、纯化的肝素辅因子Ⅱ（ＨＣⅡ）体系以及纯化的抗凝血酶Ⅲ（ＡＴ－Ⅲ）体系研究Ｓｊａｍｐ的抗凝血酶作用机制。结果：Ｓｊａｍｐ对凝血酶的抑制主要呈ＨＣⅡ依赖性，当存在ＨＣⅡ时，Ｓｊａｍｐ抗凝血酶作用的二级速率常数Ｋ２＝１．５６×１０７ｍ－１·ｍｉｎ－１，其抑制速率常数是ＡＴ－Ⅲ的４．６倍。结论：在抗凝血酶作用方面，Ｓｊａｍｐ的效率（Ｋ２值）及机制（ＨＣⅡ依赖性）与硫酸皮肤素类似。

刺参酸性黏多糖联合氟尿嘧啶对H22荷瘤小鼠肿瘤细胞的抑制作用

目的观察刺参酸性黏多糖(SJAMP)联合氟尿嘧啶(5-FU)对H22荷瘤小鼠肿瘤细胞的抑制作用,并对其作用机制进行探讨。方法 50只SPF级昆明种小鼠于右前肢腋部皮下接种H22肝癌细胞悬液,24 h后随机分为5组,分别为空白对照组(生理盐水)、5-FU组(5-FU 20 mg/kg)、SJAMP组(SJAMP 25 mg/kg)、低剂量5-FU+SJAMP组(5-FU 10 mg/kg+SJAMP 25 mg/kg)、高剂量5-FU+SJAMP组(5-FU 20 mg/kg+SJAMP 25 mg/kg)。HE染色观察各组肿瘤组织病理学改变;免疫组织化学方法检测肿瘤组织中PCNA、P53、P21、Cyclin D1及CDK4蛋白的表达水平;Real-time PCR方法检测肿瘤组织中P53、P21、Cyclin D1及CDK4 mRNA的表达水平。结果与空白对照组相比,其余4组荷瘤小鼠肿瘤实体的平均质量均明显减小(P<0.05)。5-FU组及联合用药组抑瘤率均超过50%,高剂量5-FU+SJAMP组抑瘤率高达62.73%。HE染色显示给药组肿瘤细胞排列疏松,细胞质固缩,核质比减小。免疫组化及Real-time PCR结果显示,给药组中与细胞增殖相关基因的PCNA蛋白,P53、Cyclin D1及CDK4蛋白及mRNA的表达较空白对照组中的表达明显减弱(P<0.05),P21蛋白及mRNA的表达明显增强(P<0.05),高剂量5-FU+SJAMP组相关基因mRNA及蛋白变化更加显著(P<0.05)。结论 SJAMP与5-FU均能通过下调PCNA蛋白、P53、Cyclin D1及CDK4蛋白及mRNA的表达、上调P21蛋白及mRNA的表达,达到抑制肿瘤细胞增殖的目的。SJAMP与5-FU合用具有一定的协同作用,能够明显增强抑瘤效果。

刺参酸性黏多糖对H22荷肝癌小鼠肿瘤细胞增殖相关基因表达的影响

目的观察刺参酸性黏多糖(Stichopus japonicus acidic mucopolysaccharide,SJAMP)抑制H22荷肝癌小鼠肿瘤细胞增殖的作用,并探讨其可能机制。方法以H22荷肝癌小鼠为对象,随机分为对照组、5-FU(5-Fluorouracil,氟尿嘧啶20mg/kg)、SJAMP低、中、高剂量(6.25、12.5、25mg/kg)5组。分别采用腹腔注射方式连续给予对应试剂12 d。HE染色观察肿瘤组织病理学改变;分别采用免疫组化法检测肿瘤组织中PCNA、P53、P21、Cyclin D1及CDK4蛋白表达水平;Real-time PCR法检测P53、P21、Cyclin D1及CDK4 mRNA的表达水平。结果 SJAMP各剂量组H22肿瘤组织生长比较缓慢,其中SJAMP高剂量组肿瘤质量与阴性对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。HE染色观察到SJAMP中、高剂量组肿瘤组织较阴性对照组细胞数目少,排列疏松,坏死区多。免疫组化及Real-time PCR结果显示,SJAMP中、高剂量组中与细胞增殖相关基因的PCNA蛋白,P53、Cyclin D1及CDK4蛋白及mRNA的表达较阴性对照组中的表达明显下调(P<0.05),P21蛋白及mRNA的表达明显上调(P<0.05)。结论 SJAMP能够抑制小鼠H22移植瘤的生长。SJAMP发挥抑瘤作用的作用机制可能是其能够调节肿瘤细胞内细胞增殖相关基因与蛋白的表达,以达到抑制肿瘤细胞增殖的目的。[营养学报,2014,36(3):263-267,272]

刺参酸性黏多糖对5-FU治疗小鼠肝癌的减毒增效作用

目的探讨刺参酸性黏多糖(stichopus japonicus acid mucopolysaccharide,SJAMP)联合5-FU对肝癌小鼠肿瘤生长及免疫功能的影响,了解其对化疗药的减毒增效作用。方法将60只小鼠随机分为正常对照组(生理盐水)、空白对照组(生理盐水)、5-FU组〔5-FU 20 mg/(kg·d)〕、SJAMP组〔SLAMP 25 mg/(kg·d)〕、SJAMP+低5-FU组〔SLAMP 25 mg/(kg·d)和5-FU 10 mg/(kg·d)〕和SJAMP+高5-FU组〔SLAMP 25 mg/(kg·d)和5-FU20mg/(kg·d)〕。除正常对照组外其他各组均于右腋皮下接种H22(Hepatocarcinoma22)细胞。接种后第2天开始给药,连续给药12d后处死小鼠,计算抑瘤率、胸腺指数和脾脏指数,ELISA检测血清TNF-α和IL-2含量,中性红法检测腹腔巨嗜细胞吞噬功能,CCK-8法测定脾脏淋巴细胞增殖能力,MTT法测NK细胞杀伤功能,流式细胞术检测小鼠外周血T细胞亚群。结果各干预组小鼠肿瘤生长明显受到抑制,SJAMP+高5-FU组抑瘤率(62.73%)高于5-FU组(55.53%),P=1.000。SJAMP组和SJAMP+低5-FU组小鼠脾脏指数显著高于其他组,P值均<0.05。SJAMP组和SJAMP+低5-FU组小鼠胸腺指数分别为(2.19±1.18)和(2.13±1.00)mg/g,高于5-FU组的(1.14±0.53)mg/g,P值分别为0.026和0.048;也高于SJAMP+高5-FU组的(1.07±0.49)mg/g,P值分别为0.011和0.020。各药物干预组TNF-α较空白对照组均降低,P值均<0.001。和空白对照组(33.27±6.13)相比,5-FU组(23.52±3.31)血清IL-2水平明显降低,P<0.001;SJAMP组(39.56±2.39)血清IL-2水平显著提高,P=0.001。与5-FU组相比,SJAMP组和联合用药组IL-2明显提高,P值均<0.001。SJAMP组和SJAMP+低5-FU组腹腔巨嗜细胞吞噬中性红能力显著高于正常对照组、空白对照组、5-FU组和SJAMP+高5-FU组,P值均<0.001;SJAMP+高5-FU组与5-FU组相比明显提高,P=0.012。SJAMP组和SJAMP+低5-FU组脾脏淋巴细胞增殖能力显著高于正常对照组(P值均<0.001)、空白对照组(P值均<0.001)、5-FU组(P值均<0.001)和SJAMP+高5-FU组(P值分别为0.005和0.011);SJAMP+高5-FU组与5-FU组相比明显提高,P=0.005。SJAMP组和SJAMP+低5-FU组NK细胞杀伤能力高于5-FU组,P值分别为0.002和0.030。空白对照组和5-FU组CD3+CD4+与CD3+CD8+细胞比值低于正常对照组(P值均<0.001)、SJAMP组(P值分别为0.001和<0.001)和SJAMP+低5-FU组(P值分别为0.003和0.024),SJAMP+高5-FU组高于5-FU组(P=0.329)。结论 SJAMP能够增强5-FU对肿瘤的抑制作用,减少5-FU对小鼠免疫功能的损伤。

刺参黏多糖诱导人肝癌细胞凋亡的实验研究

目的观察刺参酸性黏多糖（SJAMP）体外诱导人肝癌细胞HepG2凋亡的情况，并初步探讨SJAMP对HepG2细胞中Bcl-2和nm23-H1表达有何作用，为其能否应用于肝癌的临床冶疗提供理论依据和可行性评估。方法体外培养人肝癌细胞HepG2，用不同浓度的刺参黏多糖（0．25、0．5、1．0、2．0、4．0g／L）培养人肝癌细胞HepG2。采用细胞毒试验（MTT法）检测HepG2细胞抑制率，蛋白印迹法（western blot）检测相关蛋白Bcl-2和nm23-H1的变化。结果（1）MTT细胞毒试验证实SJAMP能明显抑制人肝癌细胞HepG2细胞的生长，且呈时间和浓度依赖性。（2）western blot试验中，与空白组相比，SJAMP处理组、对照组（5-FU）及共同作用组HepG2细胞中Bcl-2蛋白表达均明显降低（P〈0．05），nm23-HI蛋白的表达则明显升高（P〈0．05）。结论（1）SJAMP可通过抑制细胞增生并诱导凋亡来抑制人肝癌细胞HepG2的生长；（2）SJAMP可诱导人HepG2细胞中Bcl-2和nm23-H1蛋白含量的改变来发挥其抗肿瘤作用。

刺参酸性粘多糖对H22肝癌小鼠免疫功能的影响(英文)

目的:刺参酸性粘多糖作为一种天然生物活性物质,具有较强抗肿瘤作用。本研究观察刺参酸性粘多糖对荷瘤小鼠免疫功能的影响,以探讨刺参酸性粘多糖的抗肿瘤作用机制。方法:皮下接种H22小鼠肝癌细胞,建立移植瘤小鼠模型。将50只荷瘤小鼠随机分为五组(阴性对照组、氟尿嘧啶组、SJAMP低剂量组、SJAMP中剂量组、SJAMP高剂量组),腹腔注射不同剂量刺参酸性粘多糖,每日一次,连续12天。眼球摘除取血后颈椎脱臼处死小鼠,计算抑瘤率和脏器指数,中性红法测定小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能,CCK-8法测定小鼠脾淋巴细胞增殖能力,ELISA法测定小鼠血清TNF-α水平。结果:SJAMP能够明显抑制肿瘤生长(P<0.05);与5-FU组相比,SJAMP干预组脾指数和胸腺指数明显升高(P<0.05),腹腔巨噬细胞吞噬能力和脾脏淋巴细胞增殖功能显著提高(P<0.05),TNF-α的血清含量显著减少(P<0.05)。结论:刺参酸性粘多糖通过促进免疫器官生长,增强机体的免疫功能,抑制小鼠H22肝癌生长。这为SJAMP的抗肿瘤作用研究提供了试验依据和理论基础。